论文目录 | |
摘要 | 第10-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
第一章 前言 | 第12-33页 |
· 氨基糖苷类抗生素的结构 | 第12-13页 |
· 氨基糖苷类抗生素临床应用 | 第13-14页 |
· 氨基糖苷类抗生素抗菌机制 | 第14-16页 |
· 氨基糖苷类抗生素发展现状 | 第16-22页 |
· 氨基糖苷类抗生素的耐药机制 | 第16-19页 |
· 改变抗生素结构 | 第16-18页 |
· 药物在体内有效浓度降低 | 第18页 |
· 修饰抗生素的作用位点 | 第18-19页 |
· 氨基糖苷类抗生素的毒性作用 | 第19-20页 |
· 半合成氨基糖苷类抗生素的研究进展 | 第20-22页 |
· C-3',C-4'脱氧修饰 | 第21页 |
· 1-N衍生化修饰 | 第21页 |
· C-1取代衍生物 | 第21-22页 |
· 2-脱氧链霉胺(2-DOS)类氨基糖苷类抗生素的研究进展 | 第22-24页 |
· 巴龙霉胺和新霉胺的生物合成 | 第23页 |
· 卡那霉素的生物合成 | 第23-24页 |
· 庆大霉素结构及药用性质 | 第24-25页 |
· 庆大霉素的临床应用价值 | 第25页 |
· 庆大霉素的生物合成 | 第25-29页 |
· 庆大霉素生物合成中间组分的研究 | 第29页 |
· 基因阻断和位点特异性重组在微生物遗传改造中的应用 | 第29-31页 |
· 立题意义 | 第31-33页 |
第二章 材料和方法 | 第33-44页 |
· 实验材料 | 第33-40页 |
· 菌种 | 第33页 |
· 质粒 | 第33-34页 |
· 试剂 | 第34-36页 |
· 引物 | 第36-37页 |
· 缓冲液 | 第37-38页 |
· 培养基 | 第38-39页 |
· 设备仪器 | 第39-40页 |
· 实验方法 | 第40-44页 |
· 大肠杆菌质粒DNA的少量提取 | 第40页 |
· Micromonospora echinospora DNA的提取 | 第40页 |
· 转化大肠杆菌感受态细胞 | 第40-41页 |
· DNA的连接 | 第41页 |
· DNA电泳和片断回收 | 第41页 |
· PCR反应 | 第41-42页 |
· 接合转移实验 | 第42页 |
· Micromonospora echinospora发酵产物的处理 | 第42页 |
· Micromonospora echinospora发酵产物的纯化 | 第42页 |
· Micromonospora echinospora发酵产物组分的分离 | 第42-43页 |
· Micromonospora echinospora发酵产物的HPLC检测 | 第43页 |
· 庆大霉素产量的HPLC定量分析 | 第43-44页 |
第三章 利用组合生物合成技术构建庆大霉素B工程菌株 | 第44-60页 |
· JI-20A产生菌株的构建 | 第45-47页 |
· genK genP阻断菌株M.echinospora △genK△genP的构建 | 第45-46页 |
· JI-20A高产菌株M.echinospora △genK△genP产物分析 | 第46-47页 |
· 组合生物合成庆大霉素B | 第47-60页 |
· 使用PermE~*启动子、位点特异性整合的方式表达kanJ和kanK | 第47-52页 |
· 使用PermE~*启动子、通过同源重组的方式表达kanJ和kanK | 第52-54页 |
· 使用PgenP启动子、通过同源重组的方式表达kanJ和kanK | 第54-55页 |
· 使用PhrdB启动子、通过同源重组的方式表达kanJ和kanK | 第55-60页 |
第四章 通过代谢工程方法提高庆大霉素B产量 | 第60-68页 |
· 过表达kanM1庆大霉素B产生菌株的构建 | 第60-62页 |
· 过表达质粒pSPU-kanM1的构建 | 第60-61页 |
· kanM1过表达菌株的筛选 | 第61-62页 |
· 过表达genM2庆大霉素B产生菌株的构建 | 第62-63页 |
· 过表达质粒pSPU-genM2构建 | 第62-63页 |
· genM2过表达菌株的筛选 | 第63页 |
· kanM1和genM2共表达庆大霉素B产生菌株的构建 | 第63-65页 |
· 共表达质粒pSPU-kanM1genM2的构建 | 第63-64页 |
· kanM1genM2过表达菌株的筛选 | 第64-65页 |
· 超表达kanM1或/和genM2菌株产物分析 | 第65-67页 |
· 通过前体补加优化过表达菌株庆大霉素B的产量 | 第67-68页 |
第五章 庆大霉素C1a高产菌株的构建 | 第68-79页 |
· M.echinospora C-kanM1过表达菌株的获得与产物分析 | 第69-71页 |
· kanM1过表达菌株的筛选 | 第69-70页 |
· kanM1过表达菌株的发酵 | 第70-71页 |
· M.echinospora C-genM2过表达菌株的获得与产物分析 | 第71-73页 |
· genM2过表达菌株的筛选 | 第71-72页 |
· genM2过表达菌株的发酵 | 第72-73页 |
· M.echinospora C-kanM1genM2共表达菌株的获得与产物分析 | 第73-75页 |
· kanM1/genM2过表达菌株的构建 | 第73-74页 |
· kanM1/genM2过表达菌株的发酵 | 第74-75页 |
· 各工程菌株稳定性考察 | 第75-77页 |
· 工程菌株M.echinospora B-kanM1genM2、M.echinospora C-kanM1genM2的传代培养 | 第75-76页 |
· 工程菌株的发酵培养及产物的分析定量 | 第76-77页 |
· 葡萄糖流加对庆大霉素B和C1a产量的影响 | 第77-79页 |
全文总结 | 第79-81页 |
创新性 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-89页 |
致谢 | 第89-90页 |
发表文章 | 第90-91页 |
附件 | 第91-108页 |