论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1.1 分泌蛋白质组学的研究进展 | 第14-27页 |
| 1.1.1 分泌蛋白质组学的定义和意义 | 第14-15页 |
| 1.1.2 分泌蛋白的合成与转运 | 第15-18页 |
| 1.1.3 分泌蛋白质组学研究的技术和方法 | 第18-22页 |
| 1.1.4 稳定同位素标记氨基酸技术（SILAC） | 第22-23页 |
| 1.1.5 分泌蛋白质组学的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.1.6 分泌蛋白质组学在病毒学中的应用 | 第25-27页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征 | 第27-31页 |
| 1.2.1 PRRSV | 第27-29页 |
| 1.2.2 PRRSV与炎症反应 | 第29-31页 |
| 1.3 PRDX蛋白家族 | 第31-35页 |
| 1.3.1 胞内PRDX蛋白家族的功能 | 第31-32页 |
| 1.3.2 胞外PRDX蛋白家族的功能 | 第32-35页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 第3章 材料与方法 | 第36-63页 |
| 3.1 试验材料 | 第36-43页 |
| 3.1.1 细胞、毒株与菌株 | 第36页 |
| 3.1.2 载体与质粒 | 第36-37页 |
| 3.1.3 工具酶、siRNA及主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.4 SILAC样品准备材料和试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.5 Western blot所需材料 | 第39页 |
| 3.1.6 培养基与抗生素及其配制 | 第39-40页 |
| 3.1.7 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第40-43页 |
| 3.1.8 主要实验仪器及设备 | 第43页 |
| 3.2 试验方法 | 第43-63页 |
| 3.2.1 原代PAM细胞的分离 | 第43页 |
| 3.2.2 PRRSV的增殖 | 第43-44页 |
| 3.2.3 病毒滴度的测定 | 第44页 |
| 3.2.4 MTT法检测细胞活性和LDH释放实验 | 第44-45页 |
| 3.2.5 稳定同位素标记及分泌蛋白质样本收集样品制备 | 第45-46页 |
| 3.2.6 全细胞蛋白浓度的测定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 LC-MS/MS鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2.8 生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 3.2.9 统计学方法 | 第50-51页 |
| 3.2.10 siRNA及质粒转染（脂质体介导的瞬时转染法） | 第51页 |
| 3.2.11 Western blot样品制备 | 第51页 |
| 3.2.12 Western blot检测分析 | 第51-52页 |
| 3.2.13 双荧光素酶检测实验 | 第52页 |
| 3.2.14 间接免疫荧光实验 | 第52-53页 |
| 3.2.15 RNA的提取及mRNA水平定量检测 | 第53-55页 |
| 3.2.16 目的蛋白的原核表达和纯化 | 第55-61页 |
| 3.2.17 显色基质鲎试剂盒检测蛋白内毒素 | 第61-62页 |
| 3.2.18 分子生物学信息软件 | 第62-63页 |
| 第4章 结果与分析 | 第63-91页 |
| 4.1 PRRSV感染Marc-145细胞分泌蛋白组分析 | 第63-74页 |
| 4.1.1PRRSV感染Marc-145细胞动力学分析 | 第63-65页 |
| 4.1.2 基于SILAC技术的分泌蛋白组学实验流程 | 第65页 |
| 4.1.3 分泌蛋白鉴定的基本信息 | 第65-67页 |
| 4.1.4 蛋白质的定量信息及差异蛋白的筛选 | 第67-69页 |
| 4.1.5 分泌蛋白质组的生物信息学分析 | 第69-73页 |
| 4.1.6 差异蛋白的验证 | 第73-74页 |
| 4.2 PRDX3能促进炎症因子的产生 | 第74-81页 |
| 4.2.1 猪源PRDX3的原核表达 | 第74-75页 |
| 4.2.2 PRDX3本身在胞外具有致炎活性 | 第75-78页 |
| 4.2.3 TLR4参与PRDX3诱导的炎症反应 | 第78-81页 |
| 4.3 PRDX3参与PRRSV诱导的NF-κB的激活和炎症因子产生 | 第81-89页 |
| 4.3.1 PRRSV感染Marc-145细胞对PRDX3表达的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.2 PRRSV感染Marc-145细胞对PRDX3定位的影响 | 第82页 |
| 4.3.3 猴源PRDX3的原核表达 | 第82-85页 |
| 4.3.4 胞外的PRDX3对PRRSV的增殖无明显影响 | 第85-86页 |
| 4.3.5 胞外PRDX3增强PRRSV诱导的p65磷酸化和炎症因子产生 | 第86-87页 |
| 4.3.6 干扰胞内PRDX3基因促进PRRSV诱导的炎症因子产生 | 第87-89页 |
| 4.4 PRRSV感染Marc-145细胞对PRDX蛋白家族表达的影响 | 第89-91页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第91-103页 |
| 5.1 讨论 | 第91-101页 |
| 5.1.1 分泌蛋白样品制备条件的优化 | 第91-92页 |
| 5.1.2 PRRSV感染Marc-145细胞分泌蛋白的途径 | 第92-95页 |
| 5.1.3 差异蛋白的生物学功能 | 第95-99页 |
| 5.1.4 PRDX3对PRRSV诱导炎症反应的影响 | 第99-101页 |
| 5.2 结论 | 第101-103页 |
| 参考文献 | 第103-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附表 | 第125-133页 |
| 附录 | 第133-134页 |
