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桃褐腐病菌和炭疽病菌对DMI杀菌剂的抗性研究

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桃褐腐病菌和炭疽病菌对DMI杀菌剂的抗性研究
论文目录
 
摘要第1-11页
Abstract第11-14页
缩略词表(Abbreviation)第14-16页
第一章 前言第16-56页
  1.1 Monilinia fructicola引起的危害、分布和防治方法第16-27页
    1.1.1 M. fructicola引起的危害和分布第16-18页
    1.1.2 桃褐腐病菌引起的症状和发病条件第18-19页
    1.1.3 桃褐腐病的综合防治第19-24页
    1.1.4 桃褐腐病菌的抗性分子机理和抗性现状第24-27页
  1.2 桃炭疽病第27-34页
    1.2.1 刺盘孢属Colletotrichum spp.概况第27页
    1.2.2 桃炭疽病概况第27-29页
    1.2.3 C. acutatum的生物学特点第29页
    1.2.4 C. acutatum的分类学现状第29-31页
    1.2.5 C. gloeosporioides的分类学现状第31-32页
    1.2.6 桃炭疽病的化学防控和抗性研究现状第32-34页
  1.3 DMI类杀菌剂及其抗性机理第34-47页
    1.3.1 DMI类杀菌剂第34页
    1.3.2 CYP51蛋白的功能第34-35页
    1.3.3 DMI类杀菌剂的抗性产生机理第35-42页
    1.3.4 和DMI抗性产生相关的转录因子第42-47页
  1.4 适合度下降对抗性治理的影响第47-48页
  1.5 抗性菌株的LAMP检测方法第48-53页
    1.5.1 环介导等温扩增技术第49页
    1.5.2 LAMP反应引物设计第49-50页
    1.5.3 LAMP扩增原理第50页
    1.5.4 LAMP反应体系第50-52页
    1.5.5 LAMP反应的特点第52页
    1.5.6 LAMP技术在抗性菌株监测中的应用第52-53页
    1.5.7 其他可用于抗性菌株监测的分子生物学方法第53页
  1.6 论文研究目的与思路第53-56页
第二章 我国桃褐腐病菌对四种杀菌剂的敏感性测定第56-71页
  2.1 前言第56-57页
  2.2 材料与方法第57-63页
    2.2.1 供试药剂第57页
    2.2.2 供试培养基第57页
    2.2.3 菌株的采集,分离与保存第57-58页
    2.2.4 供试菌株对多菌灵、嘧菌酯、戊唑醇和啶酰菌胺的敏感性第58-59页
    2.2.5 致病性测定第59页
    2.2.6 离体菌丝生长速率和产孢量测定第59-60页
    2.2.7 抗药稳定性第60页
    2.2.8 DNA提取和抗性基因检测第60-62页
    2.2.9 数据分析第62-63页
  2.3 结果与分析第63-68页
    2.3.1 M. fructicola菌株对多菌灵,嘧菌酯,戊唑醇和啶酰菌胺的敏感性第63-64页
    2.3.2 多菌灵和嘧菌酯抗性菌株的适合度和抗性稳定性第64页
    2.3.3 多菌灵和嘧菌酯在活体上对抗性菌株的防效第64-67页
    2.3.4 β-tubulin和Cyt b基因的核苷酸序列分析第67-68页
  2.4 讨论第68-71页
第三章 桃褐腐病菌M. fructicola中Mona元件的功能分析第71-83页
  3.1 前言第71-72页
  3.2 材料与方法第72-77页
    3.2.1 供试菌株第72-73页
    3.2.2 基因组DNA的提取第73页
    3.2.3 主要试验仪器第73页
    3.2.4 试验试剂第73页
    3.2.5 相关培养基及试剂的配制第73-75页
    3.2.6 载体构建第75页
    3.2.7 构建Mona的连续删减子第75-76页
    3.2.8 农杆菌感受态细胞的制备第76页
    3.2.9 农杆菌电转化第76-77页
    3.2.10 农杆菌介导的桃褐腐病菌转化第77页
  3.3 结果与分析第77-79页
    3.3.1 Mona元件的启动子功能第77-78页
    3.3.2 确定Mona启动子活性的区域第78-79页
  3.4 讨论第79-83页
第四章 检测桃褐腐病菌DMI抗性菌株LAMP方法的建立第83-99页
  4.1 前言第83页
  4.2 材料与方法第83-90页
    4.2.1 供试菌株第83-85页
    4.2.2 主要试验仪器第85页
    4.2.3 试验试剂第85-86页
    4.2.4 菌种的活化和培养第86页
    4.2.5 桃褐腐菌株DNA模板的提取第86页
    4.2.6 引物设计第86-87页
    4.2.7 LAMP反应条件的优化第87-88页
    4.2.8 LAMP引物特异性检测第88页
    4.2.9 灵敏度检测第88-89页
    4.2.10 LAMP扩增产物分析第89页
    4.2.11 活体接种第89页
    4.2.12 田间快速检测方法的建立第89-90页
  4.3 结果与分析第90-96页
    4.3.1 LAMP反应条件的优化第90-92页
    4.3.2 LAMP引物的特异性研究第92页
    4.3.3 LAMP和PCR方法检测桃褐腐病菌抗性菌株的灵敏度第92-95页
    4.3.4 田间快速检测第95-96页
  4.4 讨论第96-99页
第五章 桃炭疽病菌对DMI杀菌剂的敏感性及抗性产生原因初探第99-134页
  5.1 前言第99-100页
  5.2 材料与方法第100-112页
    5.2.1 供试菌株第100页
    5.2.2 供试药剂第100-102页
    5.2.3 菌株分离第102页
    5.2.4 基因组DNA的提取第102页
    5.2.5 PCR反应以及测序分析第102页
    5.2.6 系统发育分析第102-103页
    5.2.7 离体杀菌剂活性测试第103-104页
    5.2.8 C. truncatum菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆第104-105页
    5.2.9 C. nymphaeae菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆第105-106页
    5.2.10 C. fructicola和C. fioriniae菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆第106-107页
    5.2.11 CYP51A和CYP51B表达量测定第107-108页
    5.2.12 同源建模和分子对接分析第108-112页
  5.3 结果与分析第112-130页
    5.3.1 系统发育树分析第112-115页
    5.3.2 DMI杀菌剂对不同种炭菌病菌的防治效果第115-117页
    5.3.3 桃炭疽菌株对DMI杀菌剂的交互敏感性第117-119页
    5.3.4 C. truncatum菌株中CYP51A和CYP51B基因的克隆第119-123页
    5.3.5 比较抗性菌株和敏感菌株CYP51A和CYP51B表达量的差异第123-125页
    5.3.6 比较C. truncatum菌株和其它炭疽种CYP51A、CYP51B之间氨基酸序列差异第125-128页
    5.3.7 CYP51B基因的同源建模第128-130页
  5.4 讨论第130-134页
第六章 结论与展望第134-139页
  6.1 主要结论第134-137页
    6.1.1 明确了中国桃褐腐病菌M. fructicola对四种杀菌剂的敏感性第134-135页
    6.1.2 阐明了Mona遗传元件对杀菌剂抗性产生的机理第135页
    6.1.3 建立快速检测桃褐腐病菌对DMI抗性的LAMP方法第135-136页
    6.1.4 桃炭疽病菌种群鉴定及其对DMI杀菌剂抗性第136-137页
  6.2 主要创新点第137-138页
  6.3 研究展望第138-139页
参考文献第139-174页
附录 攻读博士学位期间发表的学术论文及专利第174-176页
致谢第176-179页

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