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抗肿瘤新药—豹蛙酶在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化
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抗肿瘤新药—豹蛙酶在大肠杆菌中的克隆表达及分离纯化
论文目录
 
学位论文数据集第1-4 页
摘要第4-6 页
ABSTRACT第6-8 页
目录第8-11 页
第一章 绪论第11-27 页
　　· 豹蛙酶的研究现状第11-14 页
　　　　· 豹蛙酶化学结构和稳定性第11-12 页
　　　　· 豹蛙酶抗肿瘤作用机制第12-13 页
　　　　· 豹蛙酶与其它药物的协同作用、免疫调节和抗病毒作用第13-14 页
　　· 豹蛙酶的生产方法第14-15 页
　　　　· 天然提取法第14 页
　　　　· 基因工程方法第14-15 页
　　· 重组质粒的构建第15-17 页
　　　　· 载体的选择第15 页
　　　　· 目标片段的克隆第15-17 页
　　· 大肠杆菌表达系统简介第17-23 页
　　　　· 以大肠杆菌为宿主基因表达的策略第17 页
　　　　· 重组蛋白在大肠杆菌中表达的影响因素第17-19 页
　　　　· 选择宿主和控制培养条件第19-20 页
　　　　· 重组蛋白在大肠杆菌中的表达模式第20-23 页
　　· 重组蛋白的分离纯化技术第23-27 页
　　　　· 层析方法的选择第23-24 页
　　　　· 离子交换层析第24 页
　　　　· 凝胶过滤层析第24-25 页
　　　　· 其他方法第25-27 页
第二章 豹蛙酶基因的克隆第27-39 页
　　· 引言第27 页
　　· 实验材料与仪器第27-28 页
　　　　· 实验材料第27-28 页
　　　　　　· 菌种与质粒第27 页
　　　　　　· 培养基第27-28 页
　　　　　　· 试剂第28 页
　　　　· 实验仪器第28 页
　　· 实验方法第28-33 页
　　　　· 引物设计及合成第28-29 页
　　　　· PCR扩增第29-30 页
　　　　　　· 反应体系第29-30 页
　　　　　　· 扩增程序第30 页
　　　　· PCR产物回收(试剂盒)第30-31 页
　　　　· 连接第31 页
　　　　· 感受态细胞的制备(氯化钙法)第31 页
　　　　· 转化第31-32 页
　　　　· 质粒提取(碱裂解法)第32 页
　　　　· 酶切鉴定第32-33 页
　　　　· 基因测序鉴定第33 页
　　　　· 表达载体pET-22b-onconase的构建第33 页
　　· 结果分析与讨论第33-38 页
　　　　· PCR产物琼脂糖凝胶电泳第33-34 页
　　　　· PCR鉴定第34-35 页
　　　　· 测序鉴定第35-36 页
　　　　· 表达载体pET-22b-onconase的构建第36-38 页
　　　　　　· 表达载体pET-22b-onconase构建图谱第36-37 页
　　　　　　· 克隆及表达载体酶切产物琼脂糖凝胶电泳第37-38 页
　　· 本章小结第38-39 页
第三章 重组豹蛙酶基因工程菌培养条件的优化第39-53 页
　　· 引言第39 页
　　· 试验材料与仪器第39-41 页
　　　　· 试验材料第39-40 页
　　　　　　· 菌种第39-40 页
　　　　　　· 培养基与试剂第40 页
　　　　· 实验仪器第40-41 页
　　· 实验方法第41-42 页
　　　　· 菌种活化第41 页
　　　　· 菌种培养第41 页
　　　　· 不同菌种的选择第41-42 页
　　· 发酵过程各因素的影响第42-43 页
　　　　· 培养时间第42 页
　　　　· 诱导条件第42-43 页
　　　　　　· 诱导温度第42 页
　　　　　　· 诱导时间第42 页
　　　　　　· 诱导剂浓度第42-43 页
　　　　　　· 氨苄青霉素浓度第43 页
　　· 分析方法第43 页
　　　　· 菌体浓度的测定第43 页
　　　　· SDS-PAGE分析目标蛋白表达量第43 页
　　· 结果与讨论第43-51 页
　　　　· 不同菌种融合蛋白表达分析第43-44 页
　　　　· 基因工程菌的生长第44-45 页
　　　　· 不同诱导条件对融合蛋白表达量的影响第45-51 页
　　　　　　· 不同诱导温度对融合蛋白表达量的影响第45-47 页
　　　　　　· 不同诱导时间对融合蛋白表达量的影响第47-48 页
　　　　　　· IPTG浓度对融合蛋白表达量的影响第48-49 页
　　　　　　· 氨苄青霉素浓度对融合蛋白表达量的影响第49-51 页
　　· 小结第51-53 页
第四章 重组豹蛙酶的分离纯化第53-65 页
　　· 引言第53 页
　　· 实验材料和仪器第53-54 页
　　　　· 实验材料第53 页
　　　　· 实验仪器第53-54 页
　　· 实验方法第54-58 页
　　　　· 重组豹蛙酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)内的分布第54-56 页
　　　　　　· 细胞总蛋白(TCP)组分第54-55 页
　　　　　　· 培养基组分第55 页
　　　　　　· 细胞周质组分第55-56 页
　　　　　　· 细胞质可溶部分组分第56 页
　　　　　　· 细胞质不溶组分第56 页
　　　　· 重组豹蛙酶的分离纯化第56-58 页
　　　　　　· 包涵体的提取第56-57 页
　　　　　　· 包涵体的变性与复性第57 页
　　　　　　· 柱层析与酶切第57-58 页
　　　　· LC-ESI-MS/MS鉴定豹蛙酶第58 页
　　· 分析方法第58-59 页
　　　　· SDS-PAGE凝胶电泳第58 页
　　　　· 蛋白浓度的测定第58-59 页
　　　　· 豹蛙酶活性的测定第59 页
　　· 结果与分析第59-64 页
　　　　· 重组豹蛙酶在菌体中的分布第59-61 页
　　　　· 重组豹蛙酶的分离纯化第61 页
　　　　· 重组豹蛙酶的活性鉴定第61-62 页
　　　　· LC-ESI-MS/MS鉴定豹蛙酶第62-64 页
　　· 小结第64-65 页
第五章 结论与建议第65-67 页
　　· 结论第65-66 页
　　· 建议第66-67 页
参考文献第67-71 页
附录第71-75 页
致谢第75-76 页
攻读学位期间发表的学术论文目录第76-77 页
作者和导师简介第77-78 页
北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书第78-79页

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