论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-15页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第15-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-41页 |
| 1.1 猪流行性腹泻概述 | 第18-26页 |
| 1.1.1 PED的临床症状、致病机理及病理变化 | 第18页 |
| 1.1.2 PED流行病学特点 | 第18页 |
| 1.1.3 PED流行情况 | 第18-20页 |
| 1.1.4 PEDV病原学特征 | 第20页 |
| 1.1.5 PEDV基因结构 | 第20-21页 |
| 1.1.6 PEDV的基因功能研究进展 | 第21-24页 |
| 1.1.7 PED诊断 | 第24-25页 |
| 1.1.8 PED的疫苗研究及防控进展 | 第25-26页 |
| 1.2 单克隆抗体研究进展及应用 | 第26-29页 |
| 1.2.1 单克隆抗体概述 | 第26-27页 |
| 1.2.2 单克隆抗体在猪病中的研究进展及应用 | 第27-28页 |
| 1.2.3 单克隆抗体在PEDV中的研究进展及应用 | 第28-29页 |
| 1.3 蛋白质组学技术研究及其应用 | 第29-32页 |
| 1.3.1 蛋白质组学概述 | 第29页 |
| 1.3.2 蛋白质组学在病毒学研究中的应用 | 第29-30页 |
| 1.3.3 同位素标记相对与绝对定量（iTRAQ）技术 | 第30-32页 |
| 1.4 细胞自噬研究进展 | 第32-40页 |
| 1.4.1 细胞自噬概述 | 第32页 |
| 1.4.2 细胞自噬的分类 | 第32-33页 |
| 1.4.3 细胞自噬的分子机制 | 第33-35页 |
| 1.4.4 细胞自噬常用研究手段 | 第35-37页 |
| 1.4.5 细胞自噬与病毒感染 | 第37-38页 |
| 1.4.6 细胞自噬与炎症反应 | 第38页 |
| 1.4.7 细胞自噬与内质网应激 | 第38-39页 |
| 1.4.8 细胞自噬与细胞凋亡 | 第39-40页 |
| 1.5 立题依据 | 第40-41页 |
| 第2章 PEDV单克隆抗体的制备及应用 | 第41-60页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第41页 |
| 2.2 试验材料 | 第41-44页 |
| 2.2.1 细胞、毒株、菌株 | 第41页 |
| 2.2.2 实验动物 | 第41页 |
| 2.2.3 载体与质粒 | 第41页 |
| 2.2.4 主要仪器与试剂 | 第41-42页 |
| 2.2.5 相关试剂及其配制 | 第42-44页 |
| 2.3 试验方法 | 第44-52页 |
| 2.3.1 重组蛋白的表达及纯化 | 第44页 |
| 2.3.2 单克隆抗体的制备流程 | 第44-47页 |
| 2.3.3 间接酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选阳性克隆 | 第47-48页 |
| 2.3.4 阳性杂交瘤细胞的克隆（有限稀释法） | 第48-49页 |
| 2.3.5 单克隆抗体的大量制备 | 第49页 |
| 2.3.6 单克隆抗体的间接免疫荧光（IFA）验证 | 第49页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第49-50页 |
| 2.3.8 单克隆抗体的纯化 | 第50-51页 |
| 2.3.9 抗PEDV-S1D单克隆抗体特异性检测 | 第51页 |
| 2.3.10 单克隆抗体分型的鉴定 | 第51页 |
| 2.3.11 仔猪肠道免疫组织化学分析（SABC 染色法） | 第51-52页 |
| 2.3.12 IFA快速检测方法的建立 | 第52页 |
| 2.4 结果与分析 | 第52-58页 |
| 2.4.1 PEDV S1D蛋白的纯化及鉴定 | 第52-53页 |
| 2.4.2 PEDV S1D单克隆抗体的制备及初步验证 | 第53-54页 |
| 2.4.3 单克隆抗体的纯化及特性分析 | 第54-57页 |
| 2.4.4 基于单克隆抗体的PEDV快速诊断方法的初步建立及应用 | 第57-58页 |
| 2.5 讨论 | 第58-59页 |
| 2.6 小结 | 第59-60页 |
| 第3章 PEDV强弱毒株感染Vero细胞的蛋白质组学分析 | 第60-94页 |
| 3.1 研究目的及意义 | 第60页 |
| 3.2 试验材料 | 第60-62页 |
| 3.2.1 细胞、毒株 | 第60页 |
| 3.2.2 主要试剂与试剂盒 | 第60-61页 |
| 3.2.3 主要培养基及溶液的配制 | 第61页 |
| 3.2.4 主要缓冲液及相关试剂的配制 | 第61页 |
| 3.2.5 主要实验器材 | 第61-62页 |
| 3.2.6 分子生物学信息软件 | 第62页 |
| 3.3 试验方法 | 第62-72页 |
| 3.3.1 PEDV的增殖 | 第62页 |
| 3.3.2 病毒滴度测定 | 第62-63页 |
| 3.3.3 病毒RNA的提取及实时绝对荧光定量PCR | 第63-65页 |
| 3.3.4 间接免疫荧光实验 | 第65页 |
| 3.3.5 用于蛋白质组学分析的细胞样品的制备 | 第65-66页 |
| 3.3.6 细胞总蛋白的提取及定量 | 第66页 |
| 3.3.7 FASP方法酶解 | 第66-67页 |
| 3.3.8 iTRAQ试剂标记 | 第67页 |
| 3.3.9 第一维高PH-RP液相分离 | 第67-68页 |
| 3.3.10 第二维反相液质联用RPLC-MS | 第68页 |
| 3.3.11 生物信息学分析 | 第68-70页 |
| 3.3.12 细胞总RNA的提取及实时相对定量PCR | 第70-72页 |
| 3.3.13 Western Blot试验 | 第72页 |
| 3.3.14 统计学分析 | 第72页 |
| 3.4 结果与分析 | 第72-88页 |
| 3.4.1 PEDV强弱毒株同源分析及在Vero细胞上增殖的动力学分析 | 第72-75页 |
| 3.4.2 蛋白质的鉴定 | 第75-78页 |
| 3.4.3 样品间重复性分析 | 第78-79页 |
| 3.4.4 蛋白质的定量及差异蛋白的筛选 | 第79页 |
| 3.4.5 差异蛋白的GO分类 | 第79-81页 |
| 3.4.6 差异蛋白的功能性特征分析 | 第81-83页 |
| 3.4.7 差异蛋白互作网络分析 | 第83-86页 |
| 3.4.8 差异蛋白的验证 | 第86页 |
| 3.4.9 PEDV感染导致翻译调控水平和炎症反应相关通路失调 | 第86-88页 |
| 3.5 讨论 | 第88-93页 |
| 3.5.1 宿主蛋白质的合成 | 第88-89页 |
| 3.5.2 细胞免疫反应 | 第89-91页 |
| 3.5.3 GTPase家族和细胞维持 | 第91-92页 |
| 3.5.4 其它差异蛋白 | 第92-93页 |
| 3.6 小结 | 第93-94页 |
| 第4章 PEDV感染Vero细胞诱导细胞自噬的机制研究 | 第94-113页 |
| 4.1 研究目的及意义 | 第94页 |
| 4.2 试验材料 | 第94-95页 |
| 4.2.1 细胞、毒株、菌株 | 第94页 |
| 4.2.2 载体与质粒 | 第94页 |
| 4.2.3 抗体、siRNA及主要化学试剂 | 第94-95页 |
| 4.2.4 培养基与主要缓冲液的配制 | 第95页 |
| 4.2.5 主要实验仪器及设备 | 第95页 |
| 4.3 试验方法 | 第95-100页 |
| 4.3.1 PEDV增殖实验 | 第95页 |
| 4.3.2 细胞活力的测定（MTT法） | 第95页 |
| 4.3.3 病毒感染 | 第95-96页 |
| 4.3.4 Western Blot试验 | 第96页 |
| 4.3.5 重组质粒无内毒素提取 | 第96-97页 |
| 4.3.6 质粒DNA浓度的测定 | 第97页 |
| 4.3.7 siRNA及质粒转染 | 第97页 |
| 4.3.8 间接免疫荧光试验与激光共聚焦显微镜观察 | 第97-98页 |
| 4.3.9 透射电镜 | 第98页 |
| 4.3.10 实时荧光定量PCR实验 | 第98-99页 |
| 4.3.11 统计学分析 | 第99-100页 |
| 4.4 结果与分析 | 第100-110页 |
| 4.4.1 自噬调节药物的细胞毒性分析 | 第100页 |
| 4.4.2 PEDV感染Vero细胞诱导自噬体的形成 | 第100-102页 |
| 4.4.3 PEDV感染Vero细胞上调自噬相关蛋白的表达 | 第102-104页 |
| 4.4.4 PEDV感染Vero细胞诱导自噬潮 | 第104-106页 |
| 4.4.5 抑制细胞自噬降低PEDV的增殖 | 第106-107页 |
| 4.4.6 降低自噬关键基因的表达抑制PEDV增殖 | 第107-108页 |
| 4.4.7 细胞自噬与PEDV介导炎症反应的关系 | 第108-110页 |
| 4.5 讨论 | 第110-112页 |
| 4.6 小结 | 第112-113页 |
| 第5章 全文总结 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-138页 |
| 附表 | 第138-168页 |
| 基本信息 | 第168-170页 |
| 致谢 | 第170-171页 |
