论文目录 | |
中文摘要 | 第1-7
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英文摘要 | 第7-14
页 |
英汉缩写词简表 | 第14-16
页 |
前言 | 第16-20
页 |
实验流程总图 | 第20-26
页 |
第一章:构建真核质粒表达载体PcDNA3.1(-)Grp78p VP_3-Myc-CMV,PcDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3-Myc-CMV和PcDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc | 第26-43
页 |
· 材料 | 第26-28
页 |
· 质粒 | 第26-27
页 |
· 引物 | 第27
页 |
· 试剂 | 第27
页 |
· 主要的仪器设备 | 第27-28
页 |
· 方法 | 第28-32
页 |
· PcDNA3.1(-)Grp78p.VP3-Myc的构建 | 第28-30
页 |
· PcDNA3.1(-)Hre2.Grp78p.VP_3-Myc的构建 | 第30
页 |
· PcDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc的构建 | 第30-31
页 |
· PcDNA3.1(-)VP_3-Myc,PcDNA3.1(-)Grp78p.VP_3-Myc,PcDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3-Myc的巨细胞启动子的切除 | 第31-32
页 |
· 结果 | 第32-40
页 |
· Grp78pPCR 产物扩增结果 | 第32
页 |
· 真核质粒表达载体的CMV的酶切鉴定结果 | 第32-33
页 |
· 切除巨细胞启动子的PcDNA3.1(-)Grp78p.VP_3的构建 | 第33-35
页 |
· 切除巨细胞启动子的PCDNA3.1(-)Hre_2.Grp78p.VP_3质粒的测序结果 | 第35-37
页 |
· PCDNA3.1(-)VP_3-CMV质粒的测序结果 | 第37-39
页 |
· PCDNA3.1(-)CMV.VP_3-Myc质粒的测序结果 | 第39-40
页 |
· 讨论 | 第40-42
页 |
· 结论 | 第42-43
页 |
第二章:VP_3基因对鼻咽癌细胞CNE-2的杀伤作用 | 第43-53
页 |
· 材料 | 第43-44
页 |
· 质粒和细胞株 | 第43
页 |
· 引物 | 第43
页 |
· 试剂 | 第43-44
页 |
· 主要仪器和设备 | 第44
页 |
· 方法 | 第44-48
页 |
· 细胞培养及处理 | 第44
页 |
· 质粒PGV,PHGV和PVP3的大抽提及纯化 | 第44-45
页 |
· 将纯化质粒PGV,PHGV和PVP3转染CNE-2细胞株 | 第45
页 |
· RT-PCR鉴定目的基因的表达 | 第45-46
页 |
· 免疫印迹分析检测转染后VP3-Myc的蛋白表达水平 | 第46-47
页 |
· 细胞存活率测定 | 第47
页 |
· 统计学处理 | 第47-48
页 |
· 结果 | 第48-50
页 |
· 瞬时转染后CNE-2细胞VP_3基因的RT-PCR的表达结果 | 第48
页 |
· 瞬时转梁后CNE-2细胞VP_3-myc基因的蛋白表达结果 | 第48-49
页 |
· 瞬时转染后不同时间CNE-2细胞的存活率 | 第49-50
页 |
· 讨论 | 第50-52
页 |
· 结论 | 第52-53
页 |
第三章:5-氨基酮戊酸介导的光动力对人鼻咽癌CNE-2细胞株的杀伤作用 | 第53-61
页 |
· 材料 | 第53-54
页 |
· 细胞株及培养条件 | 第53
页 |
· 试剂 | 第53
页 |
· 仪器 | 第53-54
页 |
· 方法 | 第54-55
页 |
· 细胞培养 | 第54
页 |
· 光敏剂的准备 | 第54
页 |
· 细胞处理 | 第54-55
页 |
· 细胞存活率测定 | 第55
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· 统计学分析 | 第55
页 |
· 结果 | 第55-59
页 |
· 5-ALA在CNE-2细胞中的定位 | 第55-56
页 |
· 各组细胞在不同处理条件下的存活率比较 | 第56-59
页 |
· 讨论 | 第59-60
页 |
· 结论 | 第60-61
页 |
第四章:HRE_2.Grp_(78p)嵌合启动子调控VP_3表达结合鼻咽癌5-ALA-PDT/基因治疗的研究 | 第61-79
页 |
· 材料 | 第61-62
页 |
· 质粒和细胞株 | 第61
页 |
· 主要试剂 | 第61-62
页 |
· 主要仪器设备 | 第62
页 |
· 方法 | 第62-65
页 |
· 细胞培养 | 第62
页 |
· 细胞处理 | 第62
页 |
· 实验分组 | 第62-63
页 |
· 质粒瞬时转染CNE-2细胞 | 第63
页 |
· 转染后的光动力治疗 | 第63
页 |
· CCK-8比色法测定基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的存活率 | 第63-64
页 |
· Western-blotting检测转染后和转染联合光动力治疗后靶向基因的蛋白表达水平 | 第64
页 |
· 流式细胞术(FCM)观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的细胞凋亡 | 第64-65
页 |
· 电镜观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的超微结构 | 第65
页 |
· 统计学处理 | 第65
页 |
· 结果 | 第65-76
页 |
· 基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的鼻咽癌细胞CNE-2存活率的比较 | 第65-66
页 |
· 基因治疗和基因联合光动力治疗后靶向基因的蛋白表达水平情况 | 第66-71
页 |
· 流式细胞术(FCM)观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗的细胞凋亡的结果 | 第71-74
页 |
· 观察基因治疗,光动力治疗以及基因联合光动力治疗后CNE-2形态学变化 | 第74-76
页 |
· 讨论 | 第76-78
页 |
· 结论 | 第78-79
页 |
总结论 | 第79-80
页 |
参考文献 | 第80-89
页 |
综述 | 第89-102
页 |
致谢 | 第102-104
页 |
攻读学位期间主要研究成果 | 第104
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