论文目录 | |
| 中文摘要 | 第13-15
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| 英文摘要 | 第15-17
页 |
| 1 前言 | 第17-34
页 |
| · 食药用菌多糖的提取、分离纯化与结构分析 | 第17-24
页 |
| · 食药用真菌多糖的提取 | 第17-18
页 |
| · 食药用菌多糖的分离纯化 | 第18-19
页 |
| · 分离纯化 | 第18
页 |
| · 纯度鉴定 | 第18
页 |
| · 分子量测定 | 第18-19
页 |
| · 食药用真菌多糖的结构分析 | 第19-24
页 |
| · 化学方法 | 第20
页 |
| · 波谱学方法 | 第20-24
页 |
| · 多糖的抗病毒生物活性 | 第24-28
页 |
| · 多糖的抗动物病毒作用 | 第27
页 |
| · 多糖的抗植物病毒作用 | 第27-28
页 |
| · 抗植物病毒作用机制 | 第28-30
页 |
| · 抑制病毒侵染 | 第28-29
页 |
| · 钝化病毒 | 第28
页 |
| · 作用于病毒侵染位点 | 第28-29
页 |
| · 抑制病毒复制 | 第29
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| · 诱导寄主产生抗病性 | 第29-30
页 |
| · 毛头鬼伞药理活性研究 | 第30-32
页 |
| · 降血糖作用 | 第30
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| · 降血脂作用 | 第30
页 |
| · 提高免疫活性作用 | 第30-31
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| · 抗肿瘤作用 | 第31
页 |
| · 抗病毒活性 | 第31
页 |
| · 抑菌作用及其毒性 | 第31-32
页 |
| · 本研究的目的意义及主要技术路线 | 第32-34
页 |
| 2 毛头鬼伞多糖的分离纯化和理化性质 | 第34-60
页 |
| · 实验材料 | 第34-35
页 |
| · 材料 | 第34
页 |
| · 主要试剂 | 第34
页 |
| · 主要仪器 | 第34-35
页 |
| · 实验方法 | 第35-41
页 |
| · 毛头鬼伞子实体多糖的制备 | 第35
页 |
| · 毛头鬼伞菌丝体多糖的制备 | 第35-36
页 |
| · 毛头鬼伞菌株CC969菌丝体液态培养条件研究 | 第35-36
页 |
| · 毛头鬼伞菌丝体胞外多糖和胞内多糖的提取 | 第36
页 |
| · 毛头鬼伞子实体多糖抗TMV活性成分的分离纯化 | 第36-37
页 |
| · 乙醇分级沉淀 | 第36-37
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| · DEAE-Sephadex A-25柱层析 | 第37
页 |
| · 多糖的Sepharose6B凝胶柱层析 | 第37
页 |
| · 毛头鬼伞多糖中中性糖、还原糖、蛋白和硫酸基含量测定 | 第37-39
页 |
| · 多糖中中性糖含量测定 | 第37-38
页 |
| · 多糖中蛋白质含量的测定 | 第38
页 |
| · 多糖中还原糖含量的测定 | 第38
页 |
| · 多糖中硫酸基含量的测定 | 第38-39
页 |
| · 毛头鬼伞多糖肝素效价测定 | 第39-40
页 |
| · 毛头鬼伞多糖理化性质定性分析 | 第40
页 |
| · 多糖纯度鉴定 | 第40
页 |
| · 多糖分子量测定 | 第40
页 |
| · 紫外光谱分析 | 第40
页 |
| · 红外光谱分析 | 第40-41
页 |
| · 刚果红实验 | 第41
页 |
| · 多糖与天青A作用实验 | 第41
页 |
| · 结果与分析 | 第41-58
页 |
| · 毛头鬼伞菌株CC969菌丝体液态培养条件研究 | 第41-46
页 |
| · 毛头鬼伞子实体多糖的分离纯化 | 第46-47
页 |
| · 多糖中还原糖、中性糖、蛋白和硫酸基含量 | 第47-50
页 |
| · 多糖肝素效价测定 | 第50
页 |
| · 多糖纯度鉴定 | 第50-51
页 |
| · 多糖分子量测定 | 第51-53
页 |
| · 多糖的紫外光谱分析 | 第53-54
页 |
| · 多糖的红外光谱分析 | 第54-56
页 |
| · 多糖的理化性质定性分析 | 第56
页 |
| · 多糖CCP60a对刚果红最大吸收波长的影响 | 第56-57
页 |
| · 多糖CCP60a与天青A作用 | 第57-58
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| · 小结 | 第58
页 |
| · 讨论 | 第58-60
页 |
| 3 毛头鬼伞子实体多糖CCP60a的结构鉴定 | 第60-75
页 |
| · 材料和方法 | 第60-62
页 |
| · 多糖CCP1中单糖组成的气相色谱法(GC) | 第60
页 |
| · 多糖CCP60a中单糖组成的高效阴离子色谱法(HPAEC) | 第60-61
页 |
| · 甲基化分析(糖残基连接方式分析) | 第61-62
页 |
| · 核磁共振分析(NMR) | 第62
页 |
| · 结果与分析 | 第62-73
页 |
| · 毛头鬼伞多糖CCP1中单糖的气相色谱分析 | 第62-65
页 |
| · 多糖CCP60a中单糖组成的高效阴离子色谱法(HPAEC) | 第65-66
页 |
| · 多糖CCP60a的甲基化分析 | 第66-70
页 |
| · 多糖CCP60a的核磁共振氢谱(~1H NMR)和核磁共振碳谱(~(13)C NMR)分析 | 第70-73
页 |
| · 小结 | 第73
页 |
| · 讨论 | 第73-75
页 |
| 4 毛头鬼伞(Coprinus comatus)多糖抗烟草花叶病毒(TMV)活性 | 第75-83
页 |
| · 材料与方法 | 第75-78
页 |
| · 材料 | 第75-76
页 |
| · 供试药剂 | 第75
页 |
| · 供试烟草品种 | 第75
页 |
| · 供试TMV毒源 | 第75
页 |
| · TMV抗血清 | 第75
页 |
| · 试剂 | 第75
页 |
| · 仪器 | 第75-76
页 |
| · 方法 | 第76-78
页 |
| · TMV的提纯 | 第76-77
页 |
| · 毛头鬼伞多糖对TMV的体外抑制作用 | 第77
页 |
| · 毛头鬼伞多糖对TMV侵染位点的影响 | 第77
页 |
| · 毛头鬼伞子实体多糖抑制TMV复制作用的测定 | 第77-78
页 |
| · 数据分析方法 | 第78
页 |
| · 结果与分析 | 第78-82
页 |
| · 烟草花叶病毒(TMV)的提纯 | 第78
页 |
| · 毛头鬼伞多糖对TMV的体外抑制作用 | 第78-79
页 |
| · 毛头鬼伞多糖对TMV侵染位点的影响 | 第79-80
页 |
| · 毛头鬼伞子实体多糖CCP60a抑制TMV复制作用的结果分析 | 第80-82
页 |
| · 小结与讨论 | 第82-83
页 |
| 5 毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV病毒粒体的影响 | 第83-87
页 |
| · 材料和方法 | 第83
页 |
| · 毛头鬼伞多糖与TMV病毒粒子互作的紫外光谱分析 | 第83
页 |
| · 电镜下观察毛头鬼伞多糖对TMV粒子形态的影响 | 第83
页 |
| · 样品处理方法 | 第83
页 |
| · 电镜观察 | 第83
页 |
| · 结果与分析 | 第83-85
页 |
| · 毛头鬼伞多糖与病毒粒子的紫外光谱 | 第83-84
页 |
| · 电镜下观察毛头鬼伞多糖对TMV粒体结构的影响 | 第84-85
页 |
| · 小结 | 第85
页 |
| · 讨论 | 第85-87
页 |
| 6 毛头鬼伞多糖CCP60a对游离TMV-RNA的降解作用 | 第87-91
页 |
| · 材料与方法 | 第87
页 |
| · TMV-RNA的提取及电泳检测 | 第87
页 |
| · 对TMV-RNA的降解作用 | 第87
页 |
| · 结果与分析 | 第87-89
页 |
| · TMV-RNA的制备及检测 | 第87-88
页 |
| · 对TMV-RNA的降解作用 | 第88-89
页 |
| · 小结 | 第89
页 |
| · 讨论 | 第89-91
页 |
| 7 应用Real Time PCR鉴定毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV-RNA含量的影响 | 第91-112
页 |
| · 材料与方法 | 第91-95
页 |
| · 材料及设备 | 第91
页 |
| · 样品处理方法 | 第91
页 |
| · 引物的设计与合成 | 第91-92
页 |
| · 目的基因的克隆 | 第92-95
页 |
| · Trizol法提取烟草总RNA | 第92
页 |
| · RNA的反转录及PCR反应 | 第92-93
页 |
| · 目的条带回收 | 第93
页 |
| · 连接 | 第93
页 |
| · 大肠杆菌感受态细胞的简易制备 | 第93-94
页 |
| · 转化 | 第94
页 |
| · 质粒提取 | 第94
页 |
| · 重组克隆的 PCR鉴定 | 第94
页 |
| · 重组克隆的酶切鉴定 | 第94
页 |
| · 测序 | 第94-95
页 |
| · 目的基因与管家基因的Real Time PCR检测 | 第95
页 |
| · RNA的提取 | 第95
页 |
| · cDNA的合成的反应体系 | 第95
页 |
| · 目的基因与管家基因Real Time PCR反应 | 第95
页 |
| · 结果与分析 | 第95-107
页 |
| · 目的基因克隆 | 第95-98
页 |
| · PCR扩增 | 第95-96
页 |
| · 克隆 | 第96-97
页 |
| · 测序 | 第97-98
页 |
| · 标准品Real Time PCR结果分析 | 第98-104
页 |
| · 目的基因(replicase和cp)和管家基因(actin)PCR扩增曲线 | 第98-99
页 |
| · 目的基因(replicase和cp)和管家基因(actin)融解曲线分析 | 第99-100
页 |
| · 目的基因(replicase和cp)和管家基因(actin)标准曲线制作 | 第100-104
页 |
| · 样品Real Time PCR结果分析 | 第104-107
页 |
| · 目的基因与管家基因Real Time PCR扩增曲线 | 第104-105
页 |
| · 目的基因与管家基因的原始定量结果 | 第105-106
页 |
| · 目的基因与管家基因的相对定量结果 | 第106-107
页 |
| · 小结 | 第107
页 |
| · 讨论 | 第107-112
页 |
| · 关于植物总RNA的提取 | 第107-108
页 |
| · 关于Real Time PCR的引物 | 第108
页 |
| · 关于Real Time PCR检测 | 第108-110
页 |
| · 关于House keeping Gene(管家基因)的选择 | 第110-112
页 |
| 8 毛头鬼伞多糖CCP60a对TMV外壳蛋白的影响 | 第112-118
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| · 材料和方法 | 第112-114
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| · TMV的提纯 | 第112
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| · TMV外壳蛋白(TMV-CP)的制备 | 第112
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| · 外壳蛋白(CP)的检测 | 第112
页 |
| · 外壳蛋白的紫外检测 | 第112
页 |
| · 外壳蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第112
页 |
| · 多糖对病毒外壳蛋白体外聚合过程的影响 | 第112-113
页 |
| · Western Blotting方法鉴定毛头鬼伞多糖对TMV外壳蛋白含量的影响 | 第113-114
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| · 样品前处理 | 第113
页 |
| · SDS-PAGE电泳 | 第113
页 |
| · 转膜 | 第113
页 |
| · Westren Blotting | 第113-114
页 |
| · 结果与分析 | 第114-117
页 |
| · 外壳蛋白的检测 | 第114-115
页 |
| · 外壳蛋白的紫外检测 | 第114
页 |
| · 外壳蛋白的SDS-PAGE电泳检测 | 第114-115
页 |
| · 毛头鬼伞多糖对TMV外壳蛋白体外聚合过程的影响 | 第115-116
页 |
| · Western Blotting方法鉴定毛头鬼伞多糖对TMV外壳蛋白含量的影响 | 第116-117
页 |
| · 小结与讨论 | 第117-118
页 |
| 9 毛头鬼伞多糖CCP60a对寄主诱导抗病性的影响 | 第118-131
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| · 材料与方法 | 第118-120
页 |
| · 毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草防御酶活性测定 | 第118-119
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| · 酶液提取 | 第118
页 |
| · 酶活测定 | 第118-119
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| · 毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草POD、PPO同工酶谱的影响 | 第119
页 |
| · 毛头鬼伞多糖CCP60a对寄主叶绿素含量的影响 | 第119
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| · HPLC法测定毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草叶片水杨酸含量的影响 | 第119-120
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| · 烟草叶片中SA的提取 | 第120
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| · 测定波长的选择 | 第120
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| · HPLC检测条件 | 第120
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| · 标准曲线建立 | 第120
页 |
| · 结果与分析 | 第120-129
页 |
| · 毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草防御酶活性测定 | 第120-123
页 |
| · 不同处理对烟草叶片POD活性的影响 | 第120-121
页 |
| · 不同处理对烟草叶片PPO活性的影响 | 第121
页 |
| · 不同处理对烟草叶片PAL活性的影响 | 第121-122
页 |
| · 不同处理对烟草叶片β-1，3-葡聚糖酶活性的影响 | 第122-123
页 |
| · 不同处理对烟草叶片几丁质酶活性的影响 | 第123
页 |
| · 不同处理对烟草叶片POD、PPO同工酶谱的变化 | 第123-124
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| · 毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草植株叶绿素含量的影响 | 第124-125
页 |
| · HPLC法测定毛头鬼伞多糖CCP60a对烟草叶片水杨酸(SA)含量的影响 | 第125-129
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| · SA的紫外波谱扫描 | 第125-126
页 |
| · 标准曲线制作 | 第126
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| · 烟草叶片中SA的HPLC检测 | 第126-128
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| · 方法的添加回收率 | 第128-129
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| · CCP60a对感病品种普通烟烟K_(326)叶片中SA含量的影响 | 第129
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| · 小结与讨论 | 第129-131
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| 10 总讨论 | 第131-137
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| · 关于食(药)用菌的液体深层发酵 | 第131-132
页 |
| · 关于毛头鬼伞多糖的分离纯化与结构鉴定 | 第132-134
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| · 关于多糖的抗病毒特性和作用机制 | 第134-135
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| · 有待于进一步探讨的问题 | 第135-136
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| · 食用菌多糖的应用前景 | 第136-137
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| 11 总结 | 第137-138
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| 参考文献 | 第138-146
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| 附录1 缩略词表 | 第146-148
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| 附录2 攻读博士学位期间发表(投稿)论文目录 | 第148-149
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| 致谢 | 第149页 |
