论文目录 | |
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 1 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 光学工程与生物学 | 第16-17页 |
| 1.2 RSV研究背景及研究进展 | 第17-28页 |
| 1.2.1 RSV流行病学及病毒结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 RSV疫苗研究概况 | 第18-23页 |
| 1.2.2.1 RSV疫苗主要类型 | 第18-21页 |
| 1.2.2.2 RSV疫苗目标人群 | 第21-23页 |
| 1.2.3 DNA疫苗及CpG佐剂 | 第23-25页 |
| 1.2.4 RSV F蛋白 | 第25-26页 |
| 1.2.5 融合前F蛋白的最新研究进展 | 第26-28页 |
| 1.3 选题意义及研究方案 | 第28-34页 |
| 1.3.1 选题意义 | 第28-29页 |
| 1.3.2 研究方案 | 第29-34页 |
| 2 嵌入型CPG增强RSV F蛋白DNA疫苗的TH1偏向性及免疫效力研究 | 第34-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-37页 |
| 2.1.1 质粒、菌株与细胞 | 第34页 |
| 2.1.2 病毒株 | 第34页 |
| 2.1.3 主要试剂配制 | 第34-36页 |
| 2.1.3.1 重组质粒构建相关试剂 | 第35页 |
| 2.1.3.2 细胞实验相关试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.3.3 血清抗体检测相关试剂 | 第36页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第36页 |
| 2.1.5 实验用试剂盒 | 第36页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-47页 |
| 2.2.1 携带内源性佐剂的重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.2 RSV病毒的纯化与滴度检测 | 第38-40页 |
| 2.2.2.1 病毒的制备与纯化 | 第39页 |
| 2.2.2.2 病毒的滴度测定 | 第39-40页 |
| 2.2.3 福尔马林灭活的RSV的制备 | 第40页 |
| 2.2.4 免疫与攻毒 | 第40-41页 |
| 2.2.5 免疫后小鼠体液免疫效果分析 | 第41-42页 |
| 2.2.5.1 血清抗体的检测 | 第41-42页 |
| 2.2.5.2 中和抗体的检测 | 第42页 |
| 2.2.6 免疫后小鼠细胞免疫效果分析 | 第42-43页 |
| 2.2.7 免疫后小鼠免疫保护作用分析 | 第43-46页 |
| 2.2.7.1 以RSV攻击小鼠后肺病毒滴度检测 | 第43-45页 |
| 2.2.7.2 以RSV攻击小鼠后肺组织中细胞因子检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8 免疫后小鼠肺组织损伤分析 | 第46-47页 |
| 2.2.9 统计学分析 | 第47页 |
| 2.3 实验结果 | 第47-55页 |
| 2.3.1 高拷贝内源性CpG能增强DNA疫苗诱导的Th1偏向的免疫应答 | 第47-49页 |
| 2.3.1.1 高拷贝内源性CpG能增强RSV特异性血清抗体及Th1偏向的免疫应答 | 第47页 |
| 2.3.1.2 高拷贝内源性CpG能增强RSV特异性中和抗体应答 | 第47-48页 |
| 2.3.1.3 高拷贝内源性CpG能增强RSV特异性细胞免疫应答 | 第48-49页 |
| 2.3.2 高拷贝内源性CpG增强DNA疫苗的免疫保护作用 | 第49-51页 |
| 2.3.2.1 免疫后小鼠能抵抗RSV对肺组织的感染 | 第49-51页 |
| 2.3.2.2 免疫后小鼠能降低RSV感染引起的小鼠体重减轻 | 第51页 |
| 2.3.3 以高拷贝内源性CpG为佐剂的DNA疫苗可降低RSV感染引起的小鼠肺组织损伤 | 第51页 |
| 2.3.4 高拷贝内源性CpG为佐剂的DNA疫苗也可增强RSV感染后小鼠肺脏局部的Th1偏向性免疫应答 | 第51-55页 |
| 2.4 讨论 | 第55-56页 |
| 2.5 小结 | 第56-58页 |
| 3 突变弗林酶切割位点对RSV F蛋白表达量及融合前表位的影响 | 第58-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第58-60页 |
| 3.1.1 质粒、菌株与细胞 | 第58-59页 |
| 3.1.2 检测用RSV抗体 | 第59页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第59-60页 |
| 3.1.3.1 重组质粒构建相关试剂 | 第59页 |
| 3.1.3.2 细胞实验相关试剂 | 第59页 |
| 3.1.3.3 免疫印迹实验相关试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.4 主要实验试剂 | 第60页 |
| 3.1.5 实验用试剂盒 | 第60页 |
| 3.1.6 主要仪器 | 第60页 |
| 3.2 实验方法 | 第60-65页 |
| 3.2.1 可表达弗林酶切割位点突变的F蛋白的重组质粒的构建 | 第61-62页 |
| 3.2.2 可表达弗林酶切割位点突变的F蛋白的重组质粒的表达量及表位检测 | 第62-65页 |
| 3.2.2.1 重组质粒的表达水平检测 | 第62-64页 |
| 3.2.2.2 重组质粒表达的F蛋白融合前表位检测 | 第64-65页 |
| 3.2.3 突变体蛋白M1-F融合前空间结构模拟 | 第65页 |
| 3.2.4 统计学分析 | 第65页 |
| 3.3 实验结果 | 第65-70页 |
| 3.3.1 弗林酶切割位点突变的重组质粒的构建与表达 | 第65-67页 |
| 3.3.1.1 弗林酶切割位点突变的重组质粒的构建 | 第65页 |
| 3.3.1.2 弗林酶切割位点突变的重组质粒的表达 | 第65-67页 |
| 3.3.2 M1-F型重组质粒编码的F蛋白有更多的融合前表位 | 第67-69页 |
| 3.3.3 M1-F型重组F蛋白的融合前结构模拟 | 第69-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-71页 |
| 3.5 小结 | 第71-72页 |
| 4 基于M1-F的突变体及其编码质粒表达量、融合前表位及免疫效力研究 | 第72-100页 |
| 4.1 实验材料 | 第72-74页 |
| 4.1.1 质粒、菌株与细胞 | 第72-73页 |
| 4.1.2 检测用RSV抗体 | 第73页 |
| 4.1.3 病毒株 | 第73页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第73页 |
| 4.1.4.1 重组质粒构建相关试剂 | 第73页 |
| 4.1.4.2 细胞实验相关试剂 | 第73页 |
| 4.1.4.3 免疫印迹实验相关试剂 | 第73页 |
| 4.1.4.4 血清抗体检测相关试剂 | 第73页 |
| 4.1.5 主要实验试剂 | 第73-74页 |
| 4.1.6 实验用试剂盒 | 第74页 |
| 4.1.7 主要仪器 | 第74页 |
| 4.2 实验方法 | 第74-82页 |
| 4.2.1 用于中和抗体分析的重组rRSV-EGFP病毒的纯化与滴度检测 | 第74-75页 |
| 4.2.1.1 重组rRSV-EGFP病毒的纯化 | 第74-75页 |
| 4.2.1.2 重组rRSV-EGFP病毒的滴度检测 | 第75页 |
| 4.2.2 编码M1-F稳定性增强的突变体质粒的构建 | 第75-77页 |
| 4.2.3 基于M1-F突变体质粒的表达量及融合前表位的检测 | 第77-78页 |
| 4.2.3.1 重组质粒表达水平检测 | 第78页 |
| 4.2.3.2 重组质粒表达后融合前表位检测 | 第78页 |
| 4.2.4 M1-F突变体的稳定性检测 | 第78-80页 |
| 4.2.4.1 重组质粒表达的M1-F蛋白突变体在55℃下稳定性检测 | 第78-79页 |
| 4.2.4.2 各重组质粒表达量及突变体蛋白在不同温度下热稳定性的综合检测 | 第79-80页 |
| 4.2.5 编码稳定性增强的突变体质粒的免疫与RSV攻毒实验 | 第80页 |
| 4.2.6 免疫后小鼠体液免疫效果分析 | 第80-81页 |
| 4.2.6.1 血清抗体检测 | 第81页 |
| 4.2.6.2 中和抗体检测 | 第81页 |
| 4.2.7 免疫后小鼠免疫保护作用分析 | 第81页 |
| 4.2.8 免疫后小鼠肺组织损伤分析 | 第81页 |
| 4.2.9 统计学分析 | 第81-82页 |
| 4.3 实验结果 | 第82-96页 |
| 4.3.1 编码M1-F稳定性增强的突变体质粒的表达及融合前表位分析 | 第82-83页 |
| 4.3.1.1 编码M1-F稳定性增强的突变体质粒的构建及表达量比较分析 | 第82-83页 |
| 4.3.1.2 可高效表达M1-F稳定性增强的突变体的质粒所表达的融合前表位分析 | 第83页 |
| 4.3.2 M1-F稳定性增强突变体对热稳定性的增强 | 第83-92页 |
| 4.3.2.1 重组质粒表达的M1-F稳定性增强的突变体在55℃下显示更好的稳定性 | 第83-84页 |
| 4.3.2.2 各重组质粒表达量及突变体蛋白在不同温度下热稳定性的综合分析 | 第84-92页 |
| 4.3.3 以编码M1-F稳定性增强的突变体的质粒免疫小鼠可产生增强的体液免疫及保护作用 | 第92-96页 |
| 4.3.3.1 以编码M1-F稳定性增强的突变体的质粒免疫能增强小鼠体液免疫、降低攻毒后小鼠的肺病毒滴度 | 第92页 |
| 4.3.3.2 以编码M1-F稳定性增强的突变体的质粒免疫能减轻RSV感染引起的小鼠肺组织损伤 | 第92-96页 |
| 4.4 讨论 | 第96-98页 |
| 4.5 小结 | 第98-100页 |
| 5 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 附录A | 第110-112页 |
| 索引 | 第112-114页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第114-118页 |
| 学位论文数据集 | 第118页 |
