论文目录 | |
| 中文摘要 | 第12-18页 |
| 英文摘要 | 第18-25页 |
| 符号说明 | 第25-26页 |
| 前言 | 第26-30页 |
| 第一部分 人同源盒基因NKX3.1内含子及5′上游10kb调控区功能元件的鉴定 | 第30-63页 |
| 实验材料 | 第30-31页 |
| 方法 | 第31-50页 |
| 人基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 人同源盒基因· 521 bp启动子-荧光素酶报道基因质粒pGL_3-521的构建 | 第31-35页 |
| 人同源盒基因NKX3.1内含子及10段5′上游10kb调控区-T载体重组质粒的构建 | 第35-38页 |
| 人同源盒基因· bp启动子-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第38-40页 |
| 细胞培养 | 第40-41页 |
| 细胞转染实验 | 第41页 |
| 荧光素酶活性测定 | 第41-42页 |
| 第7号片段缺失突变体-521 bp启动子-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第42-44页 |
| 第7号片段内44 bp正调控区-同源/异源启动子-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第44-46页 |
| 电泳迁移率变动分析 | 第46-50页 |
| 结果 | 第50-59页 |
| 各荧光素酶报道基因质粒的酶切及测序鉴定 | 第50-54页 |
| 人同源盒基因NKX3.1内含子及10段5′上游10kb调控区对NKX3.1启动子活性的影响 | 第54页 |
| 雄激素类似物R1881对NKX3.1内含子及10段5′上游10kb调控区活性的影响 | 第54-55页 |
| pGL_37-521在不同肿瘤细胞系中对NKX3.1启动子活性的影响 | 第55-56页 |
| pGL_37-521缺失突变体的活性测定 | 第56页 |
| 44 bp正调控序列对同源或异源启动子活性的影响 | 第56-57页 |
| 雄激素类似物R1881对44 bp正调控序列活性的影响 | 第57-58页 |
| EMSA鉴定44 bp正调控序列的特异结合蛋白 | 第58-59页 |
| 讨论 | 第59-62页 |
| 第一部分总结 | 第62-63页 |
| 第二部分 Spl过表达对人同源盒基因NKX3.1的增强作用及其作用元件的鉴定 | 第63-87页 |
| 实验材料 | 第63-64页 |
| 方法 | 第64-76页 |
| 前列腺癌细胞LNCaP的培养 | 第64页 |
| 细胞转染实验 | 第64-65页 |
| 反转录聚合酶链反应 | 第65-66页 |
| 蛋白免疫印迹分析 | 第66-68页 |
| pGL_3-521缺失突变体-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第68-73页 |
| Spla/Splc-同源/异源启动子-荧光素酶报道基因质粒的构建 | 第73-75页 |
| 荧光素酶活性测定 | 第75页 |
| 电泳迁移率变动分析 | 第75-76页 |
| 结果 | 第76-84页 |
| RT-PCR检测Spl过表达在mRNA水平对NKX3.1表达的影响 | 第76-77页 |
| Western blot检测Spl过表达在蛋白水平对NKX3.1表达的影响 | 第77-78页 |
| 各荧光素酶报道基因重组质粒的酶切及测序鉴定 | 第78-79页 |
| Spl过表达对pGL_3-521启动子活性的影响 | 第79-80页 |
| pGL_3-521缺失突变体的启动子活性测定 | 第80-81页 |
| Spla和Splc元件对同源或异源启动子活性的影响 | 第81页 |
| EMSA鉴定Spla和Splc元件的特异结合蛋白 | 第81-83页 |
| Spla和Splc陷阱DNA对启动子活性的影响 | 第83-84页 |
| 讨论 | 第84-85页 |
| 第二部分总结 | 第85-87页 |
| 第三部分 p53及姜黄素抑制雄激素受体对人同源盒基因NKX3.1向转录激活作用及其机制研究 | 第87-107页 |
| 实验材料 | 第87-88页 |
| 方法 | 第88-93页 |
| 姜黄素溶液的配置 | 第88页 |
| 前列腺癌细胞LNCaP的培养 | 第88页 |
| 细胞转染实验 | 第88-89页 |
| 反转录聚合酶链反应 | 第89-90页 |
| 蛋白免疫印迹分析 | 第90-91页 |
| 荧光素酶活性测定 | 第91页 |
| 电泳迁移率变动分析 | 第91-93页 |
| 结果 | 第93-102页 |
| p53对NKX3.1的影响及其作用机制研究 | 第93-98页 |
| RT-PCR及Western blot检测p53对NKX3.1表达的影响 | 第93-94页 |
| p53和p21过表达对AR介导的NKX3.1转录激活的影响 | 第94-96页 |
| p53对AR启动子活性的影响 | 第96-97页 |
| RT-PCR及Western blot检测p53对AR表达的影响 | 第97页 |
| EMSA检测p53对AR与ARE结合能力的影响 | 第97-98页 |
| 姜黄素对NKX3.1的影响及其作用机制研究 | 第98-102页 |
| RT-PCR及Western blot检测姜黄素对NKX3.1表达的影响 | 第98-99页 |
| 姜黄素对AR介导的NKX3.1转录激活的影响 | 第99-100页 |
| 姜黄素对AR启动子活性的影响 | 第100页 |
| RT-PCR及Western blot检测姜黄素对AR表达的影响 | 第100-101页 |
| EMSA检测姜黄素对AR与ARE结合能力的影响 | 第101-102页 |
| 讨论 | 第102-105页 |
| 第三部分总结 | 第105-107页 |
| 附图 | 第107-120页 |
| 参考文献 | 第120-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 博士在读期间发表的论文目录 | 第127-129页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第129-130页 |
| 外文论文 | 第130-163
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