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胃癌侵袭转移相关功能基因的研究

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胃癌侵袭转移相关功能基因的研究
论文目录
 
目录第1-8页
图表索引第8-10页
英文缩略词第10-11页
中文摘要第11-14页
英文摘要第14-16页
第一部分 胃癌侵袭转移相关基因LOXL2的研究第16-81页
  摘要第16-17页
  前言第17-20页
  材料和方法第20-48页
    一.实验材料第20-38页
      ·组织标本第20-30页
      ·细胞系和实验动物第30页
        · 细胞系及培养条件第30页
        · 实验动物及饲养条件第30页
      ·菌株与质粒第30-31页
        · 菌株第30-31页
        · 质粒第31页
      ·主要试剂第31-35页
        · 试剂盒第31-32页
        · 抗体第32页
        · 酶类第32-33页
        · DNA RNA和蛋白质分子量标志第33页
        · 常用试剂及耗材第33-35页
      ·PCR引物(由Invitrogen公司合成)第35页
        · RT-PCR引物第35页
        · LOXL2克隆引物第35页
      ·siRNA靶向序列第35页
      ·多肽第35-36页
      ·主要仪器第36页
      ·计算机分析软件第36-38页
    二.实验方法第38-48页
      ·RT-PCR分析第38-39页
        · 总RNA提取第38页
        · 逆转录第38-39页
        ·PCR检测第39页
      ·Western blotting和免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation,Co-IP)实验第39-41页
        · 细胞总蛋白的提取第39页
        · 蛋白定量第39-40页
        · SDS-PAGE凝胶电泳和蛋白印迹第40页
        · 目的蛋白的检测第40-41页
        · Co-IP第41页
      ·免疫组织化学检测第41-42页
      ·质粒构建、细菌转化及质粒提取第42-44页
        · 目的基因的定向克隆及鉴定第42页
        · 细菌的转化第42页
        · 使用试剂盒提取质粒DNA第42-43页
        · 使用Nucleobond Plasmid质粒提取试剂盒提取大量质粒第43-44页
      ·细胞体外实验第44-46页
        · 哺乳动物细胞转染第44页
        · 细胞增殖分析第44-45页
        · Transwell侵袭分析第45页
        · 细胞基质粘附实验第45页
        · 细胞周期检测第45-46页
        · 细胞凋亡检测第46页
      ·Microarray分析第46页
      ·动物实验第46-47页
        · 裸鼠致瘤实验第46-47页
        · 自发转移第47页
        · 抗体动物治疗实验第47页
      ·统计方法第47-48页
  实验结果第48-74页
    一.胃癌侵袭模型的建立及其相关基因的筛选第48-50页
      ·体外侵袭筛选建立高侵袭的胃癌细胞系PAMC82-P3和SNU5-P3第48页
      ·基因芯片分析高侵袭细胞亚系和亲本细胞表达谱差异第48-50页
    二.LOXL2的细胞表达谱分析以及LOXL2多克隆抗体的制备第50-52页
      ·LOXL2在PAMC82侵袭转移模型中的表达第50-51页
      ·LOXL2细胞表达谱及与胃癌细胞侵袭能力的相关性分析第51-52页
      ·抗人LOXL2兔多克隆抗体的制备第52页
    三.LOXL2在临床胃癌组织标本中的表达情况第52-57页
      ·LOXL2在胃癌/癌旁配对组织芯片中的表达情况第52-54页
      ·LOXL2在胃癌/转移淋巴结配对组织芯片中的表达情况第54-55页
      ·LOXL2在具有完整预后临床治疗的胃癌原发瘤组织标本的表达情况第55-57页
    四.RNAi敲降LOXL2能够抑制胃癌细胞的侵袭、粘附以及转移能力第57-64页
      ·LOXL2 shRNA质粒构建及细胞转染第57-59页
        · LOXL2 shRNA质粒构建第57页
        · LOXL2 shRNA质粒转染胃癌细胞系及其表达第57-59页
        · 稳定转染表达细胞的筛选与鉴定第59页
      ·LOXL2 RNAi对于胃癌细胞体外生物学行为的影响第59-62页
        · LOXL2 RNAi对于胃癌细胞增殖、凋亡的影响第59-60页
        · LOXL2 RNAi对于胃癌细胞侵袭的影响第60-61页
        · LOXL2 RNAi对于胃癌细胞同细胞外基质粘附能力的影响第61-62页
      ·LOXL2 RNAi对于胃癌细胞体内侵袭转移能力的影响第62-64页
        · LOXL2 RNAi对于BGC823移植瘤生长的影响第62-64页
        · LOXL2 RNAi对于BGC823肿瘤自发转移的影响的影响第64页
    五.LOXL2转染能够促进胃癌细胞的侵袭能力第64-66页
      ·LOXL2表达载体的构建第64-65页
      ·LOXL2在胃癌细胞系N87中的表达及稳定表达细胞的筛选第65-66页
      ·LOXL2过表达对胃癌细胞侵袭能力的影响第66页
    六.LOXL2抗体能够抑制胃癌细胞的侵袭、粘附以及转移能力第66-69页
      ·LOXL2抗体处理对于胃癌细胞体外侵袭以及粘附能力的影响第66页
      ·LOXL2抗体治疗对于胃癌细胞体内侵袭转移能力的影响第66-69页
        · LOXL2抗体治疗对于BGC823移植瘤生长的影响第67-68页
        · LOXL2抗体治疗对于BGC823移植瘤侵袭以及自发肺转移的影响第68-69页
    七.分泌型的LOXL2促进胃癌侵袭分子机制方面的研究第69-74页
      ·分泌型的LOXL2促进胃癌细胞侵袭是通过Src/FAK信号通路第69-72页
      ·分泌型的LOXL2激活Src是依赖于过氧化氢的产生第72-74页
  讨论第74-79页
  小结第79-81页
第二部分 预示胃癌病人生存期标志物的筛选及鉴定第81-105页
  前言第81-83页
  材料和方法第83-89页
    一.实验材料第83-87页
      ·组织标本第83-86页
      ·主要试剂第86-87页
        · 试剂盒第86页
        · 抗体第86页
        · 常用试剂及耗材第86-87页
    二.实验方法第87-89页
      ·免疫组织化学检测第87页
      ·Microarray分析第87页
      ·统计方法第87-89页
  实验结果第89-101页
    一.侵袭芯片差异基因的初步分析以及候选基因的挑选第89页
    二.对候选基因进行验证,获得与胃癌临床参数相关的基因第89-99页
      ·S100A14染色与胃癌临床参数的相关性分析第90-93页
      ·CAPG染色与胃癌临床参数的相关性分析第93-95页
      ·LGALS1染色与胃癌临床参数的相关性分析第95-97页
      ·IER3染色与胃癌临床参数的相关性分析第97-99页
    三.分析S100A14和LGALS1与胃癌pN0期病人预后的相关性第99页
    四.分析S100A14和LGALS1预测pN0期病人预后的敏感性以及特异性第99-101页
  讨论第101-104页
  小结第104-105页
结论第105-107页
论文综述一第107-122页
论文综述一第122-128页
参考文献第128-137页
致谢第137-138页
附录第138-139页
个人简历第139-140页

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