论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5
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| ABSTRACT | 第5-12
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| 第一章 绪论 | 第12-27
页 |
| · 概述 | 第12-14
页 |
| · 中温酸性 α-淀粉酶的研究进展 | 第14-24
页 |
| · 酶源及酶催化特性的生物多样性 | 第14-15
页 |
| · 中温酸性α-淀粉酶的发酵生产及分离纯化 | 第15-17
页 |
| · 中温酸性α-淀粉酶基因克隆和表达的研究 | 第17-18
页 |
| · α-淀粉酶耐酸性机理的研究 | 第18-21
页 |
| · 定向进化技术用于α-淀粉酶的耐酸性改造 | 第21-23
页 |
| · 生淀粉水解酶类的研究进展 | 第23-24
页 |
| · 本课题研究内容 | 第24-27
页 |
| · 本课题研究目的和意义 | 第24-26
页 |
| · 本课题研究思路与内容 | 第26-27
页 |
| 第二章 产酶菌株YX-1 的分离鉴定、分类及诱变选育 | 第27-41
页 |
| · 前言 | 第27-28
页 |
| · 材料与方法 | 第28-32
页 |
| · 菌种与质粒 | 第28
页 |
| · 培养基与溶液 | 第28-29
页 |
| · 主要试剂 | 第29
页 |
| · 主要仪器 | 第29
页 |
| · 菌株YX-1 的培养 | 第29
页 |
| · 电镜研究 | 第29
页 |
| · 生理生化特性 | 第29-30
页 |
| · 产酶菌株16S rDNA 序列的扩增和分析 | 第30-31
页 |
| · 淀粉酶酶活测定方法 | 第31
页 |
| · 紫外诱变育种 | 第31
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| · 淀粉酶发酵过程跟踪 | 第31-32
页 |
| · 酶的初步纯化 | 第32
页 |
| · 结果与讨论 | 第32-40
页 |
| · 菌株菌体形态以及部分生理生化特性的测定 | 第32
页 |
| · 16S rDNA 的PCR 扩增和序列分析 | 第32-33
页 |
| · 菌株YX-1 的16S rDNA 序列和系统发育分析 | 第33-36
页 |
| · 紫外诱变选育优良菌株 | 第36-40
页 |
| · 小结 | 第40-41
页 |
| 第三章 Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶的分离纯化及其水解特征 | 第41-49
页 |
| · 前言 | 第41
页 |
| · 材料与方法 | 第41-44
页 |
| · 菌种 | 第41
页 |
| · 培养基与溶液 | 第41-42
页 |
| · 主要试剂 | 第42
页 |
| · 主要仪器 | 第42
页 |
| · 淀粉酶的培养和收集 | 第42
页 |
| · 淀粉酶的分离纯化 | 第42-43
页 |
| · 酶活测定方法 | 第43
页 |
| · SDS-PAGE 分析 | 第43
页 |
| · 淀粉酶活性染色 | 第43
页 |
| · 蛋白质含量测定方法 | 第43
页 |
| · 还原糖测定方法 | 第43
页 |
| · 酶对可溶性淀粉的水解效果及特征分析 | 第43-44
页 |
| · 结果与讨论 | 第44-48
页 |
| · 淀粉酶的分离纯化 | 第44-45
页 |
| · 酶的纯度检测 | 第45-46
页 |
| · 淀粉酶的纯化结果 | 第46
页 |
| · Bacillus sp.YX-1 淀粉酶对可溶性淀粉的水解分析 | 第46-48
页 |
| · 小结 | 第48-49
页 |
| 第四章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶酶学特性的研究 | 第49-61
页 |
| · 前言 | 第49
页 |
| · 材料与方法 | 第49-52
页 |
| · 菌种 | 第49
页 |
| · 培养基与溶液 | 第49-50
页 |
| · 主要试剂 | 第50
页 |
| · 主要仪器 | 第50
页 |
| · 酶活测定方法 | 第50
页 |
| · 蛋白质测定方法 | 第50
页 |
| · 还原糖测定方法 | 第50
页 |
| · 主要酶学性质分析 | 第50-51
页 |
| · AMY (YX)与商品中温α-淀粉酶的催化效果的比较 | 第51
页 |
| · 酶对生淀粉的水解效果 | 第51-52
页 |
| · 酶的部分氨基酸序列分析 | 第52
页 |
| · 结果与讨论 | 第52-60
页 |
| · 酶的最适反应pH 和pH 稳定性 | 第52
页 |
| · 酶的最适反应温度和热稳定性 | 第52-53
页 |
| · 金属离子对酶活的影响 | 第53-54
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶与商品中温α-淀粉酶的水解效果的比较 | 第54
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 α-淀粉酶对于生淀粉底物的水解效果 | 第54-59
页 |
| · 酶源和酶学特性生物多样性的比较 | 第59-60
页 |
| · 氨基酸序列分析 | 第60
页 |
| · 小结 | 第60-61
页 |
| 第五章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶的基因克隆及序列分析 | 第61-81
页 |
| · 前言 | 第61
页 |
| · 材料与方法 | 第61-67
页 |
| · 菌种与质粒 | 第61-62
页 |
| · 培养基与溶液 | 第62
页 |
| · 主要试剂 | 第62-63
页 |
| · 主要仪器 | 第63
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因的克隆 | 第63-65
页 |
| · pMD18-T-amy 测序质粒的构建 | 第65
页 |
| · 大肠杆菌E. coli JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第65-66
页 |
| · 质粒的小量制备(碱裂解法) | 第66
页 |
| · 重组质粒酶切鉴定 | 第66
页 |
| · 目的基因序列的测定与分析 | 第66-67
页 |
| · 结果与讨论 | 第67-80
页 |
| · Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因的扩增 | 第67-69
页 |
| · PCR 产物的克隆 | 第69-70
页 |
| · Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因的测序及序列分析 | 第70-74
页 |
| · Bacillus sp.YX-1 中温α-淀粉酶基因序列分析 | 第74-80
页 |
| · 小结 | 第80-81
页 |
| 第六章 Bacillus sp. YX-1 中温 α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第81-94
页 |
| · 前言 | 第81-82
页 |
| · 材料与方法 | 第82-85
页 |
| · 菌种与质粒 | 第82
页 |
| · 培养基与溶液 | 第82
页 |
| · 主要试剂 | 第82
页 |
| · 主要仪器 | 第82
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 的培养及基因组DNA 的提取 | 第82-83
页 |
| · 表达引物设计及目的基因的扩增 | 第83
页 |
| · PCR 扩增产物的回收纯化及浓缩 | 第83
页 |
| · 外源基因及质粒pET-28a 的酶切 | 第83
页 |
| · 外源基因与质粒pET-28a 的连接 | 第83-84
页 |
| · 表达重组质粒转化大肠杆菌 | 第84
页 |
| · 表达重组质粒的提取及鉴定 | 第84
页 |
| · 诱导表达培养 | 第84
页 |
| · 表达产物SDS-PAGE 分析 | 第84
页 |
| · 酶活力及蛋白含量的测定 | 第84-85
页 |
| · 重组中温α-淀粉酶的纯化 | 第85
页 |
| · 结果与讨论 | 第85-92
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因表达质粒的构建 | 第85-87
页 |
| · 表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第87-88
页 |
| · 酶活力的测定 | 第88-90
页 |
| · Bacillus sp. YX-1 中温α-淀粉酶基因表达效果的分析 | 第90-92
页 |
| · 重组α-淀粉酶的纯化 | 第92
页 |
| · 小结 | 第92-94
页 |
| 主要结论 | 第94-96
页 |
| 论文创新点 | 第96-97
页 |
| 致谢 | 第97-98
页 |
| 参考文献 | 第98-112
页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表(含待发表)的论文 | 第112-113
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| 附图 | 第113-119
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