论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
页 |
| Abstract | 第7-13
页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24
页 |
| · 海水养殖业与鱼类疾病 | 第13
页 |
| · 鱼类免疫组织 | 第13-14
页 |
| · 鱼类抵御细菌的免疫因子 | 第14-21
页 |
| · 微生物生长抑制物 | 第14-15
页 |
| · 蛋白酶抑制因子 | 第15
页 |
| · 凝集素和沉淀素 | 第15
页 |
| · 细胞溶素 | 第15-16
页 |
| · 补体 | 第16-20
页 |
| · 抗体 | 第20-21
页 |
| · 鱼类对鳗弧菌的免疫防御机制 | 第21
页 |
| · 鱼类的分子免疫学 | 第21-22
页 |
| · 本研究的目的和意义 | 第22-24
页 |
| 第2章 抑制性差减杂交文库的构建 | 第24-39
页 |
| · 前言 | 第24
页 |
| · 实验材料 | 第24-25
页 |
| · 菌株、样品、主要试剂及服务 | 第24-25
页 |
| · 主要仪器设备与分析软件 | 第25
页 |
| · 实验方法 | 第25-30
页 |
| · 细菌注射及组织取样 | 第25
页 |
| · RNA的提取 | 第25-26
页 |
| · 免疫组和对照组mRNA的纯化 | 第26
页 |
| · 差减cDNA文库的构建 | 第26
页 |
| · 驱动子和检测子cDNA的制备 | 第26-28
页 |
| · 差减杂交 | 第28
页 |
| · 巢式PCR扩增 | 第28
页 |
| · 差减cDNA质粒文库的构建 | 第28-29
页 |
| · 斑点杂交筛选阳性克隆 | 第29-30
页 |
| · 测序以及序列分析 | 第30
页 |
| · 荧光定量PCR检验差异表达的基因 | 第30
页 |
| · 实验结果 | 第30-36
页 |
| · 组织总RNA的提取 | 第30-31
页 |
| · 差减cDNA文库的构建 | 第31-32
页 |
| · 差异cDNA片段的PCR筛选鉴定 | 第32-33
页 |
| · 斑点杂交筛选差异表达的片段 | 第33
页 |
| · 差异cDNA片段的序列分析 | 第33
页 |
| · 差异表达基因的荧光定量PCR验证 | 第33-36
页 |
| · 讨论 | 第36-38
页 |
| · 小结 | 第38-39
页 |
| 第3章 两个补体Bf/C2的分子克隆及特征分析 | 第39-55
页 |
| · 前言 | 第39
页 |
| · 实验材料 | 第39-40
页 |
| · 主要试剂及服务 | 第39
页 |
| · 主要仪器设备及分析软件 | 第39-40
页 |
| · 实验方法 | 第40-43
页 |
| · LycBf/C2A及LycBf/C2B全长cDNA的克隆 | 第40-42
页 |
| · LycBf/C2A和LycBf/C2B的序列分析 | 第42
页 |
| · LycBf/C2A及LycBf/C2B的三维结构模拟 | 第42-43
页 |
| · 实验结果 | 第43-51
页 |
| · LycBf/C2A和LycBf/C2B全长cDNA的克隆 | 第43
页 |
| · LycBf/C2A和LycBf/C2B的同源性分析 | 第43
页 |
| · LycBf/C2A及LycBf/C2B的3D模拟结构分析 | 第43-51
页 |
| · 讨论 | 第51-53
页 |
| · 小结 | 第53-55
页 |
| 第4章 LycBf/C2A和LycBf/C2B转录水平的表达分析 | 第55-61
页 |
| · 前言 | 第55
页 |
| · 实验材料 | 第55
页 |
| · 实验方法 | 第55-57
页 |
| · RNA的提取 | 第55
页 |
| · RNA的逆转录 | 第55-56
页 |
| · 大黄鱼不同组织LycBf/C2A及LycBf/C2B基因的分布 | 第56-57
页 |
| · 实验结果 | 第57-59
页 |
| · 大黄鱼不同组织中LycBf/C2A和LycBf/C2B的分布 | 第57
页 |
| · 免疫前后大黄鱼中LycBf/C2A和LycBf/C2B的表达差异分析 | 第57-59
页 |
| · 讨论 | 第59
页 |
| · 小结 | 第59-61
页 |
| 第5章 补体C1抑制因子的基因克隆及粘附功能研究 | 第61-78
页 |
| · 前言 | 第61
页 |
| · 实验材料 | 第61-62
页 |
| · 菌株及质粒 | 第61
页 |
| · 主要试剂、仪器和生物软件 | 第61-62
页 |
| · 实验方法 | 第62-68
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子全长cDNA的克隆 | 第62
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子的序列分析及进化树绘制 | 第62
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的3D模拟结构分析 | 第62-63
页 |
| · 表达载体pGEX-4T-lycC1INH的构建 | 第63-64
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子片段在Rossta gami中的诱导表达 | 第64-65
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子片段在大肠杆菌中的表达分析 | 第65-66
页 |
| · 兔抗大黄鱼补体C1抑制因子多克隆抗体的特异性的分析 | 第66
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白的表达 | 第66-67
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白同鳗弧菌的粘附实验 | 第67-68
页 |
| · 结果 | 第68-75
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子全长cDNA克隆和序列分析 | 第68
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子的序列比对和进化树分析 | 第68
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域的3D模拟结构分析 | 第68
页 |
| · 表达菌株pGEX-4T-lycC1INH/Rosetta的构建 | 第68-71
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子部分编码产物的表达及多克隆抗体的制备 | 第71-74
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子全长蛋白的细菌粘附能力研究 | 第74-75
页 |
| · 讨论 | 第75-77
页 |
| · 小结 | 第77-78
页 |
| 第6章 补体C1抑制因子转录和翻译水平的表达分析 | 第78-85
页 |
| · 前言 | 第78
页 |
| · 实验材料 | 第78
页 |
| · 实验方法 | 第78-81
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子探针的制备 | 第78-79
页 |
| · 原位杂交 | 第79-80
页 |
| · 大黄鱼组织蛋白的提取 | 第80
页 |
| · Bradford法测定蛋白浓度 | 第80
页 |
| · 大黄鱼补体C1抑制因子的组织表达分布及免疫前后的表达差异 | 第80-81
页 |
| · 实验结果 | 第81-82
页 |
| · 大黄鱼各组织样品蛋白浓度的测定 | 第81-82
页 |
| · 大黄鱼不同组织中补体C1抑制因子蛋白的表达分析 | 第82
页 |
| · 免疫前后大黄鱼补体C1抑制因子转录水平的表达变化分析 | 第82
页 |
| · 免疫前后大黄鱼补体C1抑制因子翻译水平的表达变化分析 | 第82
页 |
| · 讨论 | 第82-84
页 |
| · 小结 | 第84-85
页 |
| 第7章 大黄鱼凝血酶原类似基因的克隆及其表达分析 | 第85-91
页 |
| · 前言 | 第85
页 |
| · 实验材料 | 第85
页 |
| · 实验方法 | 第85-86
页 |
| · 5’末端及3’末端RACE PCR | 第85-86
页 |
| · 序列分析 | 第86
页 |
| · RT-PCR检验基因表达的差异性 | 第86
页 |
| · 结果 | 第86-87
页 |
| · 大黄鱼凝血酶原类似基因cDNA的克隆 | 第86
页 |
| · 大黄鱼凝血酶原类似蛋白氨基酸序列同源性分析 | 第86
页 |
| · 大黄鱼凝血酶原类似基因的表达差异分析 | 第86-87
页 |
| · 讨论 | 第87-90
页 |
| · 小结 | 第90-91
页 |
| 第8章 结论和创新点 | 第91-93
页 |
| · 主要结论 | 第91-92
页 |
| · 论文创新点 | 第92
页 |
| · 展望 | 第92-93
页 |
| 参考文献 | 第93-106
页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第106-107
页 |
| 致谢 | 第107-108
页 |
