论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
页 |
| Abstract | 第7-14
页 |
| 插图清单 | 第14-16
页 |
| 缩略词表 | 第16-19
页 |
| 文献综述 | 第19-54
页 |
| 1 细胞核重编程技术 | 第19-23
页 |
| · 体细胞核移植 | 第20-21
页 |
| · 体细胞与多潜能干细胞融合 | 第21-22
页 |
| · 体细胞与多能性细胞提取物共孵育 | 第22-23
页 |
| 2 iPS 细胞系的建立及其优化方案 | 第23-36
页 |
| · 限定因子的选择 | 第23-27
页 |
| · 限定因子的发现 | 第23-25
页 |
| · 限定因子的选择和小分子的应用 | 第25-27
页 |
| · 限定因子运载系统 | 第27-31
页 |
| · 靶细胞类型的选择 | 第31-32
页 |
| · 限定因子的表达参数 | 第32-33
页 |
| · 获取iPS 细胞的培养条件 | 第33-34
页 |
| · iPS 细胞克隆的识别 | 第34-35
页 |
| · iPS 细胞克隆的鉴定 | 第35-36
页 |
| 3 iPS 细胞建立的模型假说 | 第36-39
页 |
| · 原种模型假说 | 第36-37
页 |
| · 已决定原种模型 | 第37
页 |
| · 诱导原种模型 | 第37
页 |
| · 随机模型假说 | 第37-39
页 |
| 4 iPS 细胞建立的分子机制 | 第39-49
页 |
| · 限定因子诱导多能性的可能机制 | 第40-45
页 |
| · 四种限定因子简介 | 第40-42
页 |
| · Oct4/Sox2/Nanog 自动调节环及转录调控网络 | 第42-43
页 |
| · ES 细胞的信号转导通路 | 第43-44
页 |
| · 限定因子诱导多能性的可能机制 | 第44-45
页 |
| · iPS 细胞表观遗传特征建立的可能机制 | 第45-47
页 |
| · ES 细胞的表观遗传特征 | 第45-46
页 |
| · iPS 细胞建立的表观遗传特征要求及可能机制 | 第46-47
页 |
| · iPS 细胞产生过程中的可能分子机制 | 第47-49
页 |
| · 重编程进程中细胞分子特征变化 | 第47-48
页 |
| · 重编程进程中的可能分子机制 | 第48-49
页 |
| 5 ES 细胞与iPS 细胞差异 | 第49-50
页 |
| 6 iPS 细胞的应用前景 | 第50-52
页 |
| · iPS 细胞应用于治疗的前景 | 第50-51
页 |
| · iPS 细胞在家畜上的应用前景 | 第51-52
页 |
| 7 展望 | 第52-54
页 |
| 研究论文 | 第54-57
页 |
| 第一章 限定因子慢病毒表达载体的构建 | 第57-82
页 |
| 摘要 | 第57
页 |
| 前言 | 第57-58
页 |
| 1 材料与方法 | 第58-67
页 |
| · 材料 | 第58
页 |
| · 溶液配制 | 第58-59
页 |
| · 引物合成和DNA 测序 | 第59
页 |
| · 试验仪器、分子试剂及试剂盒 | 第59-60
页 |
| · 方法 | 第60-67
页 |
| · 限定因子基因的克隆 | 第60-64
页 |
| · 限定因子基因逆转录病毒载体的构建 | 第64-65
页 |
| · pLL· 慢病毒载体的改造 | 第65-66
页 |
| · 限定因子慢病毒载体的构建 | 第66-67
页 |
| · 重组质粒在293T 细胞中的表达 | 第67
页 |
| 2 结果 | 第67-78
页 |
| · 限定因子基因克隆和测序的结果 | 第67-68
页 |
| · 限定因子基因克隆的结果 | 第67-68
页 |
| · 限定因子基因测序的结果 | 第68
页 |
| · 重组逆转录病毒载体构建的结果 | 第68-69
页 |
| · pLL· 慢病毒载体改造的结果 | 第69
页 |
| · 重组慢病毒载体构建的结果 | 第69
页 |
| · 质粒转染293T 细胞的结果 | 第69-78
页 |
| 3 讨论 | 第78-81
页 |
| · 关于限定因子基因克隆 | 第78-80
页 |
| · 关于重组慢病毒载体质粒的构建 | 第80-81
页 |
| 4 小结 | 第81-82
页 |
| 第二章 限定因子慢病毒诱导猪iPS 细胞的建立和鉴定 | 第82-104
页 |
| 摘要 | 第82
页 |
| 前言 | 第82-84
页 |
| 1 材料与方法 | 第84-92
页 |
| · 材料 | 第84
页 |
| · 溶液配制 | 第84-85
页 |
| · 仪器及耗材 | 第85
页 |
| · 方法 | 第85-92
页 |
| · 猪胎儿成纤维细胞系（PFFs）的建立 | 第85-87
页 |
| · 饲养层的制备 | 第87-88
页 |
| · 慢病毒的包装、收集浓缩和感染 | 第88-89
页 |
| · 限定因子慢病毒诱导猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第89
页 |
| · 猪iPS 细胞的传代培养 | 第89
页 |
| · 猪iPS 细胞的冻存 | 第89-90
页 |
| · 猪iPS 细胞的复苏 | 第90
页 |
| · 碱性磷酸酶染色 | 第90
页 |
| · 免疫荧光染色分析 | 第90-91
页 |
| · 细胞染色体计数分析 | 第91
页 |
| · RT-PCR 检测 | 第91-92
页 |
| · 体内分化检测 | 第92
页 |
| 2 结果 | 第92-99
页 |
| · 猪胎儿成纤维细胞系建立的结果 | 第92-93
页 |
| · 猪iPS 细胞建立的结果 | 第93
页 |
| · 猪iPS 细胞鉴定的结果 | 第93-99
页 |
| · 猪iPS 细胞表达了碱性磷酸酶 | 第93
页 |
| · 猪iPS 细胞有多能性基因的表达 | 第93-94
页 |
| · 猪iPS 细胞核型正常 | 第94
页 |
| · 猪iPS 细胞有ES 细胞特异性分子标记的表达 | 第94
页 |
| · 猪iPS 细胞有多向分化潜能 | 第94-99
页 |
| 3 讨论 | 第99-103
页 |
| · 关于靶细胞的选择 | 第99
页 |
| · 关于建立的猪胎儿成纤维细胞系 | 第99-100
页 |
| · 关于选择的限定因子 | 第100
页 |
| · 关于猪iPS 细胞诱导和维持培养液的确定 | 第100-101
页 |
| · 关于猪iPS 细胞的诱导效率 | 第101
页 |
| · 关于猪iPS 细胞特征 | 第101-103
页 |
| 4 小结 | 第103-104
页 |
| 第三章 限定因子重组蛋白重编程猪胎儿成纤维细胞的初步探讨 | 第104-119
页 |
| 摘要 | 第104
页 |
| 前言 | 第104-105
页 |
| 1 材料与方法 | 第105-109
页 |
| · 材料 | 第105
页 |
| · 溶液配制与分子试剂 | 第105-106
页 |
| · 仪器及耗材 | 第106
页 |
| · 方法 | 第106-109
页 |
| · 限定因子-R9 原核蛋白表达载体的构建 | 第106-107
页 |
| · 限定因子-R9 原核蛋白的诱导表达 | 第107
页 |
| · 限定因子R9 原核蛋白的提取纯化 | 第107-108
页 |
| · 限定因子R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第108
页 |
| · 重构细胞的碱性磷酸酶染色 | 第108
页 |
| · 重构细胞的免疫荧光染色分析 | 第108-109
页 |
| 2 结果 | 第109-116
页 |
| · 限定因子-R9 原核蛋白表达载体构建的结果 | 第109
页 |
| · 限定因子-R9 原核蛋白的诱导表达及SDS-PAGE 检测的结果 | 第109
页 |
| · 限定因子-R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构结果 | 第109-116
页 |
| 3 讨论 | 第116-118
页 |
| · 关于限定因子-R9 原核蛋白载体的构建及重组蛋白的转导活性 | 第116
页 |
| · 关于限定因子-R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第116-118
页 |
| 4 小结 | 第118-119
页 |
| 全文结论 | 第119-121
页 |
| 参考文献 | 第121-135
页 |
| 致谢 | 第135-137
页 |
| 作者简介 | 第137页 |
