论文目录 | |
| 第一部分 BCL10调控粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)转录水平的研究 | 第1-62
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| 摘要 | 第3-4
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| ABSTRACT | 第4-9
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| 1 前言 | 第9-21
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| · GM-CSF基因及其启动子 | 第9-11
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| · GM-CSF的结构及生物学作用 | 第9
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| · GM-CSF的来源及调节因素 | 第9-10
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| · GM-CSF基因及启动子 | 第10-11
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| · B-cell lymphoma 10(BCL10) | 第11-16
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| · BCL10的发现 | 第11-12
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| · BCL10的功能 | 第12-16
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| · BCL10能诱发细胞凋亡 | 第12-13
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| · BCL10能激活NF-κB | 第13-14
页 |
| · BCL10能抑制细胞转化 | 第14-15
页 |
| · BCL10在免疫系统中的作用 | 第15
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| · BCL10与肿瘤的关系 | 第15-16
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| · NF-κB信号转导通路 | 第16-19
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| · NF-κB信号转导系统的组成 | 第16-18
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| · NF-κB/Rel家族 | 第16-17
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| · NF-κB抑制蛋白(IκB)家族 | 第17
页 |
| · IκB激酶复合物(IKK) | 第17
页 |
| · IKK上游激酶 | 第17-18
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| · NF-κB信号转导过程 | 第18
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| · 活化信号 | 第18
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| · 经典途径 | 第18
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| · 靶基因 | 第18
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| · NF-κB信号通路与人类疾病的关系 | 第18-19
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| · ETS蛋白 | 第19-21
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| · ETS蛋白家族的分子结构 | 第19-20
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| · ETS基因结构 | 第20-21
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| 2 项目的目的意义 | 第21-22
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| 3 材料与方法 | 第22-44
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| · 材料和试剂 | 第22
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| · 细胞,菌株和质粒 | 第22
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| · 试剂 | 第22
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| · 方法 | 第22-44
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| · BCL10哺乳动物表达载体的构建 | 第22-28
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| · 细胞总RNA的提取 | 第22
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| · 引物的设计与合成 | 第22-23
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| · cDNA第一链的合成 | 第23
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| · 聚合酶链式反应(PCR)扩增BCL10基因 | 第23
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| · PCR产物的回收 | 第23-24
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| · PCR产物的酶切 | 第24
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| · 哺乳动物表达载体pcDNA1酶切 | 第24
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| · PCR片段的连接与转化 | 第24-27
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| · DNA序列测定 | 第27-28
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| · GM-CSF启动子/增强子的扩增及与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第28-32
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| · 细胞DNA的提取 | 第28
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| · 引物的设计与合成 | 第28
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| · 聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF启动子和增强子序列 | 第28-29
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| · PCR产物的回收 | 第29
页 |
| · PCR产物的酶切 | 第29
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| · 含luciferase报告基因表达载体pGL2的酶切 | 第29-30
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| · GM-CSF启动子PCR片段的连接与转化 | 第30-31
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| · DNA序列测定 | 第31
页 |
| · 重组质粒pGL2-GMCSFpr的XhoⅠ和BglⅡ酶切 | 第31
页 |
| · GM-CSF增强子PCR片段的连接与转化 | 第31-32
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| · DNA序列测定 | 第32
页 |
| · GM-CSF基础启动子luciferase嵌合载体的构建 | 第32-35
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| · 引物的设计与合成 | 第32-33
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| · 聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF-130到+1启动子序列 | 第33
页 |
| · PCR产物的回收 | 第33
页 |
| · PCR产物的酶切 | 第33-34
页 |
| · GM-CSF-130到+1启动子PCR片段的连接与转化 | 第34-35
页 |
| · DNA序列测定 | 第35
页 |
| · GM-CSF基础启动子突变体的构建 | 第35-38
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| · 引物的设计与合成 | 第35-36
页 |
| · 聚合酶链式反应(PCR)扩增GM-CSF-130到+1突变体序列 | 第36
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| · PCR产物的回收 | 第36
页 |
| · PCR产物的酶切 | 第36-37
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| · 突变体片段的连接与转化 | 第37-38
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| · DNA序列测定 | 第38
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| · 质粒pcDNA1-BCL10,pGL2-GMCSFpr共同转染DG75、Jurkat和K562 | 第38-40
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| · 细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第38
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| · 细胞转染 | 第38-39
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| · 荧光素酶(luciferase)检测 | 第39
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| · 按下表进行转染处理 | 第39-40
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| · 质粒pGLK2,pGL-Il-2,pGL2-GMCSFpr,pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第40
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| · 突变体与pcDNA1-BCL10共同转染K562细胞株 | 第40-41
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| · pGL2-GMCSFpr-basic,pcDNA1-ETS1与pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第41
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| · pGL2-GMCSFpr-basic,pcDNA1-Malt1与pcDNA1-BCL10共同转染K562 | 第41-42
页 |
| · 半定量PCR检测内源GM-CSF mRNA的丰度 | 第42-44
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| · 细胞总RNA的提取 | 第42
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第42-43
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| · cDNA第一链的合成 | 第43
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| · 模板量的确定 | 第43
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| · 指数增长期的确定 | 第43
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| · 半定量PCR检测细胞中GM-CSF | 第43-44
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| 4 结果与分析 | 第44-56
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| · BCL10哺乳动物表达载体的构建 | 第44
页 |
| · GM-CSF启动子/增强子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第44-46
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| · GM-CSF启动子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第44-45
页 |
| · GM-CSF启动子+增强子与luciferase报告基因嵌合载体的构建 | 第45-46
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| · GM-CSF基础启动子luciferase嵌合载体的构建 | 第46-47
页 |
| · GM-CSF基础启动子突变体的构建 | 第47
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| · K562细胞中,GM-CSF被BCL10激活,并经ionomycin处理后活性显著提高 | 第47-49
页 |
| · ETS1位点对于BCL10对GM-CSF的转录激活是必须的 | 第49-51
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| · ETS1抑制BCL10对GM-CSF转录激活作用 | 第51-53
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| · BCL10对GM-CSF的转录激活可能是通过一个独立于NF-κB途径进行的 | 第53-56
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| 5 讨论 | 第56-58
页 |
| 6 结论 | 第58-59
页 |
| 7 参考文献 | 第59-62
页 |
| 第二部分 绿藻atx1基因铁调控元件的研究 | 第62-94
页 |
| 摘要 | 第63-64
页 |
| Abstract | 第64-66
页 |
| 前言 | 第66-75
页 |
| 材料和方法 | 第75-79
页 |
| 结果 | 第79-88
页 |
| 讨论 | 第88-90
页 |
| 参考文献 | 第90-94
页 |
| 致谢 | 第94-95
页 |
| 附:在站期间发表论文 | 第95-96页 |
