论文目录 | |
| 中英文缩略表 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 植物激素乙烯 | 第15-24页 |
| 1.1.1 乙烯的生物合成 | 第15-17页 |
| 1.1.2 乙烯的感知和信号途径 | 第17-20页 |
| 1.1.3 乙烯的作用 | 第20-24页 |
| 1.2 植物中的EIN3/EILs转录因子 | 第24-26页 |
| 1.2.1 EIN3/EILs转录因子的结构特点 | 第24-25页 |
| 1.2.2 EIN3/EILs的生物化学调控功能 | 第25-26页 |
| 1.3 叶片衰老 | 第26-32页 |
| 1.3.1 叶片衰老过程中变化 | 第27-28页 |
| 1.3.2 叶片衰老的影响因素 | 第28-29页 |
| 1.3.3 激素诱导的叶片衰老过程中的基因变化 | 第29-31页 |
| 1.3.4 环境诱导的叶片衰老过程中的基因变化 | 第31-32页 |
| 1.4 植物中BTB-TAZ蛋白 | 第32-34页 |
| 1.4.1 BTB-TAZ蛋白功能 | 第33页 |
| 1.4.2 BTB-TAZ蛋白与信号 | 第33-34页 |
| 1.5 研究的目的和意义 | 第34-35页 |
| 2 材料和方法 | 第35-58页 |
| 2.1 材料 | 第35-37页 |
| 2.1.0 植物材料及其培养和处理 | 第35页 |
| 2.1.1 菌株 | 第35页 |
| 2.1.2 载体 | 第35页 |
| 2.1.3 酶、抗生素、试剂和药品 | 第35-36页 |
| 2.1.4 引物 | 第36页 |
| 2.1.5 培养基配方 | 第36-37页 |
| 2.1.6 抗生素 | 第37页 |
| 2.1.7 溶液和缓冲液 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-57页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 2.2.2 RNA含量与纯度检测 | 第38页 |
| 2.2.3 去除基因组DNA | 第38-39页 |
| 2.2.4 基因的克隆 | 第39页 |
| 2.2.5 PCR产物回收 | 第39页 |
| 2.2.6 连接反应 | 第39-40页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第40页 |
| 2.2.8 测序 | 第40页 |
| 2.2.9 质粒DNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.10 质粒DNA的酶切反应 | 第41页 |
| 2.2.11 表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.12 原核表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.13 酵母双杂交载体构建 | 第42页 |
| 2.2.14 农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第42-43页 |
| 2.2.15 植物材料的准备及转化 | 第43-45页 |
| 2.2.16 酵母双杂 | 第45-47页 |
| 2.2.17 染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第47-50页 |
| 2.2.18 凝胶变动迁移率（EMSA） | 第50-52页 |
| 2.2.19 蛋白相关的实验技术 | 第52-55页 |
| 2.2.20 植物总蛋白的提取 | 第55页 |
| 2.2.21 蛋白免疫印迹（Western blotting） | 第55-56页 |
| 2.2.22 叶绿素含量的测定 | 第56页 |
| 2.2.23 瞬时表达系统处理愈伤 | 第56-57页 |
| 2.3 生物信息学分析 | 第57-58页 |
| 2.3.1 基因组数据库 | 第57页 |
| 2.3.2 EIN3/EILs基因家族成员鉴定 | 第57页 |
| 2.3.3 系统发育树的构建与蛋白保守域序列比对分析 | 第57页 |
| 2.3.4 EIN3/EILs基因结构及染色体定位分析 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-78页 |
| 3.1 MdEIL1的同源性与表达分析 | 第58-64页 |
| 3.1.1 MdEIL1 cDNA的克隆 | 第58页 |
| 3.1.2 MdEIL1系统进化分析 | 第58-59页 |
| 3.1.3 MdEIL1的同源性分析 | 第59-61页 |
| 3.1.4 MdEILs的基因结构分析 | 第61页 |
| 3.1.5 MdEILs的同源性分析 | 第61-62页 |
| 3.1.6 MdEILs在不同组织中的表达分析 | 第62-64页 |
| 3.1.7 MdEILs在叶片中的表达分析 | 第64页 |
| 3.2 MdEIL1的功能鉴定 | 第64-68页 |
| 3.2.1 载体构建和转基因愈伤的获得 | 第64-65页 |
| 3.2.2 MdEIL1过表达愈伤的表达分析 | 第65-66页 |
| 3.2.3 MdEIL1转基因拟南芥的获得 | 第66-67页 |
| 3.2.4 异位表达MdEIL1促进拟南芥的叶片衰老 | 第67-68页 |
| 3.3 MdEIL1调控多个基因的转录促进叶片衰老 | 第68-70页 |
| 3.3.1 MdEIL1调控EIN3/EIL1靶基因的表达 | 第68页 |
| 3.3.2 MdEIL1绑定到EIN3/EIL1靶基因的启动子上 | 第68-70页 |
| 3.4 MdEIL1是MdBT2的一个互作蛋白 | 第70-77页 |
| 3.4.1 MdEIL1与苹果中BTB-TAZ骨架蛋白互作 | 第71-72页 |
| 3.4.2 MdEIL1的C端和MdBT2的TAZ结构域是互作所必须的 | 第72-73页 |
| 3.4.3 离体条件下MdBT2促进MdEIL1的降解 | 第73-75页 |
| 3.4.4 离体条件下MG132抑制MdBT2对MdEIL1的降解 | 第75页 |
| 3.4.5 MdEIL1蛋白的泛素化降解 | 第75-76页 |
| 3.4.6 活体条件下MdBT2促进MdEIL1的泛素化降解 | 第76页 |
| 3.4.7 MdBT2抑制过表达MdEIL1愈伤中SAGs表达 | 第76-77页 |
| 3.5 MdBTs基因表达受到乙烯调控 | 第77-78页 |
| 4 讨论 | 第78-84页 |
| 4.1 MdEIL1的同源性与表达分析 | 第78-80页 |
| 4.2 MdEIL1的功能鉴定 | 第80-81页 |
| 4.3 MdEIL1是MdBT2的一个互作蛋白 | 第81-84页 |
| 5 结论 | 第84-86页 |
| 6 参考文献 | 第86-106页 |
| 7 附录 | 第106-108页 |
| 8 致谢 | 第108-109页 |
| 9 攻读学位期间发表及待发表的论文 | 第109页 |
