论文目录 | |
摘要 | 第1-4页 |
abstract | 第4-14页 |
第1章 前言 | 第14-35页 |
1.1 小檗碱的理化性质及药理作用 | 第14-22页 |
1.1.1 小檗碱及其理化性质 | 第14-15页 |
1.1.2 小檗碱与DNA间的相互作用 | 第15-16页 |
1.1.3 小檗碱与RNA间的相互作用 | 第16-18页 |
1.1.4 小檗碱药代动力学 | 第18-19页 |
1.1.5 小檗碱药理作用 | 第19-20页 |
1.1.6 小檗碱与体温调节 | 第20-22页 |
1.2 低温环境中体温调节及产热 | 第22-24页 |
1.2.1 体温调节 | 第22-23页 |
1.2.2 低温产热机理及产热组织 | 第23-24页 |
1.3 UCP家族 | 第24-25页 |
1.4 UCP1蛋白相关研究 | 第25-32页 |
1.4.1 UCP1蛋白结构 | 第25-26页 |
1.4.2 UCP1蛋白的功能 | 第26-27页 |
1.4.3 UCP1质子漏机理 | 第27-28页 |
1.4.4 UCP1活性调节信号通路 | 第28-29页 |
1.4.5 UCP1基因的转录调控 | 第29-32页 |
1.5 论文工作概述 | 第32-35页 |
1.5.1 论文研究内容和意义 | 第32页 |
1.5.2 论文思路 | 第32页 |
1.5.3 论文研究方案 | 第32-33页 |
1.5.4 论文的组织结构 | 第33-35页 |
第2章 实验材料与方法 | 第35-51页 |
2.1 实验材料 | 第35页 |
2.1.1 生化试剂 | 第35页 |
2.1.2 生物试剂盒 | 第35页 |
2.1.3 抗体 | 第35页 |
2.2 实验仪器 | 第35-36页 |
2.3 实验方法 | 第36-51页 |
2.3.1 ICR小鼠低温实验 | 第36页 |
2.3.2 组织总RNA提取与纯化 | 第36-37页 |
2.3.3 cDNA第一链合成 | 第37-38页 |
2.3.4 Real-timePCR引物设计及序列 | 第38-39页 |
2.3.5 Real-timePCR反应体系及条件 | 第39页 |
2.3.6 WesternBlot实验样品制备 | 第39-40页 |
2.3.7 WesternBlot实验 | 第40页 |
2.3.8 UCP1基因敲除小鼠繁殖 | 第40-41页 |
2.3.9 UCP1基因敲除小鼠基因组提取 | 第41页 |
2.3.10 UCP1基因敲除小鼠基因型鉴定 | 第41-42页 |
2.3.11 UCP1基因敲除小鼠低温实验 | 第42页 |
2.3.12 棕色脂肪组织原代细胞培养 | 第42-43页 |
2.3.13 棕色脂肪组织原代细胞分化 | 第43页 |
2.3.14 HIB-1B细胞培养及分化 | 第43页 |
2.3.15 细胞低温模型 | 第43-44页 |
2.3.16 MTT细胞毒实验 | 第44页 |
2.3.17 放线菌素D实验 | 第44-45页 |
2.3.18 RB1-pro-Ucp1(polyA~(+/+)或polyA~(-/-))重组质粒的构建 | 第45-46页 |
2.3.19 Ucp1长、短启动子重组质粒的构建 | 第46页 |
2.3.20 Ucp1长启动子突变体质粒的构建 | 第46-48页 |
2.3.21 质粒转染 | 第48页 |
2.3.22 共聚焦显微镜 | 第48-49页 |
2.3.23 荧光光谱检测BBR与DNA和RNA的结合 | 第49-50页 |
2.3.24 染色质免疫沉淀实验(ChIP) | 第50页 |
2.3.25 数据统计 | 第50-51页 |
第3章 小檗碱对低温下小鼠体温及产热相关基因的影响 | 第51-59页 |
3.1 本章引论 | 第51页 |
3.2 实验结果 | 第51-57页 |
3.2.1 小檗碱对低温环境下小鼠体温的影响 | 第51-53页 |
3.2.2 脑组织中小檗碱对产热相关基因的影响 | 第53-54页 |
3.2.3 肝组织中小檗碱对产热相关基因的影响 | 第54-55页 |
3.2.4 肌肉组织中小檗碱对产热相关基因的影响 | 第55页 |
3.2.5 棕色脂肪组织中小檗碱对产热相关基因的影响 | 第55-56页 |
3.2.6 整体对比各组织中小檗碱对产热相关基因的影响 | 第56-57页 |
3.3 本章小结 | 第57-59页 |
第4章 小檗碱对低温下UCP1基因的影响 | 第59-64页 |
4.1 本章引论 | 第59页 |
4.2 实验结果 | 第59-63页 |
4.2.1 小檗碱对低温下UCP1蛋白表达的经时影响 | 第59-60页 |
4.2.2 小檗碱对UCP家族基因表达影响 | 第60-61页 |
4.2.3 比较UCP1基因表达在各组织中的表达情况 | 第61-62页 |
4.2.4 棕色脂肪组织中小檗碱对UCP1基因上游信号通路的影响 | 第62-63页 |
4.3 本章小结 | 第63-64页 |
第5章 UCP1基因对小檗碱低温下体温调节作用的重要性 | 第64-69页 |
5.1 本章引论 | 第64页 |
5.2 实验结果 | 第64-68页 |
5.2.1 UCP1基因敲除小鼠的饲养与鉴定 | 第64-65页 |
5.2.2 小檗碱对UCP1基因缺陷小鼠体温的影响 | 第65-66页 |
5.2.3 小檗碱对UCP1基因敲除小鼠基因表达情况影响 | 第66-68页 |
5.3 本章小结 | 第68-69页 |
第6章 小檗碱对UCP1基因的表达调控的研究 | 第69-79页 |
6.1 本章引论 | 第69页 |
6.2 实验结果 | 第69-78页 |
6.2.1 小檗碱对HSL的表达及其磷酸化的影响 | 第69-71页 |
6.2.2 小檗碱对Adrβ3的mRNA和蛋白表达影响 | 第71页 |
6.2.3 利用Adrβ3受体抑制剂小檗碱药理作用靶组织 | 第71-73页 |
6.2.4 小檗碱对HIB-1B细胞的细胞毒性 | 第73-74页 |
6.2.5 HIB-1B细胞低温模型条件 | 第74-76页 |
6.2.6 小檗碱对低温下HIB-1B细胞给药剂量的确定 | 第76页 |
6.2.7 小檗碱对正常及低温下HIB-1B细胞内Ucp1基因表达的影响 | 第76-77页 |
6.2.8 小檗碱对低温下棕色脂肪组织原代细胞中Ucp1基因表达的影响 | 第77-78页 |
6.3 本章小结 | 第78-79页 |
第7章 小檗碱对UCP1基因转录启动及mRNA稳定性的影响 | 第79-87页 |
7.1 本章引论 | 第79页 |
7.2 实验结果 | 第79-86页 |
7.2.1 小檗碱对调控UCP1基因转录的上游因子的影响 | 第79-81页 |
7.2.2 小檗碱对Ucp1启动子的调控作用 | 第81-82页 |
7.2.3 小檗碱抑制Ucp1mRNA的降解 | 第82-83页 |
7.2.4 小檗碱与polyA的结合特性 | 第83-84页 |
7.2.5 构建Ucp1-GFPployA~(+/+)及ployA~(-/-)的质粒 | 第84-85页 |
7.2.6 小檗碱可通过ployA增加低温下Ucp1的含量 | 第85-86页 |
7.3 本章小结 | 第86-87页 |
第8章 小檗碱对Ucp1启动子的调控作用 | 第87-101页 |
8.1 本章引论 | 第87页 |
8.2 实验结果 | 第87-100页 |
8.2.1 研究不同长度Ucp1启动子转录启动能力的差异 | 第87-89页 |
8.2.2 荧光光谱检测转录元件DNA与小檗碱的结合性 | 第89-91页 |
8.2.3 小檗碱与TATA框和NFE2元件DNA序列结合特点 | 第91-92页 |
8.2.4 Ucp1转录元件突变体重组质粒的构建与鉴定 | 第92-93页 |
8.2.5 小檗碱对Ucp1启动子及转录元件突变体转录启动的影响 | 第93-96页 |
8.2.6 小檗碱对Ucp1启动子及转录元件突变体转录启动的影响 | 第96-98页 |
8.2.7 温度对小檗碱与DNA序列结合力的影响 | 第98-99页 |
8.2.8 ChIP实验检测不同温度的影响 | 第99-100页 |
8.3 本章小结 | 第100-101页 |
第9章 总结与展望 | 第101-107页 |
9.1 总结与讨论 | 第101-105页 |
9.1.1 低温下小檗碱的体温调节作用依赖于Ucp1基因 | 第101-102页 |
9.1.2 小檗碱可通过神经系统和棕色脂肪组织双重调控Ucp1基因 | 第102页 |
9.1.3 小檗碱增加胞内Ucp1mRNA的机制 | 第102-103页 |
9.1.4 小檗碱通过NRE2增强子促进UCP1基因的转录,具有温度依赖性 | 第103-104页 |
9.1.5 低温下小檗碱抑制机体体温下降的机制总结 | 第104-105页 |
9.2 结论 | 第105页 |
9.3 论文展望 | 第105-107页 |
9.3.1 小檗碱与能量代谢相关疾病 | 第105页 |
9.3.2 小檗碱对低温下细胞的保护作用 | 第105-107页 |
第10章 其他工作I白芷综合研究:肥胖和脂肪肝 | 第107-122页 |
10.1 引言 | 第107页 |
10.2 材料和方法 | 第107-111页 |
10.2.1 动物 | 第107页 |
10.2.2 化学试剂和材料 | 第107-108页 |
10.2.3 色谱系统和条件 | 第108页 |
10.2.4 白芷的急性毒性 | 第108页 |
10.2.5 高脂饮食诱导高脂血症小鼠模型 | 第108页 |
10.2.6 TritonWR1339诱导高脂血症小鼠模型 | 第108-109页 |
10.2.7 小鼠肝脏蛋白的LC-MS/MS分析 | 第109页 |
10.2.8 细胞培养 | 第109页 |
10.2.9 细胞毒性测定 | 第109页 |
10.2.10 高脂细胞模型的建立 | 第109页 |
10.2.11 实时定量PCR检测 | 第109-110页 |
10.2.12 Western Blot | 第110页 |
10.2.13 统计分析 | 第110-111页 |
10.3 结果 | 第111-120页 |
10.3.1 化学性质和白芷的急性毒性 | 第111-112页 |
10.3.2 高脂饮食高脂血症小鼠的影响 | 第112-113页 |
10.3.3 小鼠肝的蛋白质的LC-MS/MS分析 | 第113-115页 |
10.3.4 使用qPCR和Western blot检测验证肝脏蛋白质组学结果 | 第115页 |
10.3.5 白芷对Triton WR1339高脂血症小鼠的影响 | 第115-118页 |
10.3.6 在HepG2细胞对TC和TG的影响 | 第118-119页 |
10.3.7 LIPC和PPARγ表达 | 第119-120页 |
10.4 结论与讨论 | 第120-122页 |
第11章 其他工作II甘遂对正常小鼠肝脏相关炎性因子表达的影响 | 第122-130页 |
11.1 前言 | 第122页 |
11.2 材料与方法 | 第122-124页 |
11.2.1 药品与试剂 | 第122页 |
11.2.2 实验动物 | 第122-123页 |
11.2.3 HPLC色谱条件 | 第123页 |
11.2.4 小鼠实验设计 | 第123页 |
11.2.5 mRNA表达 | 第123-124页 |
11.2.6 数据分析 | 第124页 |
11.3 实验结果 | 第124-129页 |
11.3.0 甘遂醇提取物HPLC色谱图分析 | 第124页 |
11.3.1 甘遂醇提物对小鼠肝组织的影响 | 第124页 |
11.3.2 甘遂醇提物对小鼠血液ALT含量及肝脏炎性基因表达的影响 | 第124-129页 |
11.4 结论与讨论 | 第129-130页 |
第12章 观察用于评价致敏原的IgG-HepG2细胞激活过程中炎性因子表达 | 第130-136页 |
12.1 引言 | 第130页 |
12.2 材料与方法 | 第130-132页 |
12.2.1 材料和仪器 | 第130页 |
12.2.2 实验方法 | 第130-131页 |
12.2.3 数据获取与处理 | 第131-132页 |
12.3 实验结果 | 第132-134页 |
12.3.1 葛根素、LPS对相关炎性因子的影响 | 第132页 |
12.3.2 细胞炎性因子mRNA表达的变化 | 第132-133页 |
12.3.3 对模式识别受体表达的影响 | 第133-134页 |
12.4 结论与讨论 | 第134-136页 |
参考文献 | 第136-154页 |
致谢 | 第154-156页 |
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第156页 |