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宿主感受肠道屏障损伤通过E-cadherin-YAP信号通路防御病原菌侵染的分子机制

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宿主感受肠道屏障损伤通过E-cadherin-YAP信号通路防御病原菌侵染的分子机制
论文目录
 
中文摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一章 绪论第11-21页
1 哺乳动物肠道屏障第11-14页
  1.1 哺乳动物顶端连接复合体的构成第12页
  1.2 上皮屏障的调节第12-13页
  1.3 肠道屏障障碍相关的疾病第13-14页
2 肠道上皮细胞对天然免疫和适应性免疫的调节第14-15页
3 线虫肠道屏障第15-17页
  3.1 cadherin-catenin复合体(CCC)第15-16页
  3.2 DLG-1/AJM-1复合体(DAC)第16-17页
4 Hippo信号通路第17-21页
  4.1 Hippo信号通路的演化第17-18页
  4.2 Hippo信号通路的调控关系第18-20页
  4.3 Hippo信号通路与免疫的关系第20-21页
第二章 肠道屏障损伤激活YAP抵抗病原菌的侵染第21-72页
1 前言第21-22页
2 实验方法与材料第22-48页
  2.1 实验方法第22-41页
    2.1.1 细菌的培养、活化与冻存第22-23页
    2.1.2 秀丽隐杆线虫的培养第23页
    2.1.3 秀丽隐杆线虫的冻存与复苏第23-24页
      2.1.3.1 秀丽隐杆线虫的冻存第23-24页
      2.1.3.2 秀丽隐杆线虫的复苏第24页
    2.1.4 秀丽隐杆线虫的同步化第24-25页
    2.1.5 秀丽隐杆线虫的RNAi干扰第25页
    2.1.6 秀丽隐杆线虫的生测分析第25-26页
    2.1.7 秀丽隐杆线虫和小鼠肠道屏障损伤分析第26-27页
      2.1.7.1 秀丽隐杆线虫屏障损伤分析第26-27页
      2.1.7.2 小鼠肠道屏障损伤分析第27页
    2.1.8 YAP-1::GFP核定位分析第27页
    2.1.9 线虫RNA-Seq信息学分析第27-28页
    2.1.10 CATTCCDNA序列启动子富集分析第28页
    2.1.11 病原菌累积检测第28-30页
      2.1.11.1 线虫肠道中GFP标记的病原菌累积检测第28-29页
      2.1.11.2 线虫肠道中CFU检测病原菌的累积第29页
      2.1.11.3 小鼠组织中CFU检测病原菌的累积第29-30页
    2.1.12 hmp-1RNAi干扰株的构建第30-31页
      2.1.12.1 hmp-1RNAi干扰质粒的提取第30页
      2.1.12.2 hmp-1RNAi干扰质粒的HT115转化第30-31页
    2.1.13 mRNA的实时荧光定量PCR的检测第31-33页
      2.1.13.1 总RNA的提取第31-32页
      2.1.13.2 cDNA第一链的合成第32页
      2.1.13.3 ABI7000的实时荧光定量PCR的检测第32-33页
    2.1.14 yap-1p::yap-1::gfp线虫的显微注射第33-35页
    2.1.15 荧光显微镜的观察第35页
    2.1.16 蛋白的提取与浓度的测定第35-36页
    2.1.17 蛋白的Westernblot检测第36-37页
    2.1.18 免疫共沉淀第37页
    2.1.19 免疫荧光第37-38页
    2.1.20 小鼠的培养第38页
    2.1.21 小鼠的病原菌感染第38页
    2.1.22 小鼠的Verteporfinc处理第38-39页
    2.1.23 Caco2单层肠上皮的培养第39页
    2.1.24 细胞的基因沉默第39页
    2.1.25 Caco2单层肠上皮的病原菌感染第39-40页
    2.1.26 腺相关病毒介导的CRISPR/Cas9质粒的构建第40页
      2.1.26.1 YapsgRNA的设计第40页
      2.1.26.2 CRISPR/Cas9穿梭质粒的构建第40页
    2.1.27 腺相关病毒的生产第40-41页
    2.1.28 YapshRNA腺病毒的生产第41页
    2.1.29 病毒的注射第41页
    2.1.30 统计分析第41页
  2.2 实验材料第41-48页
    2.2.1 抗体列表第41-43页
    2.2.2 线虫株列表第43-44页
    2.2.3 实验菌株第44页
    2.2.4 实验仪器第44-46页
    2.2.5 试剂盒第46页
    2.2.6 实验试剂第46-48页
3 实验结果第48-70页
  3.1 病原菌侵染导致秀丽隐杆线虫肠道屏障损伤第48-51页
  3.2 秀丽隐杆线虫中肠道屏障损伤激活YAP第51-56页
  3.3 秀丽隐杆线虫中YAP-1-EGL-44复合体参与抵抗病原菌的侵染第56-59页
  3.4 病原菌侵染通过破坏线虫的cadherin-catenin复合体进而激活YAP第59-62页
  3.5 在哺乳动物中病原菌通过降低E-cadherin的蛋白水平激活YAP第62-65页
  3.6 在哺乳动物中YAP参与抵抗病原菌的感染第65-70页
4 本章小结第70-72页
第三章 肠道屏障损伤所介导的YAP激活受PP2A的调节第72-88页
1 前言第72-73页
2 实验方法与材料第73-78页
  2.1 实验方法第73-75页
    2.1.1 腺相关病毒介导的CRISPR/Cas9质粒的构建第73页
      2.1.1.1 PP2AcsgRNA的设计第73页
      2.1.1.2 CRISPR/Cas9穿梭质粒的构建第73页
    2.1.2 PP2Ac-Cas9腺相关病毒的生产第73页
    2.1.3 PP2Ac-Cas9腺相关病毒的注射第73-74页
    2.1.4 细菌的培养、活化与冻存第74页
    2.1.5 秀丽隐杆线虫的培养第74页
    2.1.6 秀丽隐杆线虫的RNAi干扰第74-75页
    2.1.17 Westernblot检测第75页
    2.1.18 免疫荧光第75页
    2.1.19 PP2Ac的基因沉默第75页
  2.2 实验材料第75-78页
    2.2.1 抗体列表第75-76页
    2.2.2 线虫株列表第76-77页
    2.2.3 实验菌株第77页
    2.2.4 实验仪器第77页
    2.2.5 试剂盒第77页
    2.2.6 实验试剂第77-78页
3 实验结果第78-87页
  3.1 病原菌侵染并不失活WTS-1/LAST1第78-80页
  3.2 PP2A调节铜绿假单胞菌侵染后YAP-1的激活第80-83页
  3.3 小鼠结肠中PP2Ac调节病原菌感染介导的YAP-1的激活第83-84页
  3.4 小鼠中PP2Ac参与抵抗病原菌的感染第84-87页
4 本章小结第87-88页
第四章 全文总结与讨论第88-92页
附录第92-132页
附表第92-127页
附图第127-132页
参考文献第132-149页
致谢第149-151页
博士期间已发表的学术论文及获得的荣誉第151-152页

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