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溶藻弧菌噬菌体特性及其防控刺参感染的研究

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溶藻弧菌噬菌体特性及其防控刺参感染的研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-9页
缩写词第9-15页
引言第15-17页
1 绪论第17-50页
  1.1 刺参养殖现状第17-20页
    1.1.1 刺参的生物学性状及分布第17-18页
    1.1.2 营养和药用价值第18页
    1.1.3 发展刺参产业的经济及生态意义第18页
    1.1.4 制约刺参养殖业发展的瓶颈第18-20页
  1.2 刺参弧菌病与溶藻弧菌第20-23页
    1.2.1 弧菌性疾病第20-21页
    1.2.2 刺参腐皮综合征第21-22页
    1.2.3 溶藻弧菌第22-23页
  1.3 刺参的非特异性免疫第23-25页
    1.3.1 体壁防御第24页
    1.3.2 细胞免疫第24页
    1.3.3 体液免疫第24-25页
    1.3.4 非特异性免疫相关酶第25页
  1.4 噬菌体的发现、分类及生物学第25-34页
    1.4.1 噬菌体的发现及主要里程碑事件第25-26页
    1.4.2 噬菌体的分类第26-31页
    1.4.3 噬菌体的生物学特性第31-34页
  1.5 噬菌体在水产养殖中的生物防控第34-41页
    1.5.1 噬菌体在水产领域中的应用第35-38页
    1.5.2 噬菌体作为生物抗菌制剂在水产领域中应用的优势第38-39页
    1.5.3 噬菌体在水产领域中应用的瓶颈问题及解决方法第39-40页
    1.5.4 噬菌体作为水产动物抗菌剂的安全性第40-41页
  1.6 噬菌体基因组的相关研究第41-49页
    1.6.1 噬菌体的基因组测序第41-46页
    1.6.2 溶藻弧菌噬菌体的全基因组信息第46页
    1.6.3 噬菌体内溶素的研究第46-47页
    1.6.4 噬菌体与宿主菌的协同进化对噬菌体治疗的影响第47-49页
  1.7 本论文的主要研究目的第49-50页
2 溶藻弧菌及其噬菌体的分离纯化及其特性第50-80页
  2.1 前言第50页
  2.2 实验材料和设备第50-53页
    2.2.1 实验动物第50-51页
    2.2.2 主要试剂第51页
    2.2.3 引物合成第51-52页
    2.2.4 仪器设备第52-53页
    2.2.5 溶液配制第53页
  2.3 实验方法第53-62页
    2.3.1 溶藻弧菌的分离纯化第53-54页
    2.3.2 溶藻弧菌的形态学鉴定第54页
    2.3.3 溶藻弧菌生理生化指标检测第54页
    2.3.4 分子生物学鉴定第54-56页
    2.3.5 分离株的药敏分析第56-57页
    2.3.6 非溶源性宿主菌株验证第57页
    2.3.7 半数致死量(LD_(50))试验第57-58页
    2.3.8 噬菌体的分离第58-59页
    2.3.9 噬菌体的效价测定第59页
    2.3.10 噬菌体的扩大培养第59-60页
    2.3.11 高纯度噬菌体颗粒的制备第60页
    2.3.12 噬菌体的形态观察第60页
    2.3.13 氯仿敏感性测试第60页
    2.3.14 噬菌体宿主谱的测定第60-61页
    2.3.15 噬菌体一步生长曲线第61页
    2.3.16 体外抑菌实验第61-62页
    2.3.17 噬菌体酸碱耐受性实验第62页
  2.4 实验结果第62-76页
    2.4.1 溶藻弧菌的分离纯化第62-63页
    2.4.2 溶藻弧菌的形态学鉴定第63-64页
    2.4.3 生理生化指标检测第64-66页
    2.4.4 溶藻弧菌的分子生物学鉴定第66-69页
    2.4.5 分离株的药敏分析第69页
    2.4.6 非溶源性宿主菌株验证第69页
    2.4.7 半数致死量(LD_(50))试验结果第69-70页
    2.4.8 溶藻弧菌Z1210裂解性噬菌体的分离第70-71页
    2.4.9 噬菌体透射电镜观察结果第71-72页
    2.4.10 噬菌体氯仿敏感性测试第72页
    2.4.11 噬菌体宿主谱分析第72-73页
    2.4.12 一步生长曲线第73-74页
    2.4.13 噬菌体的体外抑菌实验第74-75页
    2.4.14 噬菌体酸碱耐受实验第75-76页
  2.5 讨论第76-79页
  2.6 小结第79-80页
3 噬菌体PVA1的全基因组分析及其内溶素基因的克隆表达和活性评价第80-107页
  3.1 前言第80-81页
  3.2 实验材料和设备第81-83页
    3.2.1 噬菌体及细菌第81页
    3.2.2 主要试剂第81-82页
    3.2.3 引物合成第82页
    3.2.4 仪器设备第82页
    3.2.5 溶液配制第82-83页
  3.3 实验方法第83-88页
    3.3.1 噬菌体PVA1基因组DNA的提取第83-84页
    3.3.2 噬菌体PVA1的全基因组测序第84-85页
    3.3.3 噬菌体PVA1的全基因组分析第85页
    3.3.4 噬菌体PVA1内溶素基因gp60的生物信息学分析第85-86页
    3.3.5 噬菌体PVA1内溶素基因的原核表达及蛋白活性的初步验证第86-88页
    3.3.6 数据统计分析第88页
  3.4 实验结果第88-103页
    3.4.1 噬菌体PVA1基因组的提取第88-90页
    3.4.2 噬菌体PVA1基因组碱基组成及开放阅读框预测第90页
    3.4.3 噬菌体PVA1基因组推定基因功能的预测与全基因组结构分析第90-91页
    3.4.4 噬菌体PVA1功能基因比较进化分析第91-96页
    3.4.5 噬菌体PVA1内溶素蛋白质功能及理化特性分析第96-98页
    3.4.6 内溶素信号肽及跨膜区域的预测第98-99页
    3.4.7 内溶素gp60基因编码蛋白的二级结构预测第99-100页
    3.4.8 内溶素gp60基因编码蛋白的三级结构预测第100-101页
    3.4.9 内溶素gp60基因片段的扩增及克隆第101-102页
    3.4.10 重组大肠杆菌初步诱导表达第102页
    3.4.11 浊度法检测重组内溶素的裂解活性第102-103页
  3.5 讨论第103-105页
  3.6 小结第105-107页
4 噬菌体防控溶藻弧菌感染的效果及对刺参非特异性免疫应答的影响第107-131页
  4.1 前言第107-108页
  4.2 实验材料和设备第108-109页
    4.2.1 实验动物第108页
    4.2.2 主要试剂第108页
    4.2.3 仪器设备第108-109页
    4.2.4 实验用噬菌体和菌株第109页
    4.2.5 饲料原料第109页
  4.3 实验方法第109-114页
    4.3.1 实验用刺参的暂养第109页
    4.3.2 攻毒用溶藻弧菌的制备第109页
    4.3.3 实验用噬菌体的制备第109-110页
    4.3.4 噬菌体对刺参溶藻弧菌浸浴攻毒的保护效果考察第110页
    4.3.5 刺参溶藻弧菌腹腔注射攻毒的噬菌体治疗试验第110-111页
    4.3.6 刺参生存率的测定第111页
    4.3.7 施用噬菌体对攻毒刺参非特异性免疫应答的影响第111页
    4.3.8 溶菌酶(LYZ)活性的测定第111页
    4.3.9 酸性磷酸酶(ACP)活性的测定第111-112页
    4.3.10 过氧化物酶(POD)活性的测定第112页
    4.3.11 一氧化氮合酶(NOS)活性的测定第112页
    4.3.12 饲喂试验的饲料制备第112页
    4.3.13 饲料基础成分分析第112-113页
    4.3.14 刺参的饲喂试验第113页
    4.3.15 刺参生长性能分析第113页
    4.3.16 饲喂试验中刺参体腔液免疫相关酶活的检测第113-114页
    4.3.17 饲喂试验中刺参肠道弧菌数量与溶藻弧菌噬菌体数量的变化第114页
    4.3.18 饲喂试验后的攻毒试验第114页
    4.3.19 数据统计分析第114页
  4.4 实验结果第114-126页
    4.4.1 不同噬菌体最佳保护效果的施用浓度第114-116页
    4.4.2 不同噬菌体与抗生素对溶藻弧菌浸浴攻毒的预防效果第116-117页
    4.4.3 不同噬菌体与抗生素对溶藻弧菌腹腔注射攻毒的治疗效果第117-118页
    4.4.4 刺参体腔液免疫相关酶活性第118-122页
    4.4.5 生长性能第122-123页
    4.4.6 刺参体腔液免疫相关酶活性第123-124页
    4.4.7 饲喂试验中刺参肠道弧菌数量与溶藻弧菌噬菌体数量的变化第124-125页
    4.4.8 抵御病原菌感染的试验结果第125-126页
  4.5 讨论第126-129页
  4.6 小结第129-131页
5 结论与展望第131-133页
  5.1 结论第131-132页
  5.2 展望第132-133页
创新点摘要第133-134页
参考文献第134-148页
附录A pET30a-gp60质粒测序结果第148-149页
作者简介第149页
攻读博士学位期间科研项目及科研成果第149-152页
致谢第152-153页

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