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重组大肠杆菌生产短链聚羟基脂肪酸酯PHB及PHBV的途径构建与代谢改造
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重组大肠杆菌生产短链聚羟基脂肪酸酯PHB及PHBV的途径构建与代谢改造
论文目录
 
摘要第12-17页
ABSTRACT第17-22页
缩略词表第22-25页
第一章 绪论第25-58页
　　· 聚羟基脂肪酸酯(PHA)的概述第25-31页
　　　　· 聚羟基脂肪酸酯的组成与分类第26-27页
　　　　· 聚羟基脂肪酸酯的材料学性质及改性研究第27-29页
　　　　· PHA的应用及前景第29-31页
　　· PHA的生物合成第31-38页
　　　　· PHA的微生物合成途径第31-34页
　　　　· PHA生物合成相关基因的组织形式第34-36页
　　　　· PHA生物合成中提供单体的酶第36-38页
　　· PHA的提取与检测第38-45页
　　　　· 从微生物细胞中分离提取PHA的方法第38-40页
　　　　· 微生物胞内PHA的鉴定与检测第40-45页
　　· 短链PHA的生产第45-56页
　　　　· PHB的发酵生产第45-49页
　　　　· PHBV共聚物的生产第49-55页
　　　　· 通过细菌发酵生产短链PHA的经济学思考第55-56页
　　· 本论文的研究工作及意义第56-58页
第二章 重组大肠杆菌利用廉价碳源高效生产PHB第58-81页
　　· 实验材料第59-65页
　　　　· 菌株和质粒第59-60页
　　　　· 用于基因敲除的引物序列第60页
　　　　· 分子生物学常用工具酶第60-61页
　　　　· 常用试剂盒第61页
　　　　· 常用生化试剂第61页
　　　　· 分子量标准物第61页
　　　　· 聚合酶链式反应(PCR)用试剂第61-62页
　　　　· 仪器和设备第62-63页
　　　　· 常用试剂配方第63-65页
　　· 实验方法第65-70页
　　　　· 菌种保存方法第65页
　　　　· 分子生物学常规操作第65-66页
　　　　　　· 大肠杆菌感受态细胞的制备第65-66页
　　　　　　· 大肠杆菌的常规转化第66页
　　　　· 大肠杆菌DH5α中ptsG基因的敲除第66-67页
　　　　· 两种廉价底物的制备第67-68页
　　　　· 重组大肠杆菌生产PHB的发酵培养第68页
　　　　· 检测方法第68-69页
　　　　· 产PHB重组菌的尼罗红染色及显微镜观察第69页
　　　　· PHB的提取实验第69-70页
　　· 结果与讨论第70-80页
　　　　· 大肠杆菌DH5α中ptsG基因的敲除第70-71页
　　　　· GC检测3HB标准曲线的建立第71页
　　　　· 大肠杆菌生产菌株的选择第71-72页
　　　　· 大肠杆菌利用各种碳源合成PHB的比较第72-73页
　　　　· 多种碳源同时利用的工程化大肠杆菌的构建第73-74页
　　　　· 工程化大肠杆菌发酵条件的初步优化第74-75页
　　　　· 实验室中利用廉价碳源分批发酵试验第75-78页
　　　　· 显微镜观察产PHB大肠杆菌的形态第78页
　　　　· 大肠杆菌胞内PHB提取方法的优化第78-80页
　　· 本章小结第80-81页
第三章 大肠杆菌丙酸代谢与PHBV合成的关系第81-98页
　　· 材料与方法第84-88页
　　　　· 菌株和质粒第84页
　　　　· 用于基因操作的引物序列第84-85页
　　　　· 大肠杆菌的基因敲除方法第85-87页
　　　　· 丙酰辅酶A合成酶基因表达载体的构建第87页
　　　　· 检测方法第87-88页
　　· 实验结果第88-95页
　　　　· 大肠杆菌中的基因敲除第88-89页
　　　　· 重组质粒pBBR-prpE和pBBR-acs的构建第89-90页
　　　　· GC检测3HV标准曲线的建立第90页
　　　　· PTS系统对大肠杆菌代谢丙酸及合成PHBV的影响第90-92页
　　　　· 丙酰辅酶A合成酶在丙酸代谢和PHBV合成中的作用第92-94页
　　　　· 大肠杆菌3HV合成中代谢支路的阻断第94-95页
　　· 讨论第95-96页
　　· 本章小结第96-98页
第四章 重组大肠杆菌利用非相关碳源生产PHBV第98-119页
　　· 材料和方法第100-104页
　　　　· 菌株和质粒第100-102页
　　　　　　· 不同来源的ilvA基因表达载体的构建第101-102页
　　　　　　· 苏氨酸合成表达载体的构建第102页
　　　　　　· PHBV合成酶和苏氨酸脱氨酶双表达载体的构建第102页
　　　　· 培养基及发酵方法第102-103页
　　　　· 检测方法第103-104页
　　· 实验结果第104-117页
　　　　· 大肠杆菌利用葡萄糖合成PHBV现象的发现第104-105页
　　　　· 检测大肠杆菌中丙酰CoA的来源第105-107页
　　　　· 苏氨酸转化为丙酰CoA过程中关键酶的确定第107-112页
　　　　· 利用非相关碳源合成PHBV的大肠杆菌工程菌的构建第112-117页
　　· 讨论第117页
　　· 本章小结第117-119页
全文总结第119-122页
参考文献第122-134页
致谢第134-135页
攻读学位期间发表的学术论文第135-136页
外文写作第136-137页
附录第137-179页
学位论文评阅及答辩情况表第179 页

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