论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-12
页 |
| 英文摘要 | 第12-15
页 |
| 综述部分 | 第15-49
页 |
| 文献综述 | 第16-33
页 |
| 1.负链RNA病毒生命周期的简单回顾 | 第16-17
页 |
| 2.负链RNA病毒反向遗传操作系统研究进展 | 第17-20
页 |
| 3.不分节段负链RNA病毒的复制和转录 | 第20-22
页 |
| · 基因结束信号 | 第20
页 |
| · 基因间隔区 | 第20-21
页 |
| · 基因起始信号 | 第21
页 |
| · 复制 | 第21-22
页 |
| · “六碱基规则” | 第22
页 |
| 4.负链RNA病毒的蛋白质组成 | 第22-26
页 |
| · 磷蛋白(P) | 第22
页 |
| · 基质蛋白(M) | 第22-23
页 |
| · 糖蛋白 | 第23-25
页 |
| · 附属蛋白 | 第25-26
页 |
| 5.负链RNA病毒反向遗传操作系统及其应用研究 | 第26-31
页 |
| · 活病毒载体 | 第26-28
页 |
| · 基因传递粒子 | 第28
页 |
| · 致弱活病毒疫苗 | 第28-31
页 |
| 6.新城疫病毒反向遗传操作系统及其应用研究 | 第31-33
页 |
| · 新城疫病毒概况 | 第31-32
页 |
| · 新城疫病毒致病力的分子基础 | 第32
页 |
| · 新城疫病毒的反向遗传操作 | 第32
页 |
| · 新城疫病毒作为活病毒载体的应用前景 | 第32-33
页 |
| 7.展望未来 | 第33
页 |
| 参考文献 | 第33-49
页 |
| 实验部分 | 第49-122
页 |
| 第一章：新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统的建立 | 第50-64
页 |
| 1.材料与方法 | 第51-56
页 |
| · 细胞和病毒 | 第51
页 |
| · SPF鸡和SPF鸡胚 | 第51
页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第51
页 |
| · 引物设计与合成 | 第51-52
页 |
| · 病毒基因组的提取、反转录和PCR | 第52
页 |
| · RT-PCR产物的克隆 | 第52
页 |
| · 辅助质粒的构建 | 第52-53
页 |
| · 基因组全长cDNA克隆的构建 | 第53-55
页 |
| · 病毒拯救 | 第55
页 |
| · 间接免疫荧光(IFA) | 第55
页 |
| · 拯救病毒的致病性试验 | 第55-56
页 |
| · 拯救病毒的鸡胚生长特性 | 第56
页 |
| · 免疫及攻毒保护试验 | 第56
页 |
| 2.结果 | 第56-62
页 |
| · 辅助质粒的构建 | 第56-57
页 |
| · NDV LaSota株基因组全长cDNA的构建 | 第57
页 |
| · 从全长cDNA克隆拯救重组病毒 | 第57-58
页 |
| · 间接免疫荧光试验(IFA) | 第58
页 |
| · rLaSota在鸡胚内的生长特性 | 第58-60
页 |
| · rLaSota的致病性 | 第60
页 |
| · rLaSota的免疫原性及其对强毒攻击免疫保护效果 | 第60-61
页 |
| · 核酸序列号 | 第61-62
页 |
| 3.讨论 | 第62
页 |
| 参考文献 | 第62-64
页 |
| 第二章：表达绿色荧光蛋白重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建 | 第64-74
页 |
| 1.材料与方法 | 第64-67
页 |
| · 细胞和病毒 | 第64
页 |
| · SPF鸡和SPF鸡胚 | 第64
页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第64
页 |
| · 引物 | 第64-65
页 |
| · 表达EGFP重组基因组全长cDNA的构建 | 第65
页 |
| · 重组病毒的拯救及鉴定 | 第65-66
页 |
| · 重组病毒EGFP稳定表达检测 | 第66
页 |
| · 重组病毒的致病性试验 | 第66
页 |
| · 重组病毒的鸡胚生长特性 | 第66
页 |
| · 免疫及攻毒试验 | 第66-67
页 |
| 2.结果 | 第67-72
页 |
| · 重组病毒基因组全长cDNA的构建 | 第67-68
页 |
| · 从全长cDNA克隆拯救重组病毒 | 第68
页 |
| · rLaSota-EGFP外源报告基因的稳定表达 | 第68-69
页 |
| · rLaSota-EGFP在鸡胚的生长特性 | 第69
页 |
| · rLaSota-EGFP的致病性 | 第69-71
页 |
| · rLaSota-EGFP的免疫原性及免疫攻毒保护试验 | 第71-72
页 |
| 3.讨论 | 第72-73
页 |
| 参考文献 | 第73-74
页 |
| 第三章：传染性法氏囊病毒超强毒株VP2基因重组新城疫病毒活载体疫苗的研究 | 第74-89
页 |
| 1.材料与方法 | 第75-77
页 |
| · 细胞、病毒和材料 | 第75
页 |
| · SPF鸡和SPF鸡胚 | 第75
页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第75
页 |
| · 引物 | 第75-76
页 |
| · 表达VP2基因的病毒基因组cDNA克隆的构建 | 第76
页 |
| · 重组病毒的拯救 | 第76
页 |
| · 间接免疫荧光(IFA) | 第76
页 |
| · Western-blot检测VP2蛋白表达 | 第76-77
页 |
| · 重组病毒致病性分析 | 第77
页 |
| · 重组病毒生长动力学比较 | 第77
页 |
| · 免疫及攻毒保护试验 | 第77
页 |
| 2.结果 | 第77-85
页 |
| · 重组型NDV基因组全长cDNA的构建 | 第77-78
页 |
| · 从全长cDNA克隆拯救重组型NDV | 第78-79
页 |
| · 间接免疫荧光试验(IFA)检测VP2蛋白表达 | 第79-80
页 |
| · Western-blot检测VP2抗原表达 | 第80
页 |
| · 重组病毒在鸡胚生长特性分析 | 第80-81
页 |
| · 重组病毒遗传稳定性及致病性分析 | 第81-82
页 |
| · 重组病毒诱导保护性抗体的效果 | 第82-84
页 |
| · 免疫鸡法氏囊的病理组织学变化 | 第84-85
页 |
| 3.讨论 | 第85-87
页 |
| 参考文献 | 第87-89
页 |
| 第四章：H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组新城疫病毒活载体疫苗的研究 | 第89-111
页 |
| 1 材料与方法 | 第90-94
页 |
| · 细胞和病毒 | 第90-91
页 |
| · 主要试剂和仪器 | 第91
页 |
| · 试验动物 | 第91
页 |
| · 引物 | 第91
页 |
| · 病毒RNA的提取、反转录和PCR | 第91
页 |
| · 表达HA基因的基因组全长cDNA的构建 | 第91-92
页 |
| · 重组病毒的拯救 | 第92
页 |
| · RT-PCR鉴定及序列测定 | 第92
页 |
| · 间接免疫荧光检测(IFA) | 第92-93
页 |
| · Western-blot检测重组病毒HA基因表达 | 第93
页 |
| · 重组病毒HA基因稳定表达检测 | 第93
页 |
| · 重组病毒的致病性试验 | 第93
页 |
| · 重组病毒的鸡胚生长特性 | 第93
页 |
| · 重组病毒对雏鸡的免疫试验 | 第93-94
页 |
| 2.结果 | 第94-105
页 |
| · 表达HA基因的NDV全基因组cDNA克隆的构建和重组病毒的拯救 | 第94-96
页 |
| · 间接免疫荧光试验(IFA) | 第96-97
页 |
| · Western-blot检测重组病毒HA基因表达 | 第97-98
页 |
| · 重组病毒的遗传稳定性 | 第98-99
页 |
| · 重组病毒的致病性试验 | 第99-100
页 |
| · 重组病毒鸡胚生长动力学 | 第100
页 |
| · 重组病毒对SPF雏鸡的安全性 | 第100-101
页 |
| · 重组病毒不同剂量免疫后的HI抗体反应 | 第101-103
页 |
| · 重组病毒对SPF雏鸡的免疫攻毒保护试验 | 第103
页 |
| · 重组病毒对SPF雏鸡的免疫持续期研究 | 第103-105
页 |
| 3.讨论 | 第105-109
页 |
| 参考文献 | 第109-111
页 |
| 第五章 表达H5亚型高致病力禽流感HA基因的重组新城疫病毒对小鼠安全性和免疫原性研究 | 第111-122
页 |
| 1.材料与方法 | 第112-113
页 |
| · 病毒 | 第112
页 |
| · 实验动物 | 第112
页 |
| · 重组病毒对小鼠的安全性试验 | 第112-113
页 |
| · 重组病毒对小鼠的攻毒保护试验 | 第113
页 |
| 2.结果 | 第113-117
页 |
| · 重组病毒对小鼠的安全性评估 | 第113-114
页 |
| · 重组病毒免疫小鼠对H5亚型高致病力禽流感病毒的交叉保护实验 | 第114-117
页 |
| 3.讨论 | 第117-120
页 |
| 参考文献 | 第120-122
页 |
| 全文总结 | 第122-124
页 |
| 附录 | 第124-157
页 |
| 致谢 | 第157-159
页 |
| 简历 | 第159
页 |
