论文目录 | |
摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-14页 |
缩略词表(Abbreviation) | 第14-16页 |
第一章 前言 | 第16-56页 |
1.1 Monilinia fructicola引起的危害、分布和防治方法 | 第16-27页 |
1.1.1 M. fructicola引起的危害和分布 | 第16-18页 |
1.1.2 桃褐腐病菌引起的症状和发病条件 | 第18-19页 |
1.1.3 桃褐腐病的综合防治 | 第19-24页 |
1.1.4 桃褐腐病菌的抗性分子机理和抗性现状 | 第24-27页 |
1.2 桃炭疽病 | 第27-34页 |
1.2.1 刺盘孢属Colletotrichum spp.概况 | 第27页 |
1.2.2 桃炭疽病概况 | 第27-29页 |
1.2.3 C. acutatum的生物学特点 | 第29页 |
1.2.4 C. acutatum的分类学现状 | 第29-31页 |
1.2.5 C. gloeosporioides的分类学现状 | 第31-32页 |
1.2.6 桃炭疽病的化学防控和抗性研究现状 | 第32-34页 |
1.3 DMI类杀菌剂及其抗性机理 | 第34-47页 |
1.3.1 DMI类杀菌剂 | 第34页 |
1.3.2 CYP51蛋白的功能 | 第34-35页 |
1.3.3 DMI类杀菌剂的抗性产生机理 | 第35-42页 |
1.3.4 和DMI抗性产生相关的转录因子 | 第42-47页 |
1.4 适合度下降对抗性治理的影响 | 第47-48页 |
1.5 抗性菌株的LAMP检测方法 | 第48-53页 |
1.5.1 环介导等温扩增技术 | 第49页 |
1.5.2 LAMP反应引物设计 | 第49-50页 |
1.5.3 LAMP扩增原理 | 第50页 |
1.5.4 LAMP反应体系 | 第50-52页 |
1.5.5 LAMP反应的特点 | 第52页 |
1.5.6 LAMP技术在抗性菌株监测中的应用 | 第52-53页 |
1.5.7 其他可用于抗性菌株监测的分子生物学方法 | 第53页 |
1.6 论文研究目的与思路 | 第53-56页 |
第二章 我国桃褐腐病菌对四种杀菌剂的敏感性测定 | 第56-71页 |
2.1 前言 | 第56-57页 |
2.2 材料与方法 | 第57-63页 |
2.2.1 供试药剂 | 第57页 |
2.2.2 供试培养基 | 第57页 |
2.2.3 菌株的采集,分离与保存 | 第57-58页 |
2.2.4 供试菌株对多菌灵、嘧菌酯、戊唑醇和啶酰菌胺的敏感性 | 第58-59页 |
2.2.5 致病性测定 | 第59页 |
2.2.6 离体菌丝生长速率和产孢量测定 | 第59-60页 |
2.2.7 抗药稳定性 | 第60页 |
2.2.8 DNA提取和抗性基因检测 | 第60-62页 |
2.2.9 数据分析 | 第62-63页 |
2.3 结果与分析 | 第63-68页 |
2.3.1 M. fructicola菌株对多菌灵,嘧菌酯,戊唑醇和啶酰菌胺的敏感性 | 第63-64页 |
2.3.2 多菌灵和嘧菌酯抗性菌株的适合度和抗性稳定性 | 第64页 |
2.3.3 多菌灵和嘧菌酯在活体上对抗性菌株的防效 | 第64-67页 |
2.3.4 β-tubulin和Cyt b基因的核苷酸序列分析 | 第67-68页 |
2.4 讨论 | 第68-71页 |
第三章 桃褐腐病菌M. fructicola中Mona元件的功能分析 | 第71-83页 |
3.1 前言 | 第71-72页 |
3.2 材料与方法 | 第72-77页 |
3.2.1 供试菌株 | 第72-73页 |
3.2.2 基因组DNA的提取 | 第73页 |
3.2.3 主要试验仪器 | 第73页 |
3.2.4 试验试剂 | 第73页 |
3.2.5 相关培养基及试剂的配制 | 第73-75页 |
3.2.6 载体构建 | 第75页 |
3.2.7 构建Mona的连续删减子 | 第75-76页 |
3.2.8 农杆菌感受态细胞的制备 | 第76页 |
3.2.9 农杆菌电转化 | 第76-77页 |
3.2.10 农杆菌介导的桃褐腐病菌转化 | 第77页 |
3.3 结果与分析 | 第77-79页 |
3.3.1 Mona元件的启动子功能 | 第77-78页 |
3.3.2 确定Mona启动子活性的区域 | 第78-79页 |
3.4 讨论 | 第79-83页 |
第四章 检测桃褐腐病菌DMI抗性菌株LAMP方法的建立 | 第83-99页 |
4.1 前言 | 第83页 |
4.2 材料与方法 | 第83-90页 |
4.2.1 供试菌株 | 第83-85页 |
4.2.2 主要试验仪器 | 第85页 |
4.2.3 试验试剂 | 第85-86页 |
4.2.4 菌种的活化和培养 | 第86页 |
4.2.5 桃褐腐菌株DNA模板的提取 | 第86页 |
4.2.6 引物设计 | 第86-87页 |
4.2.7 LAMP反应条件的优化 | 第87-88页 |
4.2.8 LAMP引物特异性检测 | 第88页 |
4.2.9 灵敏度检测 | 第88-89页 |
4.2.10 LAMP扩增产物分析 | 第89页 |
4.2.11 活体接种 | 第89页 |
4.2.12 田间快速检测方法的建立 | 第89-90页 |
4.3 结果与分析 | 第90-96页 |
4.3.1 LAMP反应条件的优化 | 第90-92页 |
4.3.2 LAMP引物的特异性研究 | 第92页 |
4.3.3 LAMP和PCR方法检测桃褐腐病菌抗性菌株的灵敏度 | 第92-95页 |
4.3.4 田间快速检测 | 第95-96页 |
4.4 讨论 | 第96-99页 |
第五章 桃炭疽病菌对DMI杀菌剂的敏感性及抗性产生原因初探 | 第99-134页 |
5.1 前言 | 第99-100页 |
5.2 材料与方法 | 第100-112页 |
5.2.1 供试菌株 | 第100页 |
5.2.2 供试药剂 | 第100-102页 |
5.2.3 菌株分离 | 第102页 |
5.2.4 基因组DNA的提取 | 第102页 |
5.2.5 PCR反应以及测序分析 | 第102页 |
5.2.6 系统发育分析 | 第102-103页 |
5.2.7 离体杀菌剂活性测试 | 第103-104页 |
5.2.8 C. truncatum菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆 | 第104-105页 |
5.2.9 C. nymphaeae菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆 | 第105-106页 |
5.2.10 C. fructicola和C. fioriniae菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆 | 第106-107页 |
5.2.11 CYP51A和CYP51B表达量测定 | 第107-108页 |
5.2.12 同源建模和分子对接分析 | 第108-112页 |
5.3 结果与分析 | 第112-130页 |
5.3.1 系统发育树分析 | 第112-115页 |
5.3.2 DMI杀菌剂对不同种炭菌病菌的防治效果 | 第115-117页 |
5.3.3 桃炭疽菌株对DMI杀菌剂的交互敏感性 | 第117-119页 |
5.3.4 C. truncatum菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆 | 第119-123页 |
5.3.5 比较抗性菌株和敏感菌株CYP51A和CYP51B表达量的差异 | 第123-125页 |
5.3.6 比较C. truncatum菌株和其它炭疽种CYP51A、CYP51B之间氨基酸序列差异 | 第125-128页 |
5.3.7 CYP51B基因的同源建模 | 第128-130页 |
5.4 讨论 | 第130-134页 |
第六章 结论与展望 | 第134-139页 |
6.1 主要结论 | 第134-137页 |
6.1.1 明确了中国桃褐腐病菌M. fructicola对四种杀菌剂的敏感性 | 第134-135页 |
6.1.2 阐明了Mona遗传元件对杀菌剂抗性产生的机理 | 第135页 |
6.1.3 建立快速检测桃褐腐病菌对DMI抗性的LAMP方法 | 第135-136页 |
6.1.4 桃炭疽病菌种群鉴定及其对DMI杀菌剂抗性 | 第136-137页 |
6.2 主要创新点 | 第137-138页 |
6.3 研究展望 | 第138-139页 |
参考文献 | 第139-174页 |
附录 攻读博士学位期间发表的学术论文及专利 | 第174-176页 |
致谢 | 第176-179页 |