论文目录 | |
中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
第一章 绪论 | 第11-21页 |
1 哺乳动物肠道屏障 | 第11-14页 |
1.1 哺乳动物顶端连接复合体的构成 | 第12页 |
1.2 上皮屏障的调节 | 第12-13页 |
1.3 肠道屏障障碍相关的疾病 | 第13-14页 |
2 肠道上皮细胞对天然免疫和适应性免疫的调节 | 第14-15页 |
3 线虫肠道屏障 | 第15-17页 |
3.1 cadherin-catenin复合体(CCC) | 第15-16页 |
3.2 DLG-1/AJM-1复合体(DAC) | 第16-17页 |
4 Hippo信号通路 | 第17-21页 |
4.1 Hippo信号通路的演化 | 第17-18页 |
4.2 Hippo信号通路的调控关系 | 第18-20页 |
4.3 Hippo信号通路与免疫的关系 | 第20-21页 |
第二章 肠道屏障损伤激活YAP抵抗病原菌的侵染 | 第21-72页 |
1 前言 | 第21-22页 |
2 实验方法与材料 | 第22-48页 |
2.1 实验方法 | 第22-41页 |
2.1.1 细菌的培养、活化与冻存 | 第22-23页 |
2.1.2 秀丽隐杆线虫的培养 | 第23页 |
2.1.3 秀丽隐杆线虫的冻存与复苏 | 第23-24页 |
2.1.3.1 秀丽隐杆线虫的冻存 | 第23-24页 |
2.1.3.2 秀丽隐杆线虫的复苏 | 第24页 |
2.1.4 秀丽隐杆线虫的同步化 | 第24-25页 |
2.1.5 秀丽隐杆线虫的RNAi干扰 | 第25页 |
2.1.6 秀丽隐杆线虫的生测分析 | 第25-26页 |
2.1.7 秀丽隐杆线虫和小鼠肠道屏障损伤分析 | 第26-27页 |
2.1.7.1 秀丽隐杆线虫屏障损伤分析 | 第26-27页 |
2.1.7.2 小鼠肠道屏障损伤分析 | 第27页 |
2.1.8 YAP-1::GFP核定位分析 | 第27页 |
2.1.9 线虫RNA-Seq信息学分析 | 第27-28页 |
2.1.10 CATTCCDNA序列启动子富集分析 | 第28页 |
2.1.11 病原菌累积检测 | 第28-30页 |
2.1.11.1 线虫肠道中GFP标记的病原菌累积检测 | 第28-29页 |
2.1.11.2 线虫肠道中CFU检测病原菌的累积 | 第29页 |
2.1.11.3 小鼠组织中CFU检测病原菌的累积 | 第29-30页 |
2.1.12 hmp-1RNAi干扰株的构建 | 第30-31页 |
2.1.12.1 hmp-1RNAi干扰质粒的提取 | 第30页 |
2.1.12.2 hmp-1RNAi干扰质粒的HT115转化 | 第30-31页 |
2.1.13 mRNA的实时荧光定量PCR的检测 | 第31-33页 |
2.1.13.1 总RNA的提取 | 第31-32页 |
2.1.13.2 cDNA第一链的合成 | 第32页 |
2.1.13.3 ABI7000的实时荧光定量PCR的检测 | 第32-33页 |
2.1.14 yap-1p::yap-1::gfp线虫的显微注射 | 第33-35页 |
2.1.15 荧光显微镜的观察 | 第35页 |
2.1.16 蛋白的提取与浓度的测定 | 第35-36页 |
2.1.17 蛋白的Westernblot检测 | 第36-37页 |
2.1.18 免疫共沉淀 | 第37页 |
2.1.19 免疫荧光 | 第37-38页 |
2.1.20 小鼠的培养 | 第38页 |
2.1.21 小鼠的病原菌感染 | 第38页 |
2.1.22 小鼠的Verteporfinc处理 | 第38-39页 |
2.1.23 Caco2单层肠上皮的培养 | 第39页 |
2.1.24 细胞的基因沉默 | 第39页 |
2.1.25 Caco2单层肠上皮的病原菌感染 | 第39-40页 |
2.1.26 腺相关病毒介导的CRISPR/Cas9质粒的构建 | 第40页 |
2.1.26.1 YapsgRNA的设计 | 第40页 |
2.1.26.2 CRISPR/Cas9穿梭质粒的构建 | 第40页 |
2.1.27 腺相关病毒的生产 | 第40-41页 |
2.1.28 YapshRNA腺病毒的生产 | 第41页 |
2.1.29 病毒的注射 | 第41页 |
2.1.30 统计分析 | 第41页 |
2.2 实验材料 | 第41-48页 |
2.2.1 抗体列表 | 第41-43页 |
2.2.2 线虫株列表 | 第43-44页 |
2.2.3 实验菌株 | 第44页 |
2.2.4 实验仪器 | 第44-46页 |
2.2.5 试剂盒 | 第46页 |
2.2.6 实验试剂 | 第46-48页 |
3 实验结果 | 第48-70页 |
3.1 病原菌侵染导致秀丽隐杆线虫肠道屏障损伤 | 第48-51页 |
3.2 秀丽隐杆线虫中肠道屏障损伤激活YAP | 第51-56页 |
3.3 秀丽隐杆线虫中YAP-1-EGL-44复合体参与抵抗病原菌的侵染 | 第56-59页 |
3.4 病原菌侵染通过破坏线虫的cadherin-catenin复合体进而激活YAP | 第59-62页 |
3.5 在哺乳动物中病原菌通过降低E-cadherin的蛋白水平激活YAP | 第62-65页 |
3.6 在哺乳动物中YAP参与抵抗病原菌的感染 | 第65-70页 |
4 本章小结 | 第70-72页 |
第三章 肠道屏障损伤所介导的YAP激活受PP2A的调节 | 第72-88页 |
1 前言 | 第72-73页 |
2 实验方法与材料 | 第73-78页 |
2.1 实验方法 | 第73-75页 |
2.1.1 腺相关病毒介导的CRISPR/Cas9质粒的构建 | 第73页 |
2.1.1.1 PP2AcsgRNA的设计 | 第73页 |
2.1.1.2 CRISPR/Cas9穿梭质粒的构建 | 第73页 |
2.1.2 PP2Ac-Cas9腺相关病毒的生产 | 第73页 |
2.1.3 PP2Ac-Cas9腺相关病毒的注射 | 第73-74页 |
2.1.4 细菌的培养、活化与冻存 | 第74页 |
2.1.5 秀丽隐杆线虫的培养 | 第74页 |
2.1.6 秀丽隐杆线虫的RNAi干扰 | 第74-75页 |
2.1.17 Westernblot检测 | 第75页 |
2.1.18 免疫荧光 | 第75页 |
2.1.19 PP2Ac的基因沉默 | 第75页 |
2.2 实验材料 | 第75-78页 |
2.2.1 抗体列表 | 第75-76页 |
2.2.2 线虫株列表 | 第76-77页 |
2.2.3 实验菌株 | 第77页 |
2.2.4 实验仪器 | 第77页 |
2.2.5 试剂盒 | 第77页 |
2.2.6 实验试剂 | 第77-78页 |
3 实验结果 | 第78-87页 |
3.1 病原菌侵染并不失活WTS-1/LAST1 | 第78-80页 |
3.2 PP2A调节铜绿假单胞菌侵染后YAP-1的激活 | 第80-83页 |
3.3 小鼠结肠中PP2Ac调节病原菌感染介导的YAP-1的激活 | 第83-84页 |
3.4 小鼠中PP2Ac参与抵抗病原菌的感染 | 第84-87页 |
4 本章小结 | 第87-88页 |
第四章 全文总结与讨论 | 第88-92页 |
附录 | 第92-132页 |
附表 | 第92-127页 |
附图 | 第127-132页 |
参考文献 | 第132-149页 |
致谢 | 第149-151页 |
博士期间已发表的学术论文及获得的荣誉 | 第151-152页 |