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SARS冠状病毒S蛋白抗原表位分析与定位研究

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SARS冠状病毒S蛋白抗原表位分析与定位研究
论文目录
 
引言第15-31页
  1 SARS-CoV的形态结构第15-16页
  2 SARS-CoV的病原学与分类第16-17页
  3 SARS-CoV的基因组研究进展第17-19页
  4 SARS-CoV的受体第19-20页
  5 SARS-CoV的包装信号第20页
  6 SARS-CoV基因组编码蛋白第20-24页
  7 SARS-CoV S蛋白抗原表位的研究进展第24-25页
  8 SARS-CoV N蛋白抗原表位的研究进展第25页
  9 SARS的免疫学及分子生物学诊断方法研究进展第25-28页
  10 SARS防治研究进展第28-30页
  11 存在的问题与展望第30页
  12 本研究目的与意义第30-31页
研究报告第31-98页
  实验一 SARS冠状病毒结构蛋白表位预测及多表位嵌合基因的构建与表达第31-42页
    1 材料与方法第33-34页
      · 菌株与质粒第33页
      · 酶与标记物第33页
      · 抗SARS-CoV血清第33页
      · 结构蛋白抗原表位的预测第33页
      · 嵌合基因的设计与合成第33-34页
      · pGEX-SSCV融合表达载体的构建第34页
      · 重组质粒的原核表达与纯化第34页
      · Western biot检测融合蛋白与SARS康复病人血清的免疫反应性第34页
    2 结果第34-41页
      · 结构蛋白特性分析及表位预测第34-37页
      · 嵌合基因的设计第37-39页
      · 融合表达质粒的构建第39页
      · GST-SSCV融合蛋白的表达第39-40页
      · GST-SSCV融合蛋白的纯化第40-41页
      · 融合蛋白的免疫反应性第41页
    3 讨论第41-42页
  实验二 SARS冠状病毒单克隆抗体的制备及表位鉴定第42-53页
    1 材料与方法第42-45页
      · 单克隆抗体的制备第42-43页
      · 表达S蛋白预测表位寡核苷酸链的设计第43页
      · 表达覆盖S2和S5的9氨基酸短肽系列的设计第43页
      · 预测表位及9肽的融合表达第43-44页
      · 酶联免疫吸附试验(ELISA)第44-45页
      · 免疫印迹试验(Western blot)第45页
    2 结果第45-51页
      · 预测表位及9肽融合蛋白的表达第45页
      · 重组多表位融合蛋白GST—D免疫印迹检测结果第45页
      · 预测表位融合蛋白GST—S2和GST—S5免疫印迹检测结果第45-46页
      · 单克隆抗体的制备与鉴定第46-48页
      · 单克隆抗体的表位鉴定第48页
      · 单克隆抗体表位的精确定位第48-51页
    3 讨论第51-53页
  实验三 SARS冠状病毒S蛋白单克隆抗体2C5识别表位的鉴定第53-65页
    1 材料与方法第53-58页
      · 噬菌体随机肽库、菌株和单克隆抗体第53-54页
      · 其它试剂与材料第54页
      · 主要试剂的配制第54页
      · 噬菌体的滴定第54-55页
      · 噬菌体肽库的亲和筛选第55-56页
      · 筛选噬菌体的克隆和扩增第56-57页
      · 噬菌体序列的测定第57页
      · 噬菌体ELISA第57页
      · 噬菌体竟争抑制ELISA第57页
      · 多肽的融合表达与融合蛋白的纯化第57-58页
      · 融合蛋白与单克隆抗体2C5的ELISA分析第58页
      · 融合蛋白与鸡抗SARS冠状病毒血清的Western blot分析第58页
    2 结果第58-63页
      · 噬菌体肽库的筛选第58-59页
      · 噬菌体的克隆与结合分析第59-60页
      · 噬菌体展示序列的测定与分析第60-61页
      · 噬菌体的竟争ELISA第61-62页
      · 短肽的融合表达与纯化第62页
      · 融合蛋白的免疫反应性第62-63页
    3 讨论第63-65页
  实验四 SARS冠状病毒S蛋白S1部分的表达与免疫分析第65-74页
    1 材料与方法第66-68页
      · 质粒、菌种及SARS基因第66页
      · 血清、抗体及试剂第66页
      · S1、S1N、S1C及SRBD基因片段的PCR扩增第66-67页
      · S1、S1N、S1C及SRBD片段表达质粒的构建第67页
      · 重组质粒的诱导表达第67页
      · 表达产物的Western blot分析第67-68页
      · 表达产物的ELISA分析第68页
    2 结果第68-72页
      · PCR扩增第68页
      · 重组质粒的构建与鉴定第68页
      · 重组质粒的诱导表达第68-71页
      · 表达产物的Western blot分析第71页
      · 表达产物的ELISA分析第71-72页
    3 讨论第72-74页
  实验五 SARS冠状病毒S1蛋白主要抗原决定区的表位作图第74-86页
    1 材料与方法第75-79页
      · 质粒怀菌株第75页
      · 酶与标记物第75页
      · 抗SARS-CoV阳性血清及真核表达S蛋门抗原第75页
      · 短肽融合蛋白的设计第75-78页
      · 短肽融合蛋白表达质粒的构建及表达纯化第78页
      · 鼠抗融合蛋白血清的制备第78页
      · Western blot第78页
      · ELISA第78-79页
      · 动物免疫第79页
      · 间接免疫荧光试验第79页
    2 结果第79-85页
      · 短肽融合蛋白的表达与纯化第79-80页
      · 抗原表位作图第80-83页
      · 抗原表位的免疫原性第83页
      · 抗表位单因子血清的特性第83-85页
    3 讨论第85-86页
  实验六 SARS冠状病毒S蛋白受体结合结构域的表达及表位作图第86-98页
    1 材料和方法第86-91页
      · 质粒与菌株第86页
      · 酶与标记物第86-87页
      · 抗SARS-CoV阳性血清第87页
      · pGEX-SRBD融合表达载体的构建与表达第87页
      · 短肽融合蛋白的设计与表达纯化第87-90页
      · 短肽融合蛋白表达质粒的构建及表达纯化第90页
      · 鼠抗融合蛋白GST-SRBD和GST-SRBD3血清的制备第90-91页
      · Western blot第91页
      · ELISA第91页
    2 结果第91-96页
      · 受体结合结构域的融合表达与免疫印迹分析第91-93页
      · 短肽融合蛋白的表达与纯化第93-94页
      · 短肽融合蛋白的Western blot分析与ELSIA分析第94-95页
      · SRBD3的免疫原性第95-96页
      · 受体结构区抗原表位作图结果第96页
    3 讨论第96-98页
结论第98-99页
参考文献第99-116页
致谢第116-117页
作者简介第117-118页

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