论文目录 | |
第一部分: NF-κB-诱导激酶在调节T细胞介导的免疫和自身免疫应答中的直接功能 | 第1-44页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
英文摘要 | 第8-9页 |
前言 | 第9-11页 |
材料与方法 | 第11-26页 |
· 实验动物 | 第11页 |
· 主要仪器、设备和试剂 | 第11页 |
· 小鼠尾部DNA提取 | 第11-12页 |
· 小鼠基因型PCR鉴定 | 第12-13页 |
· 抗体 | 第13-14页 |
· 蛋白抽提 | 第14-15页 |
· 蛋白电泳、转膜与Western Blot | 第15-18页 |
· 免疫共沉淀实验 | 第18-19页 |
· 流式分选样本制备 | 第19-20页 |
· CFSE染色测细胞增殖 | 第20页 |
· 初始CD4~+T细胞的分离 | 第20页 |
· 初始T细胞的分化 | 第20-21页 |
· EAE模型诱导 | 第21-22页 |
· 李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染模型 | 第22页 |
· ELISA | 第22-23页 |
· 细胞总RNA的提取(TRIzol法) | 第23-24页 |
· 逆转录(使用ThermoFisher试剂盒High-Capacity cDNA Reverse TranscriptionKit) | 第24-25页 |
· Real-time PCR(RT-PCR) | 第25页 |
· 实验数据处理 | 第25-26页 |
实验结果 | 第26-39页 |
· T细胞特异性NIK基因敲除小鼠的构建及鉴定 | 第26-28页 |
· T细胞特异性敲除NIK基因不影响B细胞的发育 | 第28页 |
· T细胞特异性敲除NIK基因不影响胸腺细胞的发育 | 第28-29页 |
· NIK基因直接影响外周T细胞的稳态 | 第29-30页 |
· NIK基因直接影响调节性T细胞的稳态 | 第30-31页 |
· NIK基因不是初始T细胞激活所必须的 | 第31-32页 |
· NIK基因缺失影响体外Th17细胞的分化 | 第32-33页 |
· 在体内NIK调节由抗原刺激引起的T细胞分化以及记忆性反应 | 第33-34页 |
· NIK基因缺失影响由抗原刺激引起的效应T细胞增殖 | 第34页 |
· NIK基因是诱导EAE发病所必须的 | 第34-36页 |
· NIK基因影响体内Th1以及Th17效应T细胞的产生 | 第36-37页 |
· NIK基因缺失会降低体内T细胞对细菌感染的清除 | 第37-39页 |
讨论 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-43页 |
小结 | 第43-44页 |
第二部分: 睾丸特异性E3泛素连接酶TRIM69的RING结构域在精子发生过程中的功能研究 | 第44-74页 |
中文摘要 | 第45-46页 |
英文摘要 | 第46-47页 |
前言 | 第47-51页 |
材料与方法 | 第51-58页 |
· 实验动物 | 第51页 |
· 主要仪器、设备、软件及试剂 | 第51页 |
· 引物的设计与合成 | 第51-53页 |
· 原位杂交 | 第53页 |
· 小鼠基因组DNA提取 | 第53-54页 |
· 小鼠基因型PCR鉴定 | 第54页 |
· 细胞总RNA的提取(TRIzol法) | 第54-55页 |
· 逆转录(使用promega试剂盒A3500) | 第55页 |
· Real-time PCR(RT-PCR) | 第55-56页 |
· 苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色(HE染色) | 第56-57页 |
· TUNEL法检测细胞凋亡(使用碧云天一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒) | 第57页 |
· 精子活力检测 | 第57页 |
· 转录组测序(RNA-Seq) | 第57页 |
· 实验数据处理 | 第57-58页 |
实验结果 | 第58-68页 |
· Trim69基因的mRNA在睾丸组织中特异性表达并且主要集中在精子发生过程中除精原细胞的生精细胞 | 第58-59页 |
· 生精细胞特异性敲除RING结构域的Trim69基因小鼠的构建 | 第59-61页 |
· 生精细胞中特异性敲除Trim69的RING-finger结构域小鼠精子发生正常 | 第61-63页 |
· TRIM69基因RING-finger结构域的缺失会影响睾丸组织中正常基因的表达 | 第63-65页 |
· Kaplan Meier-plotter数据库分析TRIM69在mRNA表达水平上的癌症术后价值 | 第65-66页 |
· p53基因突变的乳腺癌患者中,TRIM69基因的高表达患者术后生存期明显延长 | 第66-68页 |
讨论 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-73页 |
小结 | 第73-74页 |
综述一:基因敲除小鼠研究进展 | 第74-87页 |
参考文献 | 第83-87页 |
综述二:非经典NF-κB信号通路 | 第87-115页 |
参考文献 | 第104-115页 |
博士在读期间发表的论文情况 | 第115-116页 |
致谢 | 第116-117页 |