论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-21页 |
| 材料和试剂 | 第21-24页 |
| · 材料 | 第21页 |
| · 恒河猴粪便 | 第21页 |
| · 细胞 | 第21页 |
| · 试剂 | 第21-24页 |
| 方法 | 第24-34页 |
| · 毒种的制备 | 第24页 |
| · 细胞培养 | 第24页 |
| · HEV接种(细胞株筛选阶段) | 第24-25页 |
| · HEV接种PLC/PRF/5细胞 | 第25页 |
| · 含HEV培养上清浓缩和粗纯 | 第25-26页 |
| · 病毒的pH3.0/pH11.0处理 | 第26页 |
| · 病毒的热灭活处理 | 第26页 |
| · 病毒脱脂处理 | 第26页 |
| · 含病毒上清电镜观察用铜网的制备 | 第26页 |
| · 含病毒细胞电镜观察用样品的制备 | 第26-27页 |
| · 细胞免疫荧光染色 | 第27-28页 |
| · pORF2抗原检测 | 第28页 |
| · 抗HEV全抗体检测 | 第28页 |
| · 抗HEV IgG抗体检测 | 第28页 |
| · 抗HEV IgM抗体检测 | 第28页 |
| · 中和试验 | 第28-29页 |
| · Trizol溶解细胞和细胞总RNA提取 | 第29-30页 |
| · 培养上清中病毒RNA提取 | 第30页 |
| · Realtime RT-PCR检测HEV RNA | 第30-31页 |
| · 基因芯片检测：由博奥生物有限公司检测,简要描述如下 | 第31页 |
| · 反转录合成细胞总cDNA | 第31-32页 |
| · 基因芯片验证Realtime PCR | 第32-34页 |
| 结果 | 第34-84页 |
| 第一部分：HEV体外细胞培养的建立及培养条件优化 | 第34-59页 |
| · HEV毒种制备及HEV RNA的Realtime RT-PCR定量检测 | 第35-36页 |
| · 候选细胞株的筛选 | 第36-37页 |
| · 候选细胞株的选择 | 第36页 |
| · 接种量确定 | 第36页 |
| · 筛选结果 | 第36-37页 |
| · 培养基的优化 | 第37-39页 |
| · 背景 | 第37页 |
| · MgCl_2对出毒水平的影响 | 第37页 |
| · DMEM作为生长培养基,DMEM/M199作为维持培养基模式下,对HEV出毒水平的影响 | 第37-38页 |
| · 同时使用DMEM/M199作为生长培养基和维持培养基的模式下,对HEV出毒水平的影响 | 第38-39页 |
| · 接种条件的优化 | 第39-43页 |
| · 优化前参数确定 | 第39-40页 |
| · 孵育时间的优化 | 第40-41页 |
| · 孵育温度的优化 | 第41页 |
| · 条件优化后不同浓度HEV接种后阳性率结果 | 第41-43页 |
| · DMEM/M199培养基与MEM培养基成份差异及差异成份对HEV出毒的影响 | 第43-47页 |
| · 胆固醇促进HEV出毒效果的确认和特征分析 | 第47-53页 |
| · DMEM/M199促进HEV出毒的评价 | 第47-48页 |
| · 胆固醇对HEV出毒的促进作用分析 | 第48-53页 |
| 讨论 | 第53-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 第二部分：HEV 4型培养系统的应用研究 | 第59-84页 |
| · HEV感染细胞形态学观察 | 第60-64页 |
| · HEV感染细胞的光镜检查 | 第60页 |
| · 免疫荧光染色 | 第60页 |
| · 激光共聚焦分析感染细胞 | 第60-63页 |
| · 透射电镜观察病毒颗粒 | 第63-64页 |
| · 细胞培养上清中HEV病毒颗粒是否带有包膜的免疫分析 | 第64-68页 |
| · HEV 4型对理化处理的敏感性 | 第68-69页 |
| · 抗HEV抗体的中和效果检测 | 第69-71页 |
| · HEV在PLC/PRF/5细胞中的传代培养 | 第71-72页 |
| · 基因芯片检测HEV感染诱导的宿主细胞基因表达谱变化 | 第72-75页 |
| · HEV感染诱导的宿主细胞基因表达谱变化 | 第72-73页 |
| · 芯片检测结果的Realtime PCR验证 | 第73-74页 |
| · 表达水平改变基因的基本功能注释 | 第74-75页 |
| · 干扰素-α2b(IFN-α2b)对HEV复制的抑制效应 | 第75-77页 |
| · IFN-α2b对HEV接种细胞的细胞毒作用评价 | 第75-76页 |
| · IFN-α2b对HEV出毒的抑制效应评价 | 第76-77页 |
| 讨论 | 第77-83页 |
| 小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 附录1: 主要仪器设备 | 第96-97页 |
| 附录2: 缩略语 | 第97-99页 |
| 附录3: 胆固醇促出毒作用分析检测结果和统计学分析 | 第99-103页 |
| 博士期间发表的论文 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
