论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 英文缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-35页 |
| 1.1 植物对干旱胁迫的感知及响应 | 第12-22页 |
| 1.1.1 干旱胁迫对植物生长的影响 | 第12-13页 |
| 1.1.2 植物响应干旱胁迫的生理机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 植物响应干旱胁迫的分子机制 | 第14-18页 |
| 1.1.4 ABA调节气孔运动对植物抗旱的影响 | 第18-22页 |
| 1.2 植物响应盐胁迫的研究进展 | 第22-27页 |
| 1.2.1 盐胁迫对植物生长的影响 | 第22页 |
| 1.2.2 植物响应盐胁迫的生理机制 | 第22-23页 |
| 1.2.3 植物响应盐胁迫的分子机制 | 第23-27页 |
| 1.3 ASR蛋白家族的研究进展 | 第27-31页 |
| 1.3.1 ASR蛋白的发现 | 第27-28页 |
| 1.3.2 ASR蛋白的结构特征 | 第28-29页 |
| 1.3.3 ASR蛋白的生物学功能 | 第29-31页 |
| 1.4 谷子的介绍 | 第31-34页 |
| 1.4.1 谷子的重要地位和特色 | 第31-32页 |
| 1.4.2 谷子的研究进展 | 第32-34页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料和方法 | 第35-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-40页 |
| 2.1.1 宿主菌 | 第35页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第35页 |
| 2.1.3 植物材料 | 第35页 |
| 2.1.4 各种酶及实验试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第36-37页 |
| 2.1.6 实验所用引物及探针 | 第37-40页 |
| 2.2 常用培养基及溶液配制 | 第40-42页 |
| 2.2.1 常用培养基配制 | 第40-41页 |
| 2.2.2 常用溶液的配制 | 第41-42页 |
| 2.3 实验所用试剂的配制 | 第42-48页 |
| 2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.3.2 碱裂解法小提质粒DNA | 第42-43页 |
| 2.3.3 植物基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 2.3.4 农杆菌介导拟南芥的遗传转化 | 第43页 |
| 2.3.5 烟草表皮亚细胞定位及烟草转录激活实验 | 第43-44页 |
| 2.3.6 GST融合蛋白的原核诱导及纯化 | 第44页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE及Western blot | 第44-45页 |
| 2.3.8 凝胶阻滞实验 | 第45页 |
| 2.3.9 PEG/LiAc法转化酵母 | 第45页 |
| 2.3.10 酵母单杂交实验 | 第45-46页 |
| 2.3.11 GUS组织化学染色 | 第46页 |
| 2.3.12 DAB化学染色 | 第46页 |
| 2.3.13 谷子原生质体的制备及瞬时转化 | 第46-47页 |
| 2.3.14 气孔开度实验 | 第47-48页 |
| 2.4 实验方法 | 第48-61页 |
| 2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 2.4.2 质粒或连接产物转化大肠杆菌 | 第48页 |
| 2.4.3 农杆菌感受态细胞的制备及电击转化 | 第48-49页 |
| 2.4.4 碱裂解法提取质粒DNA | 第49页 |
| 2.4.5 SDS法小提植物基因组DNA | 第49页 |
| 2.4.6 CTAB法小提植物基因组DNA | 第49-50页 |
| 2.4.7 目的基因的PCR扩增 | 第50页 |
| 2.4.8 TRIzol法提取植物总RNA | 第50-51页 |
| 2.4.9 cDNA第一链的合成、RT-PCR和荧光定量PCR | 第51-52页 |
| 2.4.10 酵母转录激活实验 | 第52-53页 |
| 2.4.11 酵母单杂交实验 | 第53页 |
| 2.4.12 GST融合蛋白的原核诱导表达及纯化 | 第53-54页 |
| 2.4.13 SDS-PAGE和Western blot | 第54-55页 |
| 2.4.14 凝胶阻滞实验 | 第55-56页 |
| 2.4.15 谷子原生质体的制备及瞬时转化 | 第56页 |
| 2.4.16 烟草表皮亚细胞定位实验 | 第56-57页 |
| 2.4.17 烟草中的转录激活实验 | 第57页 |
| 2.4.18 农杆菌转化谷子愈伤组织 | 第57-58页 |
| 2.4.19 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第58页 |
| 2.4.20 GUS组织化学染色 | 第58-59页 |
| 2.4.21 DAB组织化学染色 | 第59页 |
| 2.4.22 植物培养 | 第59页 |
| 2.4.23 拟南芥、谷子和玉米胁迫处理实验 | 第59-60页 |
| 2.4.24 叶绿素含量的测定 | 第60-61页 |
| 第三章 谷子ASR基因家族的鉴定和分析 | 第61-69页 |
| 3.1 前言 | 第61页 |
| 3.2 谷子中ASR蛋白的结构分析及同源性比对 | 第61-63页 |
| 3.3 谷子ASR基因家族表达模式分析 | 第63-69页 |
| 3.3.1 ASR基因家族组织表达模式分析 | 第63-65页 |
| 3.3.2 ASR基因家族在逆境下的表达模式分析 | 第65-69页 |
| 第四章 谷子SiASR4基因对植物响应非生物胁迫的作用 | 第69-98页 |
| 4.1 前言 | 第69页 |
| 4.2 SiASR4生物信息学分析 | 第69-70页 |
| 4.3 SiASR4自身特性分析 | 第70-75页 |
| 4.3.1 SiASR4组织表达特性 | 第70-71页 |
| 4.3.2 SiASR4蛋白的亚细胞定位 | 第71-73页 |
| 4.3.3 SiASR4转录活性分析 | 第73-75页 |
| 4.4 SiASR4提高拟南芥对干旱及盐胁迫的耐受性 | 第75-83页 |
| 4.4.1 异源表达SiASR4转基因拟南芥的获得 | 第75-76页 |
| 4.4.2 异源表达SiASR4转基因拟南芥在盐胁迫下的表型观察 | 第76-79页 |
| 4.4.3 异源表达SiASR4转基因拟南芥在干旱胁迫下的表型观察 | 第79-82页 |
| 4.4.4 ABA等处理异源表达SiASR4转基因拟南芥的气孔运动情况 | 第82-83页 |
| 4.5 超表达SiASR4增强谷子对干旱及盐胁迫的耐受能力 | 第83-89页 |
| 4.5.1 转SiASR4-OE超表达载体和SiASR4-RNAi干扰载体转基因谷子的获得 | 第83-86页 |
| 4.5.2 转基因谷子种子在萌发期抗盐性和抗旱性分析 | 第86-87页 |
| 4.5.3 转基因谷子在干旱胁迫下的表型观察 | 第87-88页 |
| 4.5.4 转基因谷子在盐胁迫下的表型观察 | 第88-89页 |
| 4.6 过表达SiASR4拟南芥和谷子植株中ROS积累量降低 | 第89-90页 |
| 4.7 SiASR4增强玉米对干旱及盐胁迫的耐受能力 | 第90-92页 |
| 4.7.1 异源表达SiASR4玉米在盐胁迫下的表型观察 | 第90-91页 |
| 4.7.2 异源表达SiASR4玉米在干旱胁迫下的表型观察 | 第91-92页 |
| 4.8 SiASR4受谷子DREB类转录因子SiARDP正向调控 | 第92-95页 |
| 4.8.1 SiASR4启动子区分析 | 第92-93页 |
| 4.8.2 SiARDP能够在体内及体外结合SiASR4启动子区 | 第93-95页 |
| 4.8.3 SiASR4在SiARDP超表达谷子中的表达量分析 | 第95页 |
| 4.9 SiASR4激活胁迫响应相关基因的表达 | 第95-98页 |
| 4.9.1 在异源表达SiASR4的拟南芥中胁迫响应相关基因表达分析 | 第95-96页 |
| 4.9.2 在超表达SiASR4的谷子中胁迫响应相关基因的表达分析 | 第96-98页 |
| 第五章 谷子SiASR3和SiASR9基因的克隆及分析 | 第98-106页 |
| 5.1 SiASR3和SiASR9基因编码序列的克隆 | 第98页 |
| 5.2 SiASR3和SiASR9蛋白的亚细胞定位 | 第98-99页 |
| 5.3 SiASR3和SiASR9转录激活活性分析 | 第99-100页 |
| 5.4 异源表达SiASR3和SiASR9拟南芥在逆境下表型观察 | 第100-104页 |
| 5.4.1 pCambia1307-SiASR3和pCambia1307-SiASR9过表达载体的构建 | 第100-101页 |
| 5.4.2 异源表达SiASR3和SiASR9拟南芥的获得 | 第101-102页 |
| 5.4.3 异源表达SiASR3和SiASR9拟南芥在非生物胁迫下的表型观察 | 第102-104页 |
| 5.5 SiASR3和SiASR9在拟南芥体内可能存在26S蛋白酶体降解途径 | 第104-106页 |
| 第六章 讨论 | 第106-110页 |
| 6.1 在谷子中鉴定了ASR基因家族 | 第106页 |
| 6.2 SiASR4蛋白亚细胞定位与其功能的关系 | 第106页 |
| 6.3 SiASR4超表达增强转基因植株抵抗干旱和盐胁迫的能力 | 第106-107页 |
| 6.4 SiASR4在植物响应干旱和盐胁迫中可能存在的作用机制 | 第107-108页 |
| 6.5 SiASR4的表达受DREB类转录因子SiARDP的调控 | 第108页 |
| 6.6 SiASR3和SiASR9受翻译后调节作用 | 第108-109页 |
| 6.7 进一步研究设想 | 第109-110页 |
| 第七章 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 附录Ⅰ SiASR4在玉米品质改良中的应用 | 第127-135页 |
| 1.1 研究背景 | 第127-128页 |
| 1.2 SiASR4在玉米品质改良中的研究结果 | 第128-133页 |
| 1.3 结论 | 第133-134页 |
| 1.4 参考文献 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 个人简历 | 第136页 |
