粘质沙雷氏菌发酵生产2,3-丁二醇及其代谢调控研究 |
论文目录 | | 摘要 | 第1-7
页 | Abstract | 第7-17
页 | 第1章 文献综述 | 第17-42
页 | · 2,3-丁二醇的性质及用途 | 第17-18
页 | · 2,3-丁二醇的性质 | 第17
页 | · 2,3-丁二醇的用途 | 第17-18
页 | · 重要的化工原料 | 第17
页 | · 潜在的替代能源 | 第17-18
页 | · 常用的食品添加剂 | 第18
页 | · 其它方面的应用 | 第18
页 | · 2,3-丁二醇的生产方法 | 第18
页 | · 2,3-丁二醇的生产菌株概述 | 第18-25
页 | · 2,3-丁二醇的生产菌株 | 第18-19
页 | · 微生物生产2,3-丁二醇的生理意义 | 第19
页 | · 微生物合成2,3-丁二醇的代谢途径 | 第19-21
页 | · 2,3-丁二醇的旋光异构体及其形成机制 | 第21-25
页 | · 微生物法制备2,3-丁二醇的过程优化 | 第25-35
页 | · 培养基成分研究 | 第25-29
页 | · 碳源 | 第25-26
页 | · 无机盐和酵母粉对2,3-丁二醇发酵的影响 | 第26-28
页 | · 有机酸对2,3-丁二醇的影响 | 第28-29
页 | · 2,3-丁二醇发酵过程控制参数 | 第29-32
页 | · 温度 | 第29
页 | · pH值 | 第29-30
页 | · 溶氧 | 第30-32
页 | · 2,3-丁二醇的发酵工艺 | 第32-35
页 | · 分批发酵 | 第32
页 | · 连续发酵 | 第32-33
页 | · 固定化细胞培养 | 第33
页 | · 两相萃取发酵 | 第33-34
页 | · 分批补料发酵 | 第34
页 | · 两菌共培养发酵(co-culture) | 第34-35
页 | · 代谢工程改造 | 第35-37
页 | · 2,3-丁二醇合成途径相关基因和调控机制 | 第35-36
页 | · 2,3-丁二醇生产菌株的代谢工程改造 | 第36-37
页 | · 粘质沙雷氏菌产2,3-丁二醇的研究进展 | 第37-39
页 | · 粘质沙雷氏菌产2,3-丁二醇的研究概况 | 第37-38
页 | · 粘质沙雷氏菌产2,3-丁二醇的调控机制 | 第38-39
页 | · 2,3-丁二醇的分离纯化进展 | 第39
页 | · 2,3-丁二醇的生产现状和市场情况 | 第39-40
页 | · 论文研究意义和研究内容 | 第40-42
页 | · 论文研究意义 | 第40
页 | · 研究内容 | 第40-42
页 | 第2章 粘质沙雷氏菌生产2,3-丁二醇培养基研究 | 第42-70
页 | · 引言 | 第42
页 | · 实验材料 | 第42-44
页 | · 菌株 | 第42-43
页 | · 实验仪器与实验试剂 | 第43-44
页 | · 主要仪器 | 第43
页 | · 常用试剂 | 第43-44
页 | · 培养基 | 第44
页 | · 实验方法 | 第44-47
页 | · 摇瓶培养方法 | 第44-45
页 | · 种子驯化 | 第45
页 | · 温度对菌体生长和发酵的影响 | 第45
页 | · 装液量对菌体生长和发酵的影响 | 第45
页 | · pH对菌体生长和发酵的影响 | 第45
页 | · 接种量对菌体生长和发酵的影响 | 第45
页 | · 碳源对菌体生长和发酵的影响 | 第45-46
页 | · 氮源对菌体生长和发酵的影响 | 第46
页 | · 不同来源国产蛋白胨和国产酵母粉的筛选 | 第46
页 | · 不同来源国产蛋白胨单因素实验 | 第46
页 | · 不同来源国产酵母粉单因素实验 | 第46
页 | · 有机酸对菌体生长和发酵的影响 | 第46
页 | · 柠檬酸对菌体生长和发酵的影响 | 第46
页 | · 乙酸对2,3-丁二醇发酵的影响 | 第46
页 | · 无机盐对菌体生长和发酵的影响 | 第46
页 | · 起始蔗糖浓度对菌体生长和发酵的影响 | 第46-47
页 | · Plackett-Burman Design设计 | 第47
页 | · Response Surface Methodology分析实验 | 第47
页 | · 培养基优化后的验证实验 | 第47
页 | · 发酵过程维持不同底物浓度对2,3-丁二醇产量的影响 | 第47
页 | · 分析方法 | 第47-52
页 | · 粘质沙雷氏菌菌体浓度测定方法 | 第47-48
页 | · 蔗糖浓度测定原理及方法 | 第48
页 | · 产物测定方法 | 第48-50
页 | · 发酵液中产物的预处理 | 第48-49
页 | · 气相色谱测定乙偶姻和2,3-丁二醇的浓度 | 第49-50
页 | · 副产物的测定方法 | 第50-52
页 | · 发酵液中副产物的预处理 | 第50
页 | · 高效液相色谱测定有机酸等副产物的浓度 | 第50-52
页 | · 实验结果与讨论 | 第52-69
页 | · 种子驯化 | 第52-53
页 | · 温度对菌体生长和发酵的影响 | 第53
页 | · 装液量对菌体生长和发酵的影响 | 第53-54
页 | · pH对菌体生长和发酵的影响 | 第54-56
页 | · 初始pH值对菌体生长和发酵的影响 | 第54-55
页 | · 过程pH值对发酵的影响 | 第55-56
页 | · 接种量对菌体生长和发酵的影响 | 第56-57
页 | · 碳源对菌体生长和发酵的影响 | 第57-58
页 | · 氮源对菌体生长和发酵的影响 | 第58
页 | · 不同来源国产蛋白胨和酵母粉的筛选 | 第58-60
页 | · 不同来源国产蛋白胨的单因素摇瓶实验 | 第58-59
页 | · 不同来源国产酵母粉的单因素摇瓶实验 | 第59-60
页 | · 有机酸对菌体生长和发酵的影响 | 第60-63
页 | · 柠檬酸对菌体生长和发酵的影响 | 第60-61
页 | · 乙酸对菌体生长和发酵的影响 | 第61-63
页 | · 无机盐对菌体生长和发酵的影响 | 第63-64
页 | · 起始蔗糖浓度对菌体生长和发酵的影响 | 第64
页 | · Plackett-Burman Design设计 | 第64-66
页 | · Response Surface Methodology分析实验 | 第66-68
页 | · 优化培养基后发酵过程曲线 | 第68
页 | · 发酵过程中维持不同的底物浓度对2,3-丁二醇产量的影响 | 第68-69
页 | · 本章小结 | 第69-70
页 | 第3章 发酵工艺优化和补料-分批发酵过程研究 | 第70-81
页 | · 引言 | 第70
页 | · 实验材料与分析方法 | 第70-71
页 | · 菌株 | 第70
页 | · 主要仪器和试剂 | 第70
页 | · 主要仪器 | 第70
页 | · 常用试剂 | 第70
页 | · 培养基 | 第70-71
页 | · 分析方法 | 第71
页 | · 产物得率计算方法 | 第71
页 | · 实验方法 | 第71-72
页 | · 分批发酵 | 第71
页 | · 分批补料发酵 | 第71-72
页 | · 脉冲补料发酵 | 第71
页 | · 恒速补料发酵 | 第71
页 | · 恒底物浓度-呼吸熵(RQ)调控策略 | 第71-72
页 | · pH自控-恒底物浓度-RQ调控策略 | 第72
页 | · 实验结果与讨论 | 第72-79
页 | · 分批发酵 | 第72-73
页 | · 分批补料发酵 | 第73-78
页 | · 脉冲补料策略 | 第73-74
页 | · 恒速补料策略 | 第74-75
页 | · 恒底物浓度-RQ调控 | 第75-77
页 | · pH自控-恒底物浓度-RQ调控策略 | 第77-78
页 | · 发酵罐逐级放大实验 | 第78-79
页 | · 本章小结 | 第79-81
页 | 第4章 粘质沙雷氏菌表面活性剂缺失工程菌的构建 | 第81-92
页 | · 引言 | 第81
页 | · 材料和方法 | 第81-86
页 | · 菌株、质粒和引物 | 第81-82
页 | · 实验所用仪器 | 第82
页 | · 试剂 | 第82
页 | · 培养基和抗生素 | 第82
页 | · 粘质沙雷氏菌H30基因组DNA的提取 | 第82
页 | · swrw基因片断的扩增 | 第82-83
页 | · swrw基因片断PCR反应体系 | 第83
页 | · swrw基因片断扩增条件 | 第83
页 | · 质粒DNA的制备 | 第83-84
页 | · swrw基因自杀载体构建 | 第84-85
页 | · 限制性内切酶酶切体系 | 第84
页 | · 连接反应体系 | 第84
页 | · E.coli S17-1λpir感受态细胞制备 | 第84-85
页 | · 连接产物转化 | 第85
页 | · swrw基因突变-双亲本杂交 | 第85
页 | · swrw突变株的鉴定 | 第85-86
页 | · PCR鉴定 | 第85
页 | · swrw突变菌发酵上清液乳化性能测定 | 第85-86
页 | · swrw突变菌发酵上清液泡沫性能测定 | 第86
页 | · swrw突变菌与野生菌发酵比较 | 第86
页 | · swrw突变菌3.7L罐的发酵 | 第86
页 | · 实验结果与讨论 | 第86-91
页 | · swrw基因片断的扩增 | 第86
页 | · 自杀载体pUTKm-swrw的构建 | 第86-88
页 | · swrw突变体的PCR鉴定 | 第88
页 | · swrw突变菌发酵液的乳化性能测定 | 第88
页 | · swrw突变菌发酵液的泡沫性能测定 | 第88-89
页 | · 野生菌和swrw突变株摇瓶发酵比较 | 第89-90
页 | · 突变株3.7L发酵罐实验 | 第90-91
页 | · 本章小结 | 第91-92
页 | 第5章 粘质沙雷氏菌合成2,3-丁二醇相关基因的鉴定 | 第92-106
页 | · 引言 | 第92
页 | · 材料与方法 | 第92-97
页 | · 菌株、质粒和引物 | 第92-93
页 | · 实验所用仪器 | 第93
页 | · 实验所用试剂 | 第93
页 | · 培养基和抗生素 | 第93
页 | · 粘质沙雷氏菌H30基因组DNA提取 | 第93
页 | · 2,3-丁二醇代谢途径相关基因序列的获取 | 第93
页 | · α-乙酰乳酸合成酶基因和α-乙酰乳酸脱羧酶基因序列的获取 | 第93
页 | · 2,3-丁二醇脱氢酶基因的获取 | 第93
页 | · 乙偶姻操纵子的克隆与分析 | 第93-94
页 | · PCR反应体系 | 第94
页 | · PCR扩增条件 | 第94
页 | · 2,3-丁二醇脱氢酶基因的克隆与分析 | 第94-95
页 | · PCR反应体系 | 第94-95
页 | · PCR扩增条件 | 第95
页 | · 2,3-丁二醇代谢途径相关基因的表达 | 第95-97
页 | · 限制性酶切反应,纯化及连接反应 | 第95-96
页 | · 质粒制备 | 第96
页 | · 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第96
页 | · 质粒以及连接产物转化 | 第96
页 | · 诱导表达 | 第96-97
页 | · SDS-PAGE电泳 | 第97
页 | · budA、budB和budC基因的生物信息学分析 | 第97
页 | · 实验结果与讨论 | 第97-104
页 | · 2,3-丁二醇代谢相关基因序列的获取 | 第97-98
页 | · 乙偶姻操纵子的克隆 | 第98
页 | · 乙偶姻操纵子测序结果分析 | 第98-100
页 | · 2,3-丁二醇脱氢酶基因的克隆 | 第100
页 | · 2,3-丁二醇脱氢酶基因序列的分析 | 第100-101
页 | · 2,3-丁二醇代谢途径相关基因的表达 | 第101-103
页 | · budA、budB和budC基因表达载体的构建 | 第101-102
页 | · 重组载体的双酶切验证和测序 | 第102
页 | · budA、budB和budC基因的诱导表达 | 第102-103
页 | · budA、budB和budC基因的生物信息学分析 | 第103-104
页 | · 本章小结 | 第104-106
页 | 第6章 2,3-丁二醇合成调控机制研究 | 第106-125
页 | · 引言 | 第106
页 | · 实验材料与方法 | 第106-112
页 | · 菌株、质粒和引物 | 第106-107
页 | · 实验所用仪器 | 第107
页 | · 实验所用试剂 | 第107
页 | · 培养基和抗生素 | 第107
页 | · 粘质沙雷氏菌H30基因组DNA提取 | 第107
页 | · 调控因子budR突变菌的构建 | 第107-108
页 | · budR基因片断的扩增体系 | 第107-108
页 | · budR基因片断的扩增条件 | 第108
页 | · 限制性内切酶酶切体系 | 第108
页 | · 连接反应体系 | 第108
页 | · E.coli S17-1λpir感受态细胞制备 | 第108
页 | · 连接产物转化 | 第108
页 | · budR基因突变-双亲本杂交 | 第108
页 | · budR突变菌的验证 | 第108-109
页 | · budR缺失对粘质沙雷氏菌生长、产酸和乙偶姻合成的影响 | 第109
页 | · budR缺失对粘质沙雷氏菌生长的影响 | 第109
页 | · budR缺失对粘质沙雷氏菌产酸的影响 | 第109
页 | · budR缺失对粘质沙雷氏菌产乙偶姻的影响 | 第109
页 | · 粘质沙雷氏菌H30中2,3-丁二醇脱氢酶独立存在的验证 | 第109
页 | · 乙偶姻操纵子的启动子分析 | 第109-111
页 | · budR和启动子区域的扩增 | 第109
页 | · 启动子:lacZ融合报告载体的构建 | 第109-111
页 | · budR对启动子区域转录水平的调控 | 第111
页 | · 外部环境对乙偶姻操纵子转录水平的影响 | 第111-112
页 | · 粘质沙雷氏菌电转感受态细胞制备 | 第111
页 | · 电转化方法 | 第111
页 | · pH对乙偶姻操纵子转录水平的影响 | 第111
页 | · 溶氧对乙偶姻操纵子转录水平的影响 | 第111
页 | · 有机酸对乙偶姻操纵子转录水平的影响 | 第111-112
页 | · β-半乳糖苷酶活性测定 | 第112
页 | · 实验结果与讨论 | 第112-123
页 | · budR突变株的构建 | 第112-114
页 | · budR基因片断的扩增 | 第112-113
页 | · 自杀性载体pUTKm-budR的构建 | 第113
页 | · budR基因突变和突变菌的验证 | 第113-114
页 | · budR对粘质沙雷氏菌生长、产酸和乙偶姻合成的影响 | 第114-117
页 | · budR对粘质沙雷氏菌生长的影响 | 第114-116
页 | · budR对粘质沙雷氏菌产酸的影响 | 第116
页 | · budR对粘质沙雷氏菌合成乙偶姻的影响 | 第116-117
页 | · 粘质沙雷氏菌H30中2,3-丁二醇脱氢酶独立存在的验证 | 第117-119
页 | · budR对操纵子中启动子的影响和环境因素对启动子的影响分析 | 第119-123
页 | · budR和budA启动子的扩增 | 第119
页 | · pUC-pbud载体构建 | 第119-120
页 | · lacZ报告载体构建 | 第120
页 | · budR对启动子区域转录水平的调控 | 第120-121
页 | · 外部环境对乙偶姻操纵子转录水平的影响 | 第121-123
页 | · 本章小结 | 第123-125
页 | 第7章 粘质沙雷氏菌中2,3-丁二醇脱氢酶过表达体系构建 | 第125-135
页 | · 引言 | 第125
页 | · 材料与方法 | 第125-129
页 | · 菌株、质粒和引物 | 第125
页 | · 实验所用仪器 | 第125-126
页 | · 实验所用试剂 | 第126
页 | · 培养基和抗生素 | 第126
页 | · 肺炎克雷伯氏菌基因组DNA提取 | 第126
页 | · BDH表达载体的构建 | 第126-127
页 | · PCR扩增BDH基因 | 第126-127
页 | · BDH与pUC-pbud连接 | 第127
页 | · 连接产物转化 | 第127
页 | · 重组质粒的验证和测序 | 第127
页 | · 重组质粒pPbud-BDH电转粘质沙雷氏菌H30 | 第127
页 | · BDH在粘质沙雷氏菌H30中的表达情况 | 第127
页 | · BDH过表达对粘质沙雷氏菌H30发酵产乙偶姻和2,3-丁二醇的影响 | 第127-128
页 | · 2,3-丁二醇脱氢酶活性测定方法 | 第128
页 | · 细胞破碎条件 | 第128
页 | · Bradford法测定蛋白含量 | 第128-129
页 | · 溶液的配制 | 第128
页 | · 检测方法 | 第128-129
页 | · 牛血清蛋白标准曲线 | 第129
页 | · BDH重组菌3.7L发酵罐实验 | 第129
页 | · 实验结果 | 第129-134
页 | · BDH基因的扩增 | 第129-130
页 | · pPbud-BDH载体的构建 | 第130
页 | · BDH在粘质沙雷氏菌H30中的表达情况分析 | 第130-131
页 | · BDH过表达对粘质沙雷氏菌产乙偶姻和2,3-丁二醇的影响 | 第131-133
页 | · 重组菌3.7L发酵罐实验 | 第133-134
页 | · 本章小结 | 第134-135
页 | 第8章 总结与展望 | 第135-138
页 | · 论文总结 | 第135-136
页 | · 展望 | 第136-138
页 | 参考文献 | 第138-150
页 | 致谢 | 第150-151
页 | 博士期间发表的论文与专利 | 第151-152
页 | 附录 英文缩写 | 第152
页 |
|
|
|