论文目录 | |
中文摘要 | 第13-15页 |
ABSTRACT | 第15-18页 |
前言 | 第18-30页 |
1 蝎与蝎毒 | 第18-19页 |
2 神经兴奋类疾病与东亚钳蝎毒抗癫痫肽(AEP) | 第19-20页 |
3 基因重组药物与重组蝎毒抗神经兴奋肽(ANEP) | 第20-22页 |
4 蛋白多肽类药物注射给药系统研究进展 | 第22-24页 |
5 脑靶向给药研究进展 | 第24-27页 |
6 三甲基壳聚糖做为纳米粒载体材料的选择 | 第27-28页 |
7 本论文研究的立题依据及目的 | 第28-29页 |
8 本论文的主要研究内容 | 第29-30页 |
第一章 重组蝎毒抗神经兴奋肽(ANEP)的制备——ANEP的表达和纯化 | 第30-45页 |
1 材料与仪器 | 第30-31页 |
· 材料 | 第30-31页 |
· 仪器 | 第31页 |
2 方法与结果 | 第31-40页 |
· ANEP的可溶性表达 | 第31-37页 |
· 表达质粒pNJUTRX-1-ANEP-His_6的构建 | 第31-32页 |
· 转化 | 第32-33页 |
· 含重组质粒的细菌菌落的鉴定 | 第33-34页 |
· 表达可溶性验证 | 第34-37页 |
· ANEP的实验室规模发酵 | 第37页 |
· ANEP的分离纯化 | 第37-40页 |
· 金属离子螯合柱层析方法的建立 | 第37-39页 |
· 样品浓缩除盐 | 第39页 |
· 蛋白质含量测定——Lowry法(即Folin-酚法) | 第39-40页 |
3 讨论 | 第40-43页 |
4 本章小结 | 第43-45页 |
第二章 重组蝎毒抗神经兴奋肽(ANEP)分析方法的建立 | 第45-62页 |
1 材料与仪器 | 第45-46页 |
2 方法与结果 | 第46-48页 |
· 微量二喹啉甲酸(Micro BCA)分析方法的建立 | 第46-48页 |
· 标准曲线的绘制 | 第47-48页 |
· 分析方法的确证 | 第48页 |
· 抗血清的制备 | 第48-51页 |
· 免疫程序及方法 | 第49-50页 |
· 对流免疫电泳法检测抗体的生成 | 第50-51页 |
· 亲和层析法纯化抗体 | 第51-53页 |
· 原理 | 第51-52页 |
· 凝胶柱的制备 | 第52页 |
· 上样 | 第52页 |
· 洗脱 | 第52-53页 |
· 测定抗体含量 | 第53页 |
· Western blot方法确证抗体的特异性 | 第53-54页 |
· 工作液的配制 | 第53页 |
· Western blot检测 | 第53-54页 |
· ELISA分析方法的建立 | 第54-59页 |
· 试剂配制 | 第54-55页 |
· 不同ELISA测定方法的选择比较 | 第55-56页 |
· ELISA法最适条件确定 | 第56-58页 |
· 分析方法的确证 | 第58-59页 |
· 血浆对ELISA测定的干扰 | 第59页 |
3 讨论 | 第59-61页 |
4 本章小结 | 第61-62页 |
第三章 ANEP的基本性质和处方前研究 | 第62-71页 |
1 材料与仪器 | 第62页 |
2 方法与结果 | 第62-69页 |
· ANEP的基本理化性质 | 第62-66页 |
· ANEP的基因序列 | 第62-63页 |
· ANEP的氨基酸序列 | 第63页 |
· ANEP的分子量 | 第63-64页 |
· ANEP的等电点 | 第64页 |
· ANEP的空间结构 | 第64-65页 |
· ANEP的紫外吸收光谱 | 第65页 |
· ANEP表观油/水分配系数的测定 | 第65-66页 |
· ANEP的初步稳定性研究 | 第66-69页 |
· 热稳定性 | 第66-67页 |
· pH值稳定性 | 第67页 |
· 冻融稳定性 | 第67-68页 |
· 超声稳定性 | 第68-69页 |
3 讨论 | 第69-70页 |
4 本章小结 | 第70-71页 |
第四章 ANEP三甲基壳聚糖纳米粒的制备及性质研究 | 第71-96页 |
1 材料与仪器 | 第71-72页 |
2 方法与结果 | 第72-92页 |
· 三甲基壳聚糖的制备 | 第72-77页 |
· 三甲基壳聚糖的合成路线 | 第72-73页 |
· 三甲基壳聚糖的结构表征 | 第73-77页 |
· 三甲基壳聚糖的溶解性实验 | 第77页 |
· ANEP-TMC/NPs的制备 | 第77-82页 |
· 制备方法 | 第77页 |
· 评价指标 | 第77页 |
· ANEP-TMC/NPs的包封率、载药量和粒径 | 第77-78页 |
· 正交设计 | 第78-81页 |
· 不同甲基化取代度的TMC对纳米粒包封率的影响 | 第81-82页 |
· ANEP-TMC/NPs的基本性质 | 第82-86页 |
· 粒径与Zeta电位 | 第82-83页 |
· 外观形态 | 第83-84页 |
· pH值 | 第84页 |
· 包封率与载药量 | 第84页 |
· ANEP在纳米粒中的稳定性 | 第84-85页 |
· ANEP-TMC/NPs的体外释放 | 第85页 |
· ANEP-TMC/NPs的稳定性考察 | 第85-86页 |
· ANEP-TMC/NPs冻干制剂的制备 | 第86-90页 |
· 冻干支持剂的筛选 | 第86-88页 |
· 冻干工艺的考察 | 第88页 |
· ANEP-TMC/NPs冻干制剂的粒径与zeta电位 | 第88-89页 |
· ANEP-TMC/NPs冻干制剂的包封率 | 第89页 |
· ANEP-TMC/NPs冻干制剂复溶后的稳定性 | 第89-90页 |
· 制剂初步安全性实验 | 第90-92页 |
· 体外溶血试验 | 第90-91页 |
· 血管刺激性实验 | 第91-92页 |
3 讨论 | 第92-95页 |
4 本章小结 | 第95-96页 |
第五章 ANEP-TMC/NPs的药物动力学和组织分布研究 | 第96-127页 |
1 材料与仪器 | 第96页 |
2 方法与结果 | 第96-123页 |
· FITC标记ANEP(FITC-ANEP)的制备 | 第96-98页 |
· 标准曲线的绘制 | 第98页 |
· 分析方法的确证 | 第98-99页 |
· 精密度 | 第98-99页 |
· 回收率 | 第99页 |
· ANEP-FITC中FITC含量的确定 | 第99页 |
· FITC-ANEP-TMC/NPs的制备和性质 | 第99页 |
· 药物动力学研究 | 第99-110页 |
· 血浆样品荧光分析方法的建立 | 第99-101页 |
· FITC-ANEP在大鼠体内的药物动力学研究 | 第101-108页 |
· FITC-ANEP-TMC/NPs在大鼠体内的药物动力学研究 | 第108-110页 |
· FITC-ANEP及FITC-ANEP-TMC/NPs的组织分布研究 | 第110-123页 |
· 组织样品荧光分析方法的建立 | 第111-114页 |
· 给药方案、组织样品采集及数据处理 | 第114-120页 |
· FITC-ANEP-TMC/NPs的靶向性评价 | 第120页 |
· FITC-ANEP-TMC/NPs入脑机制的探讨 | 第120-123页 |
· FITC-TMC在血液中的消除 | 第123页 |
3 讨论 | 第123-125页 |
4 本章小结 | 第125-127页 |
全文结论 | 第127-129页 |
参考文献 | 第129-137页 |
缩略词注解 | 第137-139页 |
致谢 | 第139-140页 |
攻读博士学位期间发表论文情况 | 第140页 |