论文目录 | |
提要 | 第1-12
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第一章 绪论 | 第12-42
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· 植物脂肪酸 | 第12-13
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· 脂肪酸的生物合成 | 第13-18
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· 脂肪酸从头合成 | 第14-18
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· 脂肪酸生物合成acyl-coA 的来源 | 第14-15
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· 脂肪酸合成酶(FAS) | 第15-18
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· 脂肪酸的修饰 | 第18
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· 生物素和生物素酶 | 第18-20
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· 乙酰辅酶A 羧化酶 | 第20-31
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· ACCase 的类型 | 第21-23
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· 异质型ACCase | 第21
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· 同质型ACCase | 第21-23
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· 植物中的ACCase | 第23
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· ACCase 的结构 | 第23-28
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· 生物素羧化酶(BC)的结构 | 第23-25
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· 羧基转移酶(CT)的结构 | 第25-27
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· 生物素载体蛋白(BCCP)的结构 | 第27-28
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· ACCase 的生物学功能 | 第28-31
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· ACCase 是脂肪酸合成的关键限速酶 | 第28-29
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· 植物细胞中ACCase 的功能 | 第29-30
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· 动物细胞中ACCase 的功能 | 第30-31
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· 化学除草剂在农业中的应用 | 第31-33
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· 化学除草剂的除草机理 | 第31-32
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· 化学除草剂应用中存在的主要问题 | 第32-33
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· 本研究意义及实验设计 | 第33-36
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· 研究意义 | 第33-35
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· 实验设计 | 第35-36
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· 参考文献 | 第36-42
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第二章 除草剂对大麦和黄瓜叶片脂肪酸的影响 | 第42-69
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· 前言 | 第42-43
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· 实验设计 | 第43-44
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· 实验材料 | 第44-45
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· 主要仪器 | 第44-45
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· 主要试剂 | 第45
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· 实验方法 | 第45-49
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· 大麦(Maris otter)和黄瓜(Restina) 的栽培 | 第45
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· 除草剂水溶液的配制 | 第45-46
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· 大麦叶片同位素标记实验 | 第46
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· 黄瓜叶片同位素标记试验 | 第46-47
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· 大麦,黄瓜叶片总脂类的提取与检测 | 第47
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· 大麦,黄瓜叶片脂肪酸甲酯的提取与检测 | 第47-49
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· 结果与讨论 | 第49-67
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· 同位素标记实验条件的优化 | 第49-50
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· 不同有机溶剂对脂肪酸合成的影响 | 第49
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· 不同有机溶剂,不同的孵育方法对脂肪酸合成的影响 | 第49-50
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· “K3”和“Z”类型除草剂对植物脂肪酸合成的影响 | 第50-63
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· [1-~(14)C] Acetate 标记实验 | 第51-58
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· [2-~(14)C] Malonate 标记实验 | 第58-63
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· Pinoxaden 对植物脂类的影响 | 第63-67
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· [1-~(14)C] Acetate 标记实验 | 第63-67
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· 本章小结 | 第67-68
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· 参考文献 | 第68-69
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第三章 酿酒酵母ACCASE CT 功能域基因克隆、表达以及性质研究 | 第69-117
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· CT 功能域基因克隆 | 第69-95
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· 引言 | 第69-70
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· 实验设计 | 第70-71
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· 实验材料 | 第71-74
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· 主要仪器 | 第71
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· 主要试剂 | 第71-72
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· 实验菌株 | 第72
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· 实验用质粒 | 第72
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· 溶液配制 | 第72-74
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· 实验方法 | 第74-85
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· 酵母总RNA 提取 | 第74-76
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· 酵母的培养 | 第74-75
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· 酵母菌株总RNA 提取 | 第75
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· 酵母总RNA 鉴定 | 第75-76
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· 酵母cDNA 文库的制备—逆转录反应 | 第76
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· 目的基因的扩增 | 第76-77
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· 重组质粒的构建 | 第77-81
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· BH28a 重组质粒转化大肠杆菌 | 第81-82
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· 目的基因的诱导表达 | 第82
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· SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第82-84
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· 表达条件的优化 | 第84-85
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· 表达菌株的优化 | 第84
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· 最佳表达温度确定 | 第84
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· IPTG 诱导条件的优化 | 第84-85
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· 结果与讨论 | 第85-94
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· 酵母总RNA 的提取 | 第85-86
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· PCR 扩增目的基因 | 第86-88
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· 酵母ACCase CT 功能域基因的确定 | 第86-87
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· 特异性引物扩增目的基因 | 第87-88
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· 酵母ACCase CT 功能域基因重组质粒的构建 | 第88-90
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· 表达载体 | 第90-91
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· 重组质粒表达条件的优化 | 第91-94
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· 表达菌株的选择 | 第91-94
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· 小结 | 第94-95
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· 包涵体的溶解与复性 | 第95-115
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· 前言 | 第95-97
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· 实验材料 | 第97-99
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· 实验方法 | 第99-105
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· 细胞破碎及蛋白提取 | 第99
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· 包涵体的洗涤与溶解 | 第99-100
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· NI-亲合层析纯化 | 第100-101
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· Ni-亲合层析柱处理 | 第100-101
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· Ni-亲合层析纯化 | 第101
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· 蛋白浓度的测定 | 第101
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· 包涵体的复性 | 第101-105
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· 稀释复性法 | 第102
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· 透析复性法 | 第102
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· 系统透析复性法 | 第102-103
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· 活力测定 | 第103-104
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· 复性蛋白的荧光光谱分析 | 第104-105
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· 复性蛋白的圆二色谱分析 | 第105
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· 结果与讨论 | 第105-114
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· 包涵体的洗涤与溶解 | 第105-108
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· 亲合层析纯化 | 第108-109
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· 包涵体的复性 | 第109-110
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· 不同复性方法酶活力的比较 | 第110-111
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· 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第111-112
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· 荧光光谱测定 | 第112-113
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· 圆二色谱分析 | 第113-114
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· 小结 | 第114-115
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· 参考文献 | 第115-117
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全文总结 | 第117-120
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1. 已取得成果 | 第117-118
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2. 研究中存在的问题 | 第118
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3. 展望 | 第118-120
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· 对Acetamides 的进一步研究 | 第118-119
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· ACCase CT 功能域模型的进一步优化 | 第119-120
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博士论文期间主要成果 | 第120-121
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致谢 | 第121-122
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中文摘要 | 第122-125
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ABSTRACT | 第125-127
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