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一、结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 二、卡介苗菌MDP1基因敲除的研究

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一、结核分枝杆菌Hsp16.3分子伴侣活性及其相关功能的研究 二、卡介苗菌MDP1基因敲除的研究
论文目录
 
目录第1-8 页
主要符号对照表第8-10 页
中文摘要第10-12 页
英文摘要第12-15 页
第一部分 结核分枝杆菌Hsp·分子伴侣活性及其相关功能的研究第15-86 页
  前言第15-18 页
  第一章 Hsp·蛋白的表达、纯化与多抗血清的制备第18-30 页
    前言第18 页
    第一节 实验材料第18-22 页
    第二节 实验步骤第22-25 页
      一、 Hsp·的表达第22 页
      二、 Hsp·蛋白的纯化第22-24 页
      三、 Hsp·蛋白浓度的测定第24 页
      四、 Hsp·多抗血清的制备第24-25 页
    第三节 结果与讨论第25-30 页
      一、 Hsp·的表达与纯化第25-27 页
      二、 蛋白质浓度的测定结果第27-28 页
      三、 多克隆抗血清的制备结果第28-30 页
  第二章 Hsp·突变体G59W的构建极其结构和功能研究第30-52 页
    前言第30-32 页
    第一节 实验材料第32-33 页
    第二节 实验方法第33-38 页
      一、 突变体质粒的构建以及突变体蛋白的纯化第33-36 页
        1 引物设计第33 页
        2 PCR扩增第33-34 页
        3 PCR扩增产物的回收第34 页
        4 PCR产物的平末端磷酸化第34-35 页
        5 连接反应第35 页
        6 转化与筛选第35-36 页
        7 突变体蛋白质的纯化第36 页
        8 突变体蛋白的浓度测定第36 页
      二、 分子伴侣活性的检测第36-37 页
      三、 园二色性光谱的测量第37 页
      四、 ANS结合荧光光谱第37 页
      五、 排阻层析色谱第37-38 页
      六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳第38 页
      七、 内源荧光光谱测量第38 页
    第三节 实验结果第38-49 页
      一、 G59W突变体质粒的构建以及突变体蛋白质的纯化第38-40 页
        1 突变体质粒构建第38-39 页
        2 突变体蛋白质纯化的结果第39-40 页
      二、 分子伴侣活性检测结果第40-41 页
      三、 CD光谱的测量结果第41-44 页
      四、 ANS荧光光谱第44 页
      五、 排阻层析色谱第44-45 页
      六、 非变性孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳第45-47 页
      七、 内源荧光检测结果第47-49 页
    第四节 讨论第49-52 页
  第三章 融合基因的克隆与表达第52-63 页
    引言第52 页
    第一节 实验材料第52-53 页
    第二节 实验步骤第53-58 页
      一、 引物设计第53 页
      二、 融合基因的获得第53-55 页
        1 PCR分别扩增Hsp16.3和38kDa基因第54 页
        2 PCR产物琼脂糖凝胶电泳回收第54 页
        3 PCR扩增Hsp16.3和38kDa的融合基因第54-55 页
      三、 融合基因和质粒载体的酶切第55-56 页
      四、 酶切产物的连接第56 页
      五、 连接产物的转化第56 页
      六、 重组子的鉴定第56-57 页
        1 快速裂解及质粒大小的鉴定第56 页
        2 PCR初步鉴定第56-57 页
        3 酶切鉴定第57 页
        4 测序鉴定第57 页
      七、 融合蛋白的表达第57-58 页
    第三节 结果第58-60 页
      一、 融合蛋白的表达第58-59 页
      二、 融合蛋白的可溶性第59-60 页
    第四节 讨论第60-63 页
  第四章 Hsp·蛋白细胞内抗氧化功能研究第63-74 页
    引言第63 页
    第一节 实验材料第63 页
    第二节 实验方法第63-68 页
      一、 Hsp·基因、38kDa基因的克隆第63-68 页
        1 引物设计和合成第64 页
        2 PCR扩增目的基因第64-65 页
        3 目的基因与质粒载体的酶切第65 页
        4 酶切产物的连接第65-66 页
        5 连接产物的转化第66 页
        6 重组子的筛选与鉴定第66 页
        7 电转化第66-67 页
          1 ). 耻垢分枝杆菌感受态细胞的制备第66-67 页
          2 ). 电转化第67 页
        8 Hsp16.3外源蛋白的表达与鉴定第67-68 页
      二、 Hsp·抗氧化功能第68 页
    第三节 结果与讨论第68-74 页
      一、 Hsp·外源蛋白的表达与鉴定第68-72 页
        1 重组质粒的酶切结果第68-69 页
        2 15%SDS-PAGE凝胶检测结果第69-70 页
        3 Western Blotting结果第70-72 页
      二、 抗氧化结果第72-74 页
  第五章 Hsp·蛋白细胞内底物的筛选第74-80 页
    引言第74-75 页
    第一节 实验材料第75-76 页
    第二节 实验方法第76-77 页
    第三节 结果与讨论第77-80 页
  第六章 结论第80-81 页
  第七章 参考文献第81-86 页
第二部分 卡介苗菌MDP1基因敲除技术的研究第86-98 页
  前言第87-88 页
  第一节 材料和方法第88-90 页
    一、 材料第88 页
    二、 方法第88-90 页
      1 M.BCG基因组DNA的提取与纯化第88 页
      2 引物设计及目的基因的PCR扩增第88 页
      3 基因敲除质粒的构建及鉴定第88-89 页
      4 M.BCG感受态细胞的制备及电转化第89 页
      5 MDP1基因敲除菌株的筛选与鉴定第89-90 页
      6 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定第90 页
  第二节 结果第90-94 页
    一、 目的基因MDP1的PCR扩增产物第90-91 页
    二、 pKO-MDP1敲除质粒的酶切鉴定第91-92 页
    三、 敲除菌株的筛选与鉴定第92-93 页
    四、 敲除菌株和原代菌株生长曲线的测定第93-94 页
  第三节 讨论第94-96 页
  第四节 参考文献第96-98 页
第三部分 热休克蛋白的研究进展第98-133 页
  引言第99 页
  一、 热休克蛋白的分类第99-100 页
  二、 热休克蛋白的转录调节第100-102 页
  三、 热休克蛋白家族简介第102-119 页
    1 Hsp100第102-103 页
    2 Hsp90第103-104 页
    3 Hsp70第104-107 页
    4 Hsp60和Hsp10第107-110 页
    5 小分子热休克蛋白第110-119 页
      1 ). 小分子热休克蛋白的结果特点第110-111 页
      2 ). 小分子热休克蛋白的生理作用第111-113 页
        (1) 保护细胞骨架第111-112 页
        (2) sHsp与细胞的生长和分化第112 页
        (3) sHsp与细胞凋亡第112-113 页
      3 ). 小分子热休克蛋白的分子伴侣机制第113-114 页
      4 ). 小分子热休克蛋白与疾病第114-116 页
      5 ). 小分子热休克蛋白可以作为药物靶点第116-117 页
      6 ). 小分子热休克蛋白的磷酸化第117 页
      7 ). 小分子热休克蛋白举例第117-119 页
        (1) Alpha-crystallin第117-118 页
        (2) Hsp16.3第118-119 页
  四、 展望第119-121 页
  五、 参考文献第121-133 页
致谢第133页

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