论文目录 | |
| 中文摘要 | 第10-12
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| 英文摘要 | 第12-15
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| 1 引言 | 第15-39
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| · 研究的目的和意义 | 第15-16
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| · 鸡传染性法氏囊病病毒分子生物学研究进展 | 第16-24
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| · IBDV基因组及结构蛋白功能 | 第16-22
页 |
| · 5'-NCR和13’-NCR | 第18
页 |
| · VP1蛋白 | 第18-19
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| · VP2蛋白 | 第19-20
页 |
| · VP3蛋白 | 第20
页 |
| · VP4蛋白 | 第20-21
页 |
| · VP5蛋白 | 第21-22
页 |
| · IBDV的形态结构 | 第22-23
页 |
| · IBDV的复制 | 第23-24
页 |
| · 鸡传染性法氏囊病预防与疫苗研究进展 | 第24-26
页 |
| · RNAi研究进展 | 第26-39
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| · RNAi概述 | 第26-27
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| · RNAi的分子机制 | 第27-32
页 |
| · RNAi的应用 | 第32-34
页 |
| · 功能基因组的研究 | 第32
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| · 在其它基础研究领域 | 第32
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| · 疾病治疗 | 第32-34
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| · RNAi的局限性及应用前景 | 第34-36
页 |
| · siRNA的导入问题 | 第34-35
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| · 病毒逃避问题 | 第35-36
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| · siRNA的应用前景 | 第36
页 |
| · RNAi在动物病毒中的应用 | 第36-39
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| 2 材料与方法 | 第39-51
页 |
| · 材料 | 第39-41
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| · 毒株和细胞 | 第39
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| · 菌株、载体与质粒 | 第39
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| · 主要试剂 | 第39-40
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| · 主要仪器 | 第40-41
页 |
| · 试验方法 | 第41-51
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| · siRNA的设计与合成 | 第41-43
页 |
| · siRNA的体外转录 | 第43
页 |
| · siRNA转染Vero细胞及IBDV的感染 | 第43
页 |
| · shRNA表达载体的构建 | 第43-44
页 |
| · VP1 shRNA表达载体的构建 | 第43-44
页 |
| · VP3 shRNA表达载体的构建 | 第44
页 |
| · shRNA表达质粒的转染及IBDV的感染 | 第44-45
页 |
| · VP3-EGFP、VP5-EGFP融合蛋白表达载体的构建 | 第45-46
页 |
| · 表达IBDV VP5稳定细胞系的筛选 | 第46-47
页 |
| · 真核表达质粒pcDNA3.1-VP5的构建 | 第46-47
页 |
| · pcDNA3.1-VP5转染及稳定细胞系的筛选 | 第47
页 |
| · 稳定细胞系的IFA检测 | 第47
页 |
| · 稳定细胞系的RT-PCR鉴定 | 第47
页 |
| · 病毒蚀斑法检测 | 第47-48
页 |
| · 荧光定量PCR法检测 | 第48-50
页 |
| · 流式细胞仪检测 | 第50
页 |
| · 统计方法 | 第50-51
页 |
| 3 结果与分析 | 第51-67
页 |
| · 质粒介导的RNA干扰抑制IBDV复制的研究 | 第51-57
页 |
| · 通过体外转录方法筛选有效的siRNA | 第51-54
页 |
| · 体外转录法合成siRNA | 第51
页 |
| · 病毒蚀斑形成试验检测体外转录siRNA对IBDV复制抑制效果 | 第51
页 |
| · 荧光定量PCR检测VP1基因mRNA的表达变化 | 第51-54
页 |
| · shRNA表达载体对IBDV复制抑制的研究 | 第54-57
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| · VP1 shRNA表达载体的构建 | 第54-55
页 |
| · 病毒蚀斑形成试验检测shRNA表达载体抑制IBDV复制 | 第55-56
页 |
| · 荧光定量PCR检测shRNA表达载体抑制IBDV复制 | 第56
页 |
| · IFA检测shRNA表达载体抑制IBDV VP1蛋白表达 | 第56-57
页 |
| · IBDV VP3 siRNA的筛选及其在病毒复制中的作用 | 第57-62
页 |
| · 通过体外转录方法筛选有效的siRNA | 第57-60
页 |
| · 体外转录法合成siRNA | 第57-58
页 |
| · pEGFP-VP3重组质粒的鉴定 | 第58
页 |
| · VP3 siRNA抑制VP3-EGFP融合蛋自的表达 | 第58-60
页 |
| · VP3蛋白在IBDV复制中的作用 | 第60-62
页 |
| · VP3 shRNA表达载体的构建 | 第60-61
页 |
| · pEC324-shRNA抑制IBDV复制 | 第61-62
页 |
| · 荧光定量PCR检测VP2和VP3 mRNA的表达变化 | 第62
页 |
| · IBDV VP5 siRNA的筛选及VP5蛋白对病毒复制的影响 | 第62-67
页 |
| · 体外转录法合成siRNA | 第62-63
页 |
| · pEGFP-VP5重组质粒的鉴定 | 第63
页 |
| · IBDV VP5稳定表达Vero细胞系的筛选 | 第63-65
页 |
| · VP5 siRNA抑制VP5-EGFP融合蛋白的表达 | 第65
页 |
| · VP5 siRNA抑制稳定表达VP5 Vero细胞系的表达 | 第65-66
页 |
| · VP5蛋白对IBDV复制的影响 | 第66-67
页 |
| 4 讨论 | 第67-75
页 |
| · 质粒介导的RNA干扰抑制IBDV复制的研究 | 第67-70
页 |
| · IBDV VP3 siRNA的筛选及其在病毒复制中的作用 | 第70-72
页 |
| · IBDV VP5 siRNA的筛选及VP5蛋白对病毒复制的影响 | 第72-75
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| 5 结论 | 第75-76
页 |
| 致谢 | 第76-77
页 |
| 参考文献 | 第77-95
页 |
| 附录 | 第95-97
页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第97页 |
