论文目录 | |
致谢 | 第1-12
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中文摘要 | 第12-14
页 |
Abstract | 第14-17
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引言 | 第17-20
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文献综述 鸡传染性法氏囊病毒及细胞受体研究现状 | 第20-38
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1 鸡传染性法氏囊病毒研究进展 | 第20-29
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· IBDV的基本特性 | 第20-21
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· IBDV的基因组结构、组成蛋白及功能 | 第21-23
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· IBDV在细胞中的增殖 | 第23-25
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· IBDV疫苗与免疫 | 第25-26
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· IBDV细胞受体的研究进展 | 第26-29
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2 病毒细胞受体研究进展 | 第29-38
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· 病毒受体研究意义 | 第29
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· 病毒受体的成分和特点 | 第29-30
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· 病毒与受体的关系 | 第30-31
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· 病毒受体的研究方法 | 第31-36
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· 动物病毒受体应用的研究 | 第36-38
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第一章 鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建 | 第38-51
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1 材料与方法 | 第38-45
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· 材料、质粒和菌株 | 第38-39
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· CEF细胞mRNA的提取 | 第39-40
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· 双链cDNA合成 | 第40-43
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· cDNA克隆到T7噬菌体载体及体外包装 | 第43-44
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· 原始文库滴度的测定 | 第44
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· 重组子的鉴定 | 第44-45
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· 文库的扩增及滴度测定 | 第45
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· 扩增后文库质量的鉴定 | 第45
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2 结果 | 第45-48
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· CEF mRNA的提取与分离 | 第45-46
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· 双链cDNA的鉴定及分级分离 | 第46-47
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· 初始文库滴度的测定和重组子鉴定 | 第47-48
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· 扩增文库的滴度测定及插入片段大小分析 | 第48
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3 讨论 | 第48-50
页 |
· cDNA文库是发现新基因重要工具 | 第48
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· cDNA文库的构建方法 | 第48-49
页 |
· 分级分离去除小片段cDNA | 第49
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· CEF cDNA T7噬菌体文库的质量评价 | 第49-50
页 |
4 小结 | 第50-51
页 |
第二章 鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定 | 第51-62
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1 材料与方法 | 第52-59
页 |
· 材料 | 第52
页 |
· 方法 | 第52-59
页 |
2 结果 | 第59-60
页 |
· CEF mRNA的提取 | 第59
页 |
· 初始文库的容量大小和插入片段大小的分析 | 第59-60
页 |
3 讨论 | 第60-61
页 |
4.小结 | 第61-62
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第三章 高效电转化感受态细胞的制备条件的优化 | 第62-70
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1 材料与方法 | 第62-65
页 |
· 材料 | 第62-63
页 |
· 优化方法步骤 | 第63-65
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2 结果 | 第65-67
页 |
· 生长阶段和细胞重悬体积优化 | 第65-66
页 |
· 电场强度的优化 | 第66
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· DTT和DL-threonine等化学试剂对转化效率的影响 | 第66
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· 优化的最佳制备方案 | 第66-67
页 |
3 讨论 | 第67-68
页 |
4 小结 | 第68-70
页 |
第四章 筛选阻断IBDV感染CEF单克隆抗体方法的建立 | 第70-82
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1 材料 | 第71
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· 细胞和病毒 | 第71
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· 培养基及其它试剂 | 第71
页 |
2 方法 | 第71-74
页 |
· 鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第71
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· 病毒的感染、收获与毒力测定 | 第71-72
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· 病毒感染比(MOI)的测定 | 第72
页 |
· IBDV病毒TCID_(50)的测定 | 第72-73
页 |
· 免疫组化实验中IBDV接毒量和感染时间的优化 | 第73
页 |
· 抗IBDV的单抗(F22EA6)的纯化和Biotin标记 | 第73
页 |
· 生物素标记的抗IBDV单抗(F22EA6-Biotin)工作浓度的优化 | 第73-74
页 |
· 阻断感染筛选系统特异性评价 | 第74
页 |
3 结果 | 第74-80
页 |
· 收获病毒抗原的测定 | 第74-75
页 |
· IBDV感染比(MOI)的测定 | 第75
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· IBDV病毒TCID_(50)的测定 | 第75-76
页 |
· 免疫组化实验中IBDV接毒量和接毒时间的优化 | 第76-77
页 |
· 抗IBDV单抗F22EA6的纯化和生物素Biotin标记 | 第77
页 |
· 生物素标记的IBDV单抗(F22EA6-Biotin)在免疫组化中的工作浓度确定 | 第77-78
页 |
· 阻断感染筛选系统的特异性评价 | 第78
页 |
· 阻断IBDV感染CEF的单克隆抗体筛选的方法 | 第78-80
页 |
4 讨论 | 第80-81
页 |
5 小结 | 第81-82
页 |
第五章 阻断IBDV感染CEF的单克隆抗体的制备及功能鉴定 | 第82-93
页 |
1 材料 | 第83-84
页 |
· 细胞和病毒 | 第83
页 |
· 培养基及其它试剂 | 第83
页 |
· 制备单克隆抗体所需其他溶液 | 第83-84
页 |
· 实验动物Balb/C小鼠 | 第84
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2 方法 | 第84-88
页 |
· 免疫原的制备和免疫方法 | 第84-85
页 |
· 总抗体效价和阻断IBDV感染的效果测定与比较 | 第85
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· 阻断IBDV感染的mAb杂交瘤细胞株的建立 | 第85-87
页 |
· 阻断IBDV感染的单克隆抗体的制备 | 第87
页 |
· 上清梯度稀释后的阻断实验 | 第87
页 |
· 用该mAb对CEF进行免疫组化染色 | 第87-88
页 |
· 流式细胞仪检测mAb与CEF表面分子的结合 | 第88
页 |
3 结果 | 第88-91
页 |
· 总抗体效价和阻断IBDV感染的效率测定与比较 | 第88-89
页 |
· 阻断IBDV感染的mAb杂交瘤细胞株的筛选 | 第89
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· 单抗38-1株上清梯度稀释后阻断感染实验 | 第89-90
页 |
· 用该mAb对CEF进行表面染色 | 第90
页 |
· 流式细胞仪检测抗体与CEF表面分子的结合 | 第90-91
页 |
4 讨论 | 第91-92
页 |
5 小结 | 第92-93
页 |
研究总结 | 第93-94
页 |
参考文献 | 第94-110
页 |
附录 | 第110-116
页 |
附录A 缩略词表 | 第110-115
页 |
附录B 攻博期间参研项目与发表论文、著作 | 第115-116页 |