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利用条件性基因敲除小鼠研究NIK在T细胞与TRIM69在精子发生中的功能

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利用条件性基因敲除小鼠研究NIK在T细胞与TRIM69在精子发生中的功能
论文目录
 
第一部分: NF-κB-诱导激酶在调节T细胞介导的免疫和自身免疫应答中的直接功能第1-44页
  中文摘要第7-8页
  英文摘要第8-9页
  前言第9-11页
  材料与方法第11-26页
    · 实验动物第11页
    · 主要仪器、设备和试剂第11页
    · 小鼠尾部DNA提取第11-12页
    · 小鼠基因型PCR鉴定第12-13页
    · 抗体第13-14页
    · 蛋白抽提第14-15页
    · 蛋白电泳、转膜与Western Blot第15-18页
    · 免疫共沉淀实验第18-19页
    · 流式分选样本制备第19-20页
    · CFSE染色测细胞增殖第20页
    · 初始CD4~+T细胞的分离第20页
    · 初始T细胞的分化第20-21页
    · EAE模型诱导第21-22页
    · 李斯特菌(Listeria monocytogenes)感染模型第22页
    · ELISA第22-23页
    · 细胞总RNA的提取(TRIzol法)第23-24页
    · 逆转录(使用ThermoFisher试剂盒High-Capacity cDNA Reverse TranscriptionKit)第24-25页
    · Real-time PCR(RT-PCR)第25页
    · 实验数据处理第25-26页
  实验结果第26-39页
    · T细胞特异性NIK基因敲除小鼠的构建及鉴定第26-28页
    · T细胞特异性敲除NIK基因不影响B细胞的发育第28页
    · T细胞特异性敲除NIK基因不影响胸腺细胞的发育第28-29页
    · NIK基因直接影响外周T细胞的稳态第29-30页
    · NIK基因直接影响调节性T细胞的稳态第30-31页
    · NIK基因不是初始T细胞激活所必须的第31-32页
    · NIK基因缺失影响体外Th17细胞的分化第32-33页
    · 在体内NIK调节由抗原刺激引起的T细胞分化以及记忆性反应第33-34页
    · NIK基因缺失影响由抗原刺激引起的效应T细胞增殖第34页
    · NIK基因是诱导EAE发病所必须的第34-36页
    · NIK基因影响体内Th1以及Th17效应T细胞的产生第36-37页
    · NIK基因缺失会降低体内T细胞对细菌感染的清除第37-39页
  讨论第39-40页
  参考文献第40-43页
  小结第43-44页
第二部分: 睾丸特异性E3泛素连接酶TRIM69的RING结构域在精子发生过程中的功能研究第44-74页
  中文摘要第45-46页
  英文摘要第46-47页
  前言第47-51页
  材料与方法第51-58页
    · 实验动物第51页
    · 主要仪器、设备、软件及试剂第51页
    · 引物的设计与合成第51-53页
    · 原位杂交第53页
    · 小鼠基因组DNA提取第53-54页
    · 小鼠基因型PCR鉴定第54页
    · 细胞总RNA的提取(TRIzol法)第54-55页
    · 逆转录(使用promega试剂盒A3500)第55页
    · Real-time PCR(RT-PCR)第55-56页
    · 苏木精(Hematoxylin)和伊红(Eosin)染色(HE染色)第56-57页
    · TUNEL法检测细胞凋亡(使用碧云天一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒)第57页
    · 精子活力检测第57页
    · 转录组测序(RNA-Seq)第57页
    · 实验数据处理第57-58页
  实验结果第58-68页
    · Trim69基因的mRNA在睾丸组织中特异性表达并且主要集中在精子发生过程中除精原细胞的生精细胞第58-59页
    · 生精细胞特异性敲除RING结构域的Trim69基因小鼠的构建第59-61页
    · 生精细胞中特异性敲除Trim69的RING-finger结构域小鼠精子发生正常第61-63页
    · TRIM69基因RING-finger结构域的缺失会影响睾丸组织中正常基因的表达第63-65页
    · Kaplan Meier-plotter数据库分析TRIM69在mRNA表达水平上的癌症术后价值第65-66页
    · p53基因突变的乳腺癌患者中,TRIM69基因的高表达患者术后生存期明显延长第66-68页
  讨论第68-69页
  参考文献第69-73页
  小结第73-74页
综述一:基因敲除小鼠研究进展第74-87页
  参考文献第83-87页
综述二:非经典NF-κB信号通路第87-115页
  参考文献第104-115页
博士在读期间发表的论文情况第115-116页
致谢第116-117页

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