重组酶删除载体的构建及其在动物细胞中的应用

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重组酶删除载体的构建及其在动物细胞中的应用

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重组酶删除载体的构建及其在动物细胞中的应用

论文目录
摘要	第1-9页
Abstract	第9-11页
1 前言	第11-23页
· 文献综述	第11-22页
· 常用的选择标记基因及特点	第11-12页
· EGFP—超级标记物	第12-13页
· GFP的来源、生化特性及其发光机理	第12页
· GFP的突变体	第12-13页
· GFP的细胞毒性	第13页
· 选择标记基因的安全性问题	第13-14页
· 标记基因的生物安全性评价研究进展	第14-16页
· 标记基因的直接食品安全性	第14-15页
· 标记基因编码蛋白的食品安全性	第15-16页
· 标记基因的环境安全性	第16页
· 转基因食品中标记基因的去除	第16页
· 位点特异性重组系统	第16-21页
· 位点特异性重组系统的结构及功能特点	第16-18页
· Cre/loxP系统的结构特点	第18-20页
· 位点特异性重组酶Cre/loxP系统的应用	第20-21页
· 核糖体内部进入位点概况	第21-22页
· 研究的目的和意义	第22-23页
2 材料与方法	第23-41页
· 主要试剂	第23-25页
· 质粒构建及PCR检测	第23页
· 主要仪器	第23-24页
· 主要试剂的配制	第24页
· 质粒构建和PCR检测	第24页
· 主要分析软件	第24-25页
· 实验方法	第25-41页
· 重组质粒骨架pMD-CreFlp的构建	第25-28页
· 融合重组酶识别位点的生物合成	第25页
· 融合重组酶识别位点的TA克隆	第25-27页
· pMD-CreFlp骨架载体质粒DNA的提取	第27-28页
· 骨架载体中选择标记基因等元件的连入	第28-32页
· 选择标记基因及相关元件的克隆	第29-30页
· 载体质粒信息介绍	第30-32页
· 转染用无内毒素质粒的提取	第32-33页
· 转染用线性化质粒的制备	第33-34页
· 线性化质粒	第33-34页
· 线性化质粒的纯化	第34页
· 细胞培养实验	第34-41页
· 细胞培养基本操作	第34-35页
· G418筛选浓度确定试验	第35页
· 转染细胞及G418筛选试验	第35页
· 单克隆细胞的获得	第35-37页
· FRT重组酶删除实验	第37页
· 转染重组酶质粒细胞删除效果的检测	第37-39页
· 流式细胞仪检测细胞删除效果	第39-41页
3 结果与分析	第41-53页
· 含重组酶删除位点的骨架载体pMD-CreFlp构建	第41页
· 载体骨架中选择标记基因及相关元件的连接	第41-42页
· 转染用无内毒素质粒制备	第42-44页
· 猪肾上皮细胞培养及重组酶删除质粒的转染结果	第44页
· 单克隆细胞培养结果	第44-53页
· G418筛选浓度的确立	第44-46页
· 单克隆细胞的筛选	第46页
· 单克隆细胞的纯化与富集	第46-47页
· Flp重组酶质粒的转染,细胞总RNA提取及反转录结果	第47-48页
· 荧光定量PCR检测	第48-51页
· 流式细胞仪检测	第51-53页
4 讨论	第53-57页
· 外源基因的有效删除	第53页
· 删除试验细胞株的选择	第53-54页
· 单克隆细胞的筛选	第54-55页
· 筛选前G418浓度的确定	第54页
· 加药时间和维持浓度	第54-55页
· 筛选时的培养液	第55页
· 单克隆细胞的纯化和富集	第55-56页
· 影响重组酶删除试验的因素	第56-57页
5 结论	第57-58页
致谢	第58-60页
参考文献	第60-64页
攻读硕士学位期间发表的学术论文	第64页

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