论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第14-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-43页 |
| 1.1 狂犬病的流行和危害 | 第17-18页 |
| 1.2 狂犬病病原学 | 第18-21页 |
| 1.2.1 RABV的生物学特征 | 第18-20页 |
| 1.2.1.1 RABV的基因组结构 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 RABV的理化特性 | 第19-20页 |
| 1.2.2 RABV的分型及分类 | 第20-21页 |
| 1.3 RABV的致病机理 | 第21-22页 |
| 1.4 狂犬病流行病学 | 第22-24页 |
| 1.4.1 传染源 | 第22页 |
| 1.4.2 传播途径 | 第22-23页 |
| 1.4.3 易感动物 | 第23页 |
| 1.4.4 流行情况 | 第23-24页 |
| 1.5 狂犬病临床诊断学 | 第24-25页 |
| 1.5.1 临床症状 | 第24-25页 |
| 1.5.2 诊断标准 | 第25页 |
| 1.6 狂犬病的预防和治疗 | 第25-27页 |
| 1.6.1 狂犬病的预防 | 第25-27页 |
| 1.6.2 狂犬病的治疗 | 第27页 |
| 1.7 RABV的反向遗传学 | 第27-28页 |
| 1.8 狂犬病疫苗研究进展 | 第28-35页 |
| 1.8.1 经典疫苗 | 第28-29页 |
| 1.8.2 新型疫苗 | 第29-35页 |
| 1.8.2.1 弱毒活疫苗 | 第29-31页 |
| 1.8.2.2 重组活载体疫苗 | 第31-33页 |
| 1.8.2.3 亚单位疫苗 | 第33-34页 |
| 1.8.2.4 核酸疫苗 | 第34-35页 |
| 1.9 树突状细胞、滤泡辅助性T细胞及生发中心 | 第35-38页 |
| 1.10 HMGB1的结构及功能 | 第38-41页 |
| 1.10.1 HMGB1的结构 | 第38-39页 |
| 1.10.2 HMGB1的功能 | 第39-41页 |
| 1.11 趋化因子CXCL13 | 第41-43页 |
| 第二章 目的与意义 | 第43-44页 |
| 第三章 HMGB1促进狂犬病病毒诱导的体液免疫反应 | 第44-82页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-62页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-48页 |
| 3.1.1.1 质粒、细胞和病毒 | 第44页 |
| 3.1.1.2 抗体、重组蛋白和动物 | 第44-45页 |
| 3.1.1.3 主要仪器与设备 | 第45页 |
| 3.1.1.4 主要药品与试剂 | 第45页 |
| 3.1.1.5 质粒构建缓冲液 | 第45-46页 |
| 3.1.1.6 细胞培养相关试剂 | 第46页 |
| 3.1.1.7 细菌培养相关试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.1.8 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳缓冲液及试剂 | 第47页 |
| 3.1.1.9 Western blotting缓冲液及试剂 | 第47-48页 |
| 3.1.2 方法 | 第48-62页 |
| 3.1.2.1 小鼠脑组织总RNA的提取 | 第48页 |
| 3.1.2.2 小鼠脑组织总cDNA的获取 | 第48-49页 |
| 3.1.2.3 鼠源HMGB1wt和HMGB1~(mut)的基因扩增 | 第49页 |
| 3.1.2.4 pMD18-T-HMGB1wt和pMD18-T-HMGB1~(mut)的构建 | 第49-50页 |
| 3.1.2.5 目的基因的酶切 | 第50-51页 |
| 3.1.2.6 目的基因的连接 | 第51页 |
| 3.1.2.7 连接产物的转化 | 第51-52页 |
| 3.1.2.8 质粒的提取 | 第52页 |
| 3.1.2.9 质粒的酶切鉴定 | 第52页 |
| 3.1.2.10 细胞的复苏与传代 | 第52-53页 |
| 3.1.2.11 重组RABVs的拯救 | 第53页 |
| 3.1.2.12 重组RABVs的免疫荧光检测 | 第53-54页 |
| 3.1.2.13 重组RABVs的Western blotting鉴定 | 第54页 |
| 3.1.2.14 重组RABVs的间接免疫荧光鉴定 | 第54-55页 |
| 3.1.2.15 重组RABVs的扩大培养 | 第55页 |
| 3.1.2.16 重组RABVs的滴度测定 | 第55-56页 |
| 3.1.2.17 重组RABVs的多步生长曲线测定 | 第56页 |
| 3.1.2.18 重组RABVs对细胞活性的影响 | 第56-57页 |
| 3.1.2.19 重组RABVs对细胞凋亡的影响 | 第57页 |
| 3.1.2.20 小鼠骨髓源树突状细胞的分离培养 | 第57-58页 |
| 3.1.2.21 流式细胞术 | 第58-59页 |
| 3.1.2.22 重组RABVs的致病性检测 | 第59-60页 |
| 3.1.2.23 重组RABVs的中和抗体检测 | 第60-61页 |
| 3.1.2.24 重组RABVs的保护率检测 | 第61-62页 |
| 3.2 结果与分析 | 第62-78页 |
| 3.2.1 表达HMGB1~(mut)重组RABV的获得及特性 | 第62-68页 |
| 3.2.2 表达HMGB1~(mut)促进骨髓源树突状细胞的成熟 | 第68-70页 |
| 3.2.3 表达HMGB1~(mut)促进DCs的成熟和/或招募 | 第70页 |
| 3.2.4 表达HMGB1~(mut)促进Tfh细胞的激活 | 第70-72页 |
| 3.2.5 表达HMGB1~(mut)促进生发中心B细胞的激活 | 第72-75页 |
| 3.2.6 表达HMGB1~(mut)促进浆细胞的激活 | 第75-76页 |
| 3.2.7 LBNSE-HMGB1~(mut)的致病性和免疫原性 | 第76-78页 |
| 3.3 讨论 | 第78-82页 |
| 第四章 CXCL13促进狂犬病病毒诱导的体液免疫反应 | 第82-104页 |
| 4.1 材料与方法 | 第82-90页 |
| 4.1.1 材料 | 第82页 |
| 4.1.1.1 质粒、细胞和病毒 | 第82页 |
| 4.1.1.2 抗体及重组蛋白 | 第82页 |
| 4.1.1.3 主要仪器与设备 | 第82页 |
| 4.1.2 方法 | 第82-90页 |
| 4.1.2.1 小鼠外周血总cDNA的获取 | 第82页 |
| 4.1.2.2 CXCL13基因的扩增 | 第82-83页 |
| 4.1.2.3 重组RABVs的ELISA鉴定 | 第83-84页 |
| 4.1.2.4 脾细胞的获取 | 第84-85页 |
| 4.1.2.5 重组RABVs对脾脏细胞的趋化作用 | 第85页 |
| 4.1.2.6 实时荧光定量PCR | 第85-86页 |
| 4.1.2.7 小鼠淋巴结的获取及处理 | 第86-87页 |
| 4.1.2.8 小鼠淋巴结冰冻切片的制备 | 第87-88页 |
| 4.1.2.9 小鼠淋巴结的免疫荧光染色 | 第88页 |
| 4.1.2.10 流式细胞术 | 第88-89页 |
| 4.1.2.11 重组RABVs的保护率检测 | 第89-90页 |
| 4.2 结果与分析 | 第90-100页 |
| 4.2.1 表达鼠源CXCL13重组RABV的构建及特性 | 第90-92页 |
| 4.2.2 表达鼠源CXCL13利于引流淋巴结的生长发育 | 第92页 |
| 4.2.3 表达鼠源CXCL13利于生发中心的形成 | 第92-96页 |
| 4.2.4 血浆CXCL13浓度与生发中心活性和病毒中和抗体正相关 | 第96-97页 |
| 4.2.5 表达CXCL13促进浆细胞的激活 | 第97-99页 |
| 4.2.6 LBNSE-CXCL13的免疫原性 | 第99-100页 |
| 4.3 讨论 | 第100-104页 |
| 第五章 全文结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-131页 |
| 附录 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-135页 |
