论文目录 | |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 1 前言 | 第18-37页 |
| 1.1 鸡球虫病及防治现状 | 第18-24页 |
| 1.1.1 鸡球虫病病原 | 第18页 |
| 1.1.2 鸡球虫生活史 | 第18-20页 |
| 1.1.3 鸡球虫对宿主细胞的入侵 | 第20-22页 |
| 1.1.4 鸡球虫病防治现状 | 第22-24页 |
| 1.2 鸡球虫细胞培养的研究现状及进展 | 第24-29页 |
| 1.2.1 细胞培养在抗球虫制剂效果评价的应用 | 第26-27页 |
| 1.2.2 细胞培养在球虫蛋白功能研究的应用 | 第27-28页 |
| 1.2.3 细胞培养在球虫转基因技术的应用 | 第28页 |
| 1.2.4 细胞培养在球虫入侵机理研究的应用 | 第28-29页 |
| 1.3 转录组学及其在鸡球虫研究中的进展 | 第29-32页 |
| 1.3.1 转录组学概述及RNA-seq技术 | 第29-30页 |
| 1.3.2 转录组学在鸡球虫研究中的进展 | 第30-32页 |
| 1.4 蛋白质组学及其在鸡球虫研究中的进展 | 第32-35页 |
| 1.4.1 蛋白质组学概述及iTRAQ技术 | 第32-34页 |
| 1.4.2 蛋白质组学在鸡球虫研究中的进展 | 第34-35页 |
| 1.5 研究的目及意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 细胞、虫株及菌株和载体 | 第37-38页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第38页 |
| 2.1.3 主要试剂与药品 | 第38页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-59页 |
| 2.2.1 实验设计 | 第39-40页 |
| 2.2.2 鸡球虫的复壮与传代 | 第40页 |
| 2.2.3 球虫卵囊的收集与孢子化 | 第40-41页 |
| 2.2.4 卵囊的灭菌及子孢子出囊实验 | 第41-42页 |
| 2.2.5 DF1细胞的复苏与培养 | 第42页 |
| 2.2.6 柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞模型的建立 | 第42-43页 |
| 2.2.7 入侵模型中DF1细胞的转录组学分析 | 第43-45页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR鉴定转录组差异基因 | 第45-47页 |
| 2.2.9 鸡MAPK信号通路基因在入侵模型中的转录 | 第47页 |
| 2.2.10 入侵模型中DF1细胞及子孢子关键蛋白的蛋白质组学分析 | 第47-51页 |
| 2.2.11 鸡内吞及吞噬体信号通路基因在入侵模型中的转录 | 第51-52页 |
| 2.2.12 柔嫩艾美耳球虫蛋白U6KIV9和H9B954的功能研究 | 第52-59页 |
| 3 结果 | 第59-94页 |
| 3.1 柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞模型的建立 | 第59-61页 |
| 3.1.1 孢子化卵囊和子孢子的收集和纯化 | 第59页 |
| 3.1.2 柔嫩艾美耳球虫在DF1细胞中的培养 | 第59-60页 |
| 3.1.3 接种时间的确定 | 第60-61页 |
| 3.1.4 接种剂量的确定 | 第61页 |
| 3.2 入侵模型中宿主细胞DF1的转录组学研究 | 第61-71页 |
| 3.2.1 总RNA的质量鉴定 | 第61-62页 |
| 3.2.2 测序数据过滤及质量评估 | 第62页 |
| 3.2.3 鉴定基因统计结果 | 第62-64页 |
| 3.2.4 差异显著基因生物信息学分析 | 第64-67页 |
| 3.2.5 荧光定量验证转录差异基因结果 | 第67-69页 |
| 3.2.6 FosB、NR4A3和NR4A1的动态表达 | 第69-70页 |
| 3.2.7 MAPK信号通路基因在入侵模型DF1细胞中的转录 | 第70-71页 |
| 3.3 入侵模型中宿主细胞DF1的蛋白质组学研究 | 第71-78页 |
| 3.3.1 鉴定蛋白统计结果 | 第71页 |
| 3.3.2 差异显著蛋白生物信息学分析 | 第71-75页 |
| 3.3.3 差异蛋白在内吞及吞噬体通路中的富集及转录 | 第75-78页 |
| 3.4 入侵模型中柔嫩艾美耳球虫子孢子的蛋白质组学研究 | 第78-81页 |
| 3.4.1 鉴定蛋白统计结果 | 第78页 |
| 3.4.2 差异显著蛋白生物信息学分析 | 第78-81页 |
| 3.5 柔嫩艾美耳球虫蛋白U6KIV9和H9B954的功能研究 | 第81-94页 |
| 3.5.1 蛋白基本信息及生物信息学分析 | 第81-84页 |
| 3.5.2 目的基因的PCR扩增 | 第84-85页 |
| 3.5.3 原核重组表达质粒的构建 | 第85-86页 |
| 3.5.4 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第86-87页 |
| 3.5.5 重组蛋白原核表达与鉴定 | 第87-88页 |
| 3.5.6 多克隆抗体的制备 | 第88页 |
| 3.5.7 酵母菌表面展示黏附试验模型 | 第88-91页 |
| 3.5.8 抗体阻断实验 | 第91-92页 |
| 3.5.9 蛋白免疫保护效果评价 | 第92-94页 |
| 4 讨论 | 第94-99页 |
| 4.1 柔嫩艾美耳球虫入侵DF1细胞模型的建立 | 第94-95页 |
| 4.2 入侵模型中宿主细胞DF1及球虫子孢子的组学研究 | 第95-97页 |
| 4.3 柔嫩艾美耳球虫蛋白U6KIV9和H9B954的功能研究 | 第97-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 附录 | 第111-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 攻读学位期间论文发表情况 | 第115页 |
