论文目录 | |
| 目录 | 第1-8
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| 中文摘要 | 第8-9
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| ABSTRACT | 第9-10
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| 缩略语 | 第10-11
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| 1.文献综述 | 第11-36
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| · 细菌S-层及其一般性质 | 第12-15
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| · 细菌S-层的多样性 | 第15-21
页 |
| · S-层结构的多样性 | 第15-18
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| · S-层在不同细菌种属中存在的多样性 | 第15
页 |
| · 不同的S-层致使表达形成不同的菌落形态 | 第15
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| · S-层结构装配的多样性 | 第15-17
页 |
| · 组成S-层晶格的结构多样性 | 第17
页 |
| · S-层结构装配的牢固性存在多样性 | 第17-18
页 |
| · S-层蛋白的多样性 | 第18-20
页 |
| · S-层蛋白的大小呈现多样性 | 第18
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| · 组成S-层的基本蛋白单元的多样性 | 第18
页 |
| · 形成S-层晶体的蛋白质结构单元同源性的多样性 | 第18
页 |
| · S-层蛋白结构域的多样性 | 第18-19
页 |
| · S-层蛋白转译后修饰的多样性 | 第19
页 |
| · S-层蛋白作为抗原的多态性 | 第19-20
页 |
| · S-层蛋白基因的多样性 | 第20-21
页 |
| · 编码S-层蛋白的基因多样性 | 第20
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| · S-层基因的结构多样性 | 第20
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| · S-层基因的启动子结构的多样性 | 第20-21
页 |
| · 细菌S-层的功能多样性 | 第21
页 |
| · 细菌S-层的应用 | 第21-28
页 |
| · 细菌S-层的应用概述 | 第21-23
页 |
| · 细菌S-层的应用基础 | 第23-26
页 |
| · S-层蛋白的自装配 | 第23
页 |
| · S-层蛋白与次细胞壁多聚体(SCWP)的相互作用 | 第23-26
页 |
| · 细菌S-层的应用实例 | 第26-28
页 |
| · S-层融合蛋白和其应用 | 第26-28
页 |
| · S-层蛋白在微米和纳米材料上的应用 | 第28
页 |
| · 蜡状芽胞杆菌群的S-层 | 第28-32
页 |
| · 蜡状芽胞杆菌群简介 | 第28-31
页 |
| · 蜡状芽胞杆菌群的S-层 | 第31-32
页 |
| · 细菌S-层研究方法综述 | 第32-34
页 |
| · 细菌S-层观测研究方法 | 第32-33
页 |
| · 细菌S-层基因在外源宿主中的表达 | 第33
页 |
| · 细菌S-层蛋白结构与功能的研究 | 第33-34
页 |
| · 本文的研究背景及研究意义 | 第34-36
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌CTC菌株产生的伴胞晶体及其产生的条件 | 第34
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌CTC菌株的S-层蛋白可以形成伴胞晶体 | 第34
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌CTC菌株细胞表面的S-层结构 | 第34-35
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌中S-层基因的普查 | 第35
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌CTC菌株的分类鉴定 | 第35
页 |
| · 本文的研究目的和意义 | 第35-36
页 |
| 2.材料与方法 | 第36-54
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| · 菌株 | 第36-37
页 |
| · 质粒 | 第37
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| · 引物 | 第37-38
页 |
| · 培养基和实验试剂 | 第38-40
页 |
| · 培养基和普通实验试剂 | 第38-39
页 |
| · 生化试剂及免疫试剂 | 第39-40
页 |
| · 生物测定供试昆虫和靶细胞 | 第40
页 |
| · DNA测序公司 | 第40
页 |
| · 仪器 | 第40
页 |
| · 各种溶液及配方 | 第40-41
页 |
| · 实验方法 | 第41-54
页 |
| · 微生物培养条件及菌种保藏 | 第41
页 |
| · 碱裂解法抽提大肠杆菌质粒DNA | 第41
页 |
| · 大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第41-42
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌总DNA抽提 | 第42
页 |
| · DNA片段的回收 | 第42-43
页 |
| · DNA的纯化 | 第43
页 |
| · 载体的去磷酸化 | 第43
页 |
| · DNA的连接 | 第43
页 |
| · 大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2法)及转化 | 第43-44
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌的电穿孔 | 第44
页 |
| · DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45
页 |
| · IPTG诱导大肠杆菌中重组基因的表达 | 第45
页 |
| · PCR技术 | 第45
页 |
| · AT克隆 | 第45-46
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌RNA的抽提 | 第46
页 |
| · RNA电泳(甲醛凝胶电泳) | 第46-47
页 |
| · RNA的定量以及质量检测 | 第47
页 |
| · RT-PCR | 第47
页 |
| · SDS-PAGE和蛋白质的银染 | 第47-48
页 |
| · Western blot | 第48-49
页 |
| · 抗血清的制备 | 第49-50
页 |
| · 免疫双扩散定性检测抗体效价 | 第50
页 |
| · ELISA定量检测抗体效价 | 第50-51
页 |
| · 蛋白质测序 | 第51
页 |
| · 蛋白质组学双向电泳分离技术 | 第51-53
页 |
| · 对棉铃虫毒力的生物测定和细胞毒性试验 | 第53
页 |
| · 分子生物学操作软件及基本生物信息学分析方法 | 第53-54
页 |
| 3.结果与分析 | 第54-91
页 |
| · 与苏云金芽胞杆菌相关的生物信息学分析 | 第54-61
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因密码子组成分析 | 第54
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因内部重复序列分析 | 第54-55
页 |
| · ctc_1、ctc_2全基因重复序列分析 | 第55
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因上游启动子分析 | 第55-56
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因下游终止子分析 | 第56
页 |
| · ctc_1基因的上游基因分析 | 第56-57
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因全长比对结果 | 第57
页 |
| · CTC_1和CTC_2蛋白全长比对结果 | 第57
页 |
| · CTC_1蛋白N段和CTC_2蛋白N段比对结果 | 第57-58
页 |
| · CTC_1蛋白C段和CTC_2蛋白C段比对结果 | 第58
页 |
| · CTC_1蛋白C段和CTC_2蛋白C段基因序列比对结果 | 第58
页 |
| · CTC_1和CTC_2蛋白保守结构域SLH分析 | 第58
页 |
| · S-层蛋白的信号肽预测 | 第58-59
页 |
| · CTC_1蛋白和SAP蛋白比对结果 | 第59
页 |
| · CTC_2蛋白和EA1蛋白比对结果 | 第59
页 |
| · CTC_1-C和CTC_2-C末端多肽潜在的抗原决定簇分析 | 第59-60
页 |
| · 小结 | 第60-61
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌一类新的内涵体蛋白 | 第61-74
页 |
| · CTC菌株在不同pH环境下的生长曲线 | 第61
页 |
| · CTC菌株表面S-层的研究 | 第61-63
页 |
| · CTC菌株表面S-层的电镜观察 | 第61-62
页 |
| · CTC菌株表面S-层的冰冻蚀刻 | 第62
页 |
| · SDS-PAGE检测CTC菌株表面S-层 | 第62
页 |
| · CTC菌株表面S-层的初抽提 | 第62-63
页 |
| · CTC菌株表面S-层蛋白测序结果 | 第63
页 |
| · UTC菌株芽胞期内涵体的研究 | 第63-66
页 |
| · CTC菌株芽胞期内涵体的电镜观察 | 第64
页 |
| · CTC菌株芽胞期内涵体的初抽提 | 第64-65
页 |
| · CTC菌株芽胞期内涵体蛋白测序结果 | 第65-66
页 |
| · CTC菌株芽胞期内涵体的表面结构 | 第66
页 |
| · Bt.菌株中类CTC菌株的普查 | 第66-73
页 |
| · CTC_1和CTC_2蛋白C末端特异性抗血清的制备 | 第66-69
页 |
| · 62个Bt.菌株内涵体的SDS-PAGE和Western blot分析 | 第69
页 |
| · 62个Bt.菌株的PCR分析 | 第69-71
页 |
| · 阳性菌株的基因克隆、测序和序列比对分析 | 第71
页 |
| · 阳性菌株H20ac、T68、H61的基本生物学性状 | 第71-73
页 |
| · 内涵体蛋白对棉铃虫的毒力和细胞毒性 | 第73
页 |
| · 小 结 | 第73-74
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌的S-层形成内涵体与低氧条件有关 | 第74-80
页 |
| · CTC菌株在不同培养条件下的生长状态 | 第74-76
页 |
| · 在常规摇床中的发酵比较研究 | 第74
页 |
| · 在固体平皿中的生长比较 | 第74-75
页 |
| · 在发酵罐中的分批发酵比较研究 | 第75-76
页 |
| · 不同通气条件下S-层形成内涵体的Western blot证据 | 第76-77
页 |
| · 不同通气条件下S-层形成内涵体的RT-PCR证据 | 第77-78
页 |
| · 在低氧条件下S-层形成内涵体的质谱证据 | 第78
页 |
| · 低氧条件下其它菌株的S-层蛋白形成内涵体 | 第78-79
页 |
| · 小结 | 第79-80
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌中S-层功能的初步探索 | 第80-90
页 |
| · CTC菌株中S-层基因的突变结果 | 第80-87
页 |
| · S-层基因突变菌株的中间载体的构建 | 第80-82
页 |
| · 苏云金芽胞杆菌野生菌株的电转化条件 | 第82-83
页 |
| · 突变前的中间转化子BMB0549~*的获得 | 第83
页 |
| · 突变前的中间转化子BMB0549~*的PCR验证 | 第83-84
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| · 通过双交换缺失CTC菌株的S-层基因示意图 | 第84-85
页 |
| · ctc_1和ctc_2基因突变菌株的筛选结果 | 第85
页 |
| · S-层基因突变菌株的验证 | 第85-87
页 |
| · CTC菌株S-层缺失株耐碱性实验结果 | 第87-88
页 |
| · 通过蛋白质组学的方法研究S-层的功能 | 第88-89
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| · 样品蛋白质浓度测定 | 第88
页 |
| · 突变株和野生株总蛋白的双向电泳 | 第88-89
页 |
| · 小结 | 第89-90
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| · 本文主要结果总结 | 第90-91
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| 4 讨论 | 第91-93
页 |
| 参考文献 | 第93-101
页 |
| 致谢 | 第101-102
页 |
| 附录 | 第102-111
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| 攻博期间的成果 | 第111
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