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TuMV HC-Pro蛋白自身互作及其与拟南芥编码Rieske Fe/S蛋白的互作研究

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TuMV HC-Pro蛋白自身互作及其与拟南芥编码Rieske Fe/S蛋白的互作研究
论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
缩略语表第12-16页
本论文所用病毒缩写及中英文对照第16-18页
第一章 文献综述第18-51页
  1. HC-Pro蛋白第18-31页
    · HC-Pro蛋白的结构第18-21页
    · HC-Pro蛋白的功能第21-31页
      · HC-Pro的蛋白酶功能第21-22页
      · HC-Pro在介体传毒中的作用第22-25页
      · HC-Pro在病毒细胞间运动及长距离运输中的作用第25-26页
      · HC-Pro参与病毒复制及症状表现第26-27页
      · HC-Pro抑制植物的基因沉默第27-31页
  2. 病毒与寄主相互作用的研究方法及其在Potyvirus属病毒研究中的应用第31-43页
    · 转基因第31-32页
    · 全长侵染性克隆第32-33页
    · 蛋白质定位分析第33-36页
      · 免疫胶体金定位第33-34页
      · 免疫荧光技术第34页
      · GFP及其突变体在定位中的应用第34-36页
    · 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CO-IP)第36页
    · 酵母双杂交系统第36-39页
    · 双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)第39-40页
    · 串联亲和纯化技术(Tandem affinity purification,TAP)第40-42页
    · 其他技术与方法第42-43页
  3. 病毒诱导的基因沉默第43-50页
    · VIGS载体类型第45-48页
      · RNA病毒载体第45-47页
      · DNA病毒载体第47-48页
      · 卫星病毒和卫星DNA载体第48页
    · VIGS载体研究基因功能的优点和局限性第48-50页
      · VIGS载体研究基因功能的优点第48-49页
      · VIGS载体研究基因功能的局限性第49-50页
  4 本研究的目的与内容第50-51页
第二章 HC-Pro蛋白的表达和抑制子功能鉴定第51-69页
  1 材料与方法第51-62页
    · 实验材料第51-52页
      · 毒源与植物材料第51页
      · 菌株与载体质粒第51-52页
    · 试剂和仪器第52页
      · 试剂第52页
      · 仪器第52页
    · 实验方法第52-62页
      · 摩擦接种第52-53页
      · 电子显微镜观察第53页
      · RNA抽提第53-55页
      · 逆转录第55页
      · 聚合酶链式反应(PCR)第55-56页
      · 5'-RACE第56-57页
      · DNA片段切胶纯化第57页
      · T-A连接第57-58页
      · 大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl_2法)第58页
      · 转化和筛选第58页
      · 质粒提取第58-59页
      · 重组质粒的鉴定第59页
      · 序列测定和分析第59页
      · 感受态农杆菌的制备第59页
      · 电击转化感受态农杆菌第59-60页
      · 携带GFP的TuMV-UK1双元表达载体构建第60页
      · HC-Pro蛋白在PVX载体中的表达第60-61页
      · HC-Pro沉默抑制功能的鉴定第61-62页
  2 结果与分析第62-67页
    · 不同形式的TuMV-UK1侵染性克隆致病性存在差异第62-64页
    · TuMV-UK1分离物的病毒粒子形态和细胞病理学特征第64-65页
    · HC-Pro是基因沉默的抑制子第65-66页
    · HC-Pro在PVX载体中表达增强病毒的致病性第66-67页
  3 讨论第67-69页
第三章 TuMV HC-Pro蛋白的定位及自身相互作用第69-89页
  1 材料与方法第69-77页
    · 材料第69-70页
      · 质粒和菌株第69-70页
      · 主要试剂第70页
    · 方法第70-77页
      · 常规分子生物学方法第70-71页
      · 酵母双杂交基本操作第71-73页
      · HC-Pro及其突变体酵母双杂交载体的构建第73-74页
      · 植物表达载体的构建第74-75页
      · 农杆菌浸润烟草组织第75页
      · 原生质体的制备第75-76页
      · TuMV HC-Pro在昆虫细胞中的定位和相互作用第76-77页
      · 共聚焦显微观察第77页
  2 结果与分析第77-86页
    · TuMV HC-Pro蛋白自身相互作用研究第77-80页
      · 酵母双杂交检测HC-Pro蛋白的自身互作第77页
      · 双分子荧光互补检测HC-Pro蛋白在寄主体内的相互作用第77-78页
      · 双分子荧光互补检测HC-Pro蛋白在昆虫细胞中的相互作用第78-80页
    · TuMV HC-Pro蛋白自身相互作用功能区的分析第80-83页
      · YTH鉴定TuMV HC-Pro蛋白自身相互作用功能区的分析第80-82页
      · BiFC鉴定TuMV HC-Pro蛋白自身相互作用功能区的分析第82-83页
    · TuMV HC-Pro蛋白的亚细胞定位第83-86页
      · TuMV HC-Pro蛋白在烟草表皮细胞和原生质体中的定位第83页
      · TuMV HC-Pro蛋白突变体在烟草表皮细胞中的定位第83-85页
      · TuMV HC-Pro蛋白在昆虫细胞中的定位第85-86页
  3 讨论第86-89页
第四章 TuMV HC-Pro与拟南芥Rieske Fe/S蛋白的相互作用第89-113页
  1 材料与方法第90-96页
    · 材料第90-91页
      · 植物材料第90-91页
      · 菌株第91页
      · 病毒载体第91页
    · 方法第91-96页
      · 常规分子生物学方法第91页
      · 酵母双杂交基本操作第91页
      · 酵母双杂交载体的构建第91-92页
      · 构建植物表达载体第92-94页
      · 农杆菌浸润烟草组织第94页
      · 共聚焦显微观察第94页
      · 病毒诱导的Pet C基因沉默第94-95页
      · 病毒诱导的Pet C基因沉默效率半定量检测第95-96页
  2 结果与分析第96-110页
    · Rieske Fe/S蛋白结构分析第96-97页
    · TuMV HC-Pro蛋白与Rieske Fe/S蛋白相互作用研究第97-100页
      · 酵母双杂交检测TuMV HC-Pro蛋白与Rieske Fe/S蛋白的互作第97-99页
      · BiFC检测TuMV HC-Pro蛋白与Rieske Fe/S蛋白的互作第99-100页
    · TuMV HC-Pro蛋白对Rieske Fe/S蛋白定位影响的研究第100-102页
      2.3.1. Rieske Fe/S蛋白的亚细胞定位第100-101页
      · HC-Pro蛋白对Rieske Fe/S蛋白的亚细胞定位的影响第101-102页
    · TRV介导的Pet C基因在拟南芥上的沉默第102-107页
      · 沉默载体的构建第102-103页
      · Pet C基因沉默后拟南芥植株表型分析第103-106页
      · 沉默后Pet C基因的半定量RT-PCR水平分析第106-107页
    · TRV介导的Pet C基因沉默的烟草植株表型分析第107-108页
    · PVX介导的Pet C基因沉默的烟草植株的表型分析第108-110页
  3 讨论第110-113页
第五章 全文总结与展望第113-116页
  1 主要结论第113-115页
  2 展望第115-116页
参考文献第116-129页
附录1 主要试剂及溶液的配制第129-133页
附录2 目的基因序列第133-134页
附录3 在读期间论文发表情况第134-135页
致谢第135 页

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