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优化核移植技术并生产转人溶菌酶和β-防御素-3克隆牛的研究

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优化核移植技术并生产转人溶菌酶和β-防御素-3克隆牛的研究
论文目录
 
摘要第1-6页
ABSTRACT第6-14页
第一章 哺乳动物体细胞核移植研究概述第14-34页
  · 哺乳动物胚胎细胞核移植的研究进展第14页
  · 哺乳动物体细胞核移植的研究进展第14-15页
  · 哺乳动物体细胞核移植的主要程序第15-26页
    · 核供体体细胞的选择第17页
    · 受体胞质的选择和准备第17-22页
    · 供体体细胞核的移植第22页
    · 重构胚的激活第22-24页
    · 重组胚的培养和移植第24-26页
  · 哺乳动物体细胞核移植的相关机理第26-30页
    · 体细胞核移植过程中受体胞质对供体核的重编程第26-28页
    · DNA 甲基化与动物克隆第28-29页
    · 基因组印记与动物克隆第29-30页
  · 提高体细胞核移植效率的措施第30-34页
    · 受体卵母细胞的处理第30-32页
    · 供体细胞的优化第32-33页
    · 培养条件的优化第33-34页
第二章 转基因动物的制作方法及应用前景第34-42页
  · 转基因动物的制作方法第34-37页
    · 原核显微注射法第35页
    · 病毒载体法第35-36页
    · 精子载体法第36页
    · 胚胎干细胞介导法第36页
    · 体细胞核移植法第36-37页
  · 转基因动物的应用第37-40页
    · 培育具有抗病性能的动物新品种第37页
    · 培育生产性能高的动物新品种第37-38页
    · 转基因动物乳腺生物反应器与生物制药第38-39页
    · 用于生物医学、遗传学、发育生物学和基因功能研究第39页
    · 转基因动物生产人体器官第39-40页
  · 转基因动物技术存在的问题第40-42页
    · 转基因动物的成功率和成活率低第40页
    · 外源导入基因的整合率低,效果不稳定第40页
    · 外源导入基因的行为难以控制第40页
    · 转基因的理论尚不完全清楚第40页
    · 转基因动物的安全性问题第40-42页
第三章 牛成纤维细胞分离培养及支持重构胚发育能力的初步评估第42-50页
  · 材料和方法第42-45页
    · 试剂与仪器第42-43页
    · 牛成纤维细胞的分离、培养及冷冻第43-44页
    · 体细胞核移植重构胚的构建及培养第44-45页
    · 试验数据的统计分析第45页
  · 结果与分析第45-48页
    · 新生牛皮肤成纤维细胞的原代和传代培养以及生物学特性观察第45-46页
    · 牛胎儿成纤维细胞的原代和传代培养以及生物学特性观察第46-47页
    · 成纤维细胞染色体核型分析结果第47页
    · 不同个体及来源的细胞作为供体细胞对克隆胚体外发育能力的影响第47-48页
  · 讨论第48-49页
  · 小结第49-50页
第四章 牛卵母细胞体外成熟对体细胞核移植的影响第50-57页
  · 材料和方法第51-53页
    · 材料第51页
    · 实验方法第51-53页
  · 结果第53-55页
    · 卵巢保存温度对不同级别COCs 回收率的影响第53-54页
    · 卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟以及克隆胚发育的影响第54页
    · 成熟培养液中添加不同浓度leptin 对卵母细胞体外成熟的影响第54-55页
    · 成熟培养液中添加不同浓度的leptin 对体细胞克隆胚体外发育的影响第55页
  · 讨论第55-56页
  · 小结第56-57页
第五章 牛体细胞克隆胚体外培养的研究第57-66页
  · 材料和方法第58-60页
    · 材料第58页
    · 实验方法第58-60页
  · 结果第60-63页
    · 不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体外发育的速度及胚胎的外观形态的比较第60-61页
    · 不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体外发育的影响第61-62页
    · 不同培养液对体细胞克隆胚囊胚内细胞凋亡率的影响第62页
    · 不同培养液对体细胞克隆胚囊胚内内细胞团细胞与滋养层细胞比例的影响第62-63页
    · 不同胚胎培养液对体细胞克隆胚体内发育的影响第63页
  · 讨论第63-64页
  · 小结第64-66页
第六章 体细胞核移植程序的优化第66-76页
  · 材料与方法第66-70页
    · 工具制备第66-67页
    · 供体细胞的准备第67-68页
    · 卵母细胞的收集及成熟第68页
    · 受体卵母细胞的去核第68页
    · 卵母细胞的注核第68页
    · 卵母细胞与供体细胞的融合第68-69页
    · 克隆胚的激活与体外培养第69页
    · 试验设计第69-70页
    · 试验数据的统计分析第70页
  · 结果第70-73页
    · 不同去核方法对卵母细胞去核率及克隆胚后期发育的影响第70-71页
    · 不同直径的供体细胞对体细胞克隆胚发育的影响第71-72页
    · 融合方法对重组体融合率及早期胚胎发育的影响第72页
    · 融合到激活间隔时间对体细胞克隆胚后期发育的影响第72页
    · 供体细胞预处理方法对体细胞克隆胚发育的影响第72-73页
  · 讨论第73-74页
  · 小结第74-76页
第七章 用优化的核移植技术生产转 hLYZ基因克隆牛第76-87页
  · 材料和方法第76-80页
    · 材料第76-77页
    · 实验方法第77-80页
  · 结果第80-84页
    · hLYZ 基因cDNA 的PCR 扩增结果第80-81页
    · 重组质粒pEBH 鉴定第81页
    · hLYZ 的细胞转染第81-82页
    · 基因转染对克隆胚体外发育的影响第82页
    · 转基因克隆胚的检测第82-83页
    · 转人溶菌酶基因体细胞克隆胚的移植第83-84页
  · 讨论第84-85页
  · 小结第85-87页
第八章 用优化的核移植技术生产转 hBD3 基因克隆牛第87-92页
  · 材料和方法第87-89页
    · 材料第87-88页
    · 实验方法第88-89页
  · 结果第89-90页
    · 克隆胚外源基因的检测第89页
    · 转染及筛选操作对不同来源供体细胞的影响第89-90页
    · 转hBD3 基因克隆胚的移植第90页
  · 讨论第90-91页
  · 小结第91-92页
全文结论第92-93页
参考文献第93-109页
附录第109-111页
致谢第111-112页
个人简历第112-113 页

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