论文目录 | |
| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 缩写词表 | 第15-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 引言 | 第16-17页 |
| 1.2 β-胡萝卜素的应用及市场 | 第17-19页 |
| 1.2.1 β-胡萝卜素简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 β-胡萝卜素的应用 | 第18-19页 |
| 1.2.3 β-胡萝卜素的市场 | 第19页 |
| 1.3 β-胡萝卜素的合成 | 第19-26页 |
| 1.3.1 β-胡萝卜素的化学合成 | 第20页 |
| 1.3.2 从含 β-胡萝卜素的植物中提取 β-胡萝卜素 | 第20页 |
| 1.3.3 微生物培养生产 β-胡萝卜素 | 第20-21页 |
| 1.3.4 β-胡萝卜素的生物合成途径 | 第21-23页 |
| 1.3.5 β-胡萝卜素的异源表达研究 | 第23-26页 |
| 1.4 耶罗维解脂酵母的代谢工程研究 | 第26-31页 |
| 1.4.1 代谢改造耶罗维解脂酵母生产脂质或生物燃料 | 第27-28页 |
| 1.4.2 代谢改造耶罗维解脂酵母生产功能性脂肪酸 | 第28-30页 |
| 1.4.3 代谢改造耶罗维解脂酵母生产类胡萝卜素 | 第30-31页 |
| 1.5 本课题的研究内容和意义 | 第31-34页 |
| 第2章 三孢布拉霉 β-胡萝卜素生物合成基因的克隆和表达 | 第34-62页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-47页 |
| 2.1.1 引物、菌株与质粒 | 第35-38页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第38页 |
| 2.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第38-40页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第40-41页 |
| 2.1.5 菌株的活化、培养与保存 | 第41页 |
| 2.1.6 酵母DNA提取步骤 | 第41-42页 |
| 2.1.7 质粒抽提、酶切、连接等分子生物学操作 | 第42页 |
| 2.1.8 同源重组连接DNA片段 | 第42页 |
| 2.1.9 卷枝毛霉RNA的抽提与 β-胡萝卜素基因的克隆 | 第42-43页 |
| 2.1.10 质粒构建 | 第43-45页 |
| 2.1.11 耶罗维解脂酵母转化方法 | 第45-46页 |
| 2.1.12 β-胡萝卜素的提取与分析 | 第46-47页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第47-59页 |
| 2.2.1 β-胡萝卜素基因的克隆 | 第47-50页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第50-52页 |
| 2.2.3 耶罗维解脂酵母遗传操作系统的优化 | 第52-56页 |
| 2.2.4 β-胡萝卜素产生菌株的构建 | 第56-59页 |
| 2.3 本章小结 | 第59-62页 |
| 第3章 FPP代谢的调节对 β-胡萝卜素合成的影响 | 第62-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第63-71页 |
| 3.1.1 引物、质粒和菌株 | 第63-65页 |
| 3.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液 | 第65页 |
| 3.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第65-66页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第66页 |
| 3.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作 | 第66页 |
| 3.1.6 质粒构建 | 第66-68页 |
| 3.1.7 HMG-CoA reductase活力测定 | 第68-69页 |
| 3.1.8 实时定量PCR检测HMG~(cata)的转录 | 第69-70页 |
| 3.1.9 麦角固醇的提取与检测 | 第70-71页 |
| 3.1.10 角鲨烯的提取与检测 | 第71页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第71-80页 |
| 3.2.1 HMG-CoA还原酶催化部位的克隆 | 第71-73页 |
| 3.2.2 质粒构建 | 第73-74页 |
| 3.2.3 过表达HMG~(cata)菌株的构建 | 第74-78页 |
| 3.2.4 弱化ERG9基因菌株的构建 | 第78-80页 |
| 3.3 本章小结 | 第80-82页 |
| 第4章 GUT2及POX1-6 敲除对 β-胡萝卜素途径的影响 | 第82-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第84-87页 |
| 4.1.1 引物、质粒及菌株 | 第84-85页 |
| 4.1.2 培养基及试剂 | 第85-86页 |
| 4.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第86页 |
| 4.1.4 主要仪器和设备 | 第86页 |
| 4.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作 | 第86页 |
| 4.1.6 质粒构建 | 第86页 |
| 4.1.7 耶罗维解脂酵母转化方法 | 第86-87页 |
| 4.1.8 耶罗维解脂酵母中 β-胡萝卜素的提取与HPLC分析 | 第87页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第87-92页 |
| 4.2.1 H306、H405、H512及H611菌株的构建 | 第87-89页 |
| 4.2.2 H306、H405、H511及H611菌株的生长情况的比较 | 第89-90页 |
| 4.2.3 H306、H405、H512及H611菌株的 β-胡萝卜素产量比较 | 第90-91页 |
| 4.2.4 Ku70敲除对同源重组效率的影响 | 第91-92页 |
| 4.3 本章小结 | 第92-94页 |
| 第5章 高产 β-胡萝卜素菌株的构建 | 第94-112页 |
| 5.1 材料与方法 | 第94-99页 |
| 5.1.1 引物、质粒与菌株 | 第94-96页 |
| 5.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液 | 第96页 |
| 5.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第96页 |
| 5.1.4 主要仪器和设备 | 第96-97页 |
| 5.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作 | 第97页 |
| 5.1.6 质粒构建 | 第97-98页 |
| 5.1.7 实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测基因的表达变化 | 第98-99页 |
| 5.1.8 不同碳源对产量的影响 | 第99页 |
| 5.1.9 耶罗维解脂酵母的分批补料发酵 | 第99页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第99-110页 |
| 5.2.1 URA3筛选系统的测试 | 第99-101页 |
| 5.2.2 工程菌的构建流程 | 第101页 |
| 5.2.3 质粒构建 | 第101-102页 |
| 5.2.4 产 β-胡萝卜素菌株的构建 | 第102-108页 |
| 5.2.5 分批补料发酵生产 β-胡萝卜素 | 第108-110页 |
| 5.3 本章小结 | 第110-112页 |
| 第6章 虾青素产生菌株的构建 | 第112-122页 |
| 6.1 材料与方法 | 第113-117页 |
| 6.1.1 引物、菌株与质粒 | 第113-115页 |
| 6.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液 | 第115页 |
| 6.1.3 主要溶液及培养基配置 | 第115页 |
| 6.1.4 主要仪器和设备 | 第115页 |
| 6.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作 | 第115页 |
| 6.1.6 质粒构建 | 第115-116页 |
| 6.1.7 耶罗维解脂酵母转化方法 | 第116页 |
| 6.1.8 耶罗维解脂酵母中虾青素的提取与HPLC分析 | 第116-117页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第117-121页 |
| 6.2.1 crtW与crtZ的克隆及表达组件的构建 | 第117-118页 |
| 6.2.2 虾青素生产菌株的构建 | 第118-121页 |
| 6.3 本章小结 | 第121-122页 |
| 全文总结 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-138页 |
| 创新性分析 | 第138-140页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第140-142页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与专利申请 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 附录 | 第146-152页 |
