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猪腮腺分泌蛋白表达特性及表达调控元件的研究

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猪腮腺分泌蛋白表达特性及表达调控元件的研究
论文目录
 
摘要第1-6 页
ABSTRACT第6-11 页
缩略词语表第11-12 页
第一章 文献综述第12-41 页
  第一节 腮腺分泌蛋白的相关研究第12-23 页
    ·唾液腺的组织结构第12 页
    ·唾液的成分及功能第12-13 页
    ·在唾液腺开展的相关研究第13-17 页
      · 癌症研究第13-14 页
      · 唾液腺介导的基因治疗第14-15 页
      · 免疫方面第15 页
      · 唾液生物反应器的研究第15-16 页
      · 生物制药及疾病防治第16-17 页
    ·腮腺分泌蛋白的研究进展第17-23 页
      · 各物种PSP基因的发现第17-20 页
      · PSP与其它蛋白的关系第20 页
      · 影响腮腺分泌蛋白表达的因素第20-21 页
      · 腮腺分泌蛋白的表达调控第21-23 页
  第二节 真核基因转录调控元件研究的策略与方法第23-29 页
    1 基因调控分析的首要步骤第23-24 页
    2 转录起始位点的定位第24-26 页
      · 引物延伸第24-25 页
      · Rnase保护第25 页
      · S1核酸酶分析第25 页
      · cDNA末端的快速扩增(RACE)第25-26 页
    3 启动子的功能性分析第26-27 页
      · 瞬时转染分析法第26 页
      · 稳定转染分析第26-27 页
      · 其它方法第27 页
    4 常用的报告基因第27-29 页
  第三节 Q-PCR技术的原理及应用第29-41 页
    ·实时荧光定量PCR技术的原理简介第29-36 页
      · 实时荧光定量PCR技术的相关参数第30 页
      · 荧光定量PCR的探针标记技术第30-33 页
      · 实时荧光定量PCR技术的参照物第33-34 页
      · 绝对定量和相对定量第34-35 页
      · 荧光PCR的特点第35-36 页
    ·荧光定量PCR的应用第36-41 页
      · 基因表达的研究第36 页
      · 免疫组份分析第36-37 页
      · 基因突变及其多态性第37 页
      · 肿瘤研究第37-38 页
      · 病原体测定第38-39 页
      · 单基因病的诊断第39 页
      · 法医学应用第39 页
      · 转基因植物产品检测第39-40 页
      · 发展趋势及应用前景第40-41 页
第二章 腮腺生后发育中PSP及A-AMY的表达第41-87 页
  第一节 材料与方法第41-56 页
    1 试验材料第41-44 页
      · 实验动物第41 页
      · 主要仪器第41-42 页
      · 实验用酶第42 页
      · 其它药品及试剂第42 页
      · 试剂的配制第42-44 页
    2 实验方法第44-56 页
      · 组织样的采集第44 页
      · 总RNA的提取第44-45 页
      · 引物设计第45-46 页
      · RT-PCR检测第46-48 页
      · 定量PCR分析第48 页
      · Northern杂交第48-51 页
      · 兔抗猪PSP抗血清的制备第51-52 页
      · 酶联免疫吸附实验(ELISA)测定抗体效价第52-53 页
      · 腮腺组织总蛋白的提取及定量第53-54 页
      · PAGE胶的制备电泳及考马氏亮蓝染色第54-56 页
  第二节 结果与分析第56-84 页
    1 猪腮腺生后发育中PSP与AMY的表达第56-73 页
      · 总RNA的提取第56-57 页
      · RT-PCR检测PSP、AMY的表达第57-60 页
      · 荧光定量PCR检测PSP、AMY的表达第60-65 页
      · Northern blot检测mRNA丰度第65-67 页
      · PSP抗原决定簇分析及抗体效价检测第67-69 页
      · WESTERN BLOT检测猪PSP及AMY的表第69-71 页
      · SDS-PAGE蛋白表达量的分析第71-73 页
    2 小鼠腮腺生后发育中PSP与AMY的表达第73-83 页
      · 总RNA的提取第73 页
      · RT-PCR检测基因表达量第73-75 页
      · 荧光定量PCR检测PSP及AMY的表达第75-77 页
      · Northern blot检测mRNA丰度第77-79 页
      · Western blot第79-81 页
      · SDS-PAGE蛋白表达量的分析第81-83 页
    3 猪与小鼠PSP、AMY表达情况比较第83-84 页
  第三节 小结与讨论第84-87 页
第三章 猪PSP转录起始点定位及启动子定位载体构建第87-117 页
  第一节 材料与方法第87-102 页
    1 试验材料第87-90 页
      · 实验动物第87 页
      · 菌株,细胞系和载体第87 页
      · 主要仪器第87-88 页
      · 药品及试剂第88 页
      · 试剂的配制第88-90 页
    2 实验方法第90-102 页
      · 5’RACE程序第91-93 页
      · pMD-T18载体的连接反应第93 页
      · 感受态细胞的制备、效价的测定及质粒DNA的转化第93-95 页
      · 重组质粒的快速鉴定Cracking法第95 页
      · 质粒DNA或粘粒DNA的小量制备第95-96 页
      · 质粒DNA或粘粒DNA的大量制备及纯化(碱裂解法)第96-97 页
      · BAC的提取方法(醋酸钾法)第97-99 页
      · 外源片段的回收第99 页
      · 载体改造接头的设计及预处理第99 页
      · 猪PSP基因启动子片段扩增引物第99-100 页
      · 组织样的采集第100 页
      · 腮腺组织的培养第100 页
      · 脂质体转染法导入外源基因第100-102 页
  第二节 结果与分析第102-115 页
    ·PSP转录起始位点的定位第102-104 页
      · 总RNA的提取第102 页
      · 5′RACE确定猪PSP基因转录起始位点第102-104 页
    ·启动子定位载体的构建第104-111 页
      · 质粒pEGFP-N1的改造第104-105 页
      · PSP启动子的预测第105-107 页
      · 启动子定位载体的构建第107-111 页
    3 猪原代细胞的培养及转染条件的确定第111-115 页
      · 猪腮腺原代细胞的培养第111-112 页
      · 细胞转染条件的确定第112-115 页
  第三节 小结与讨论第115-117 页
    1 关于5′RACE第115-116 页
    2 关于Inr元件与TATA box的比较第116 页
    3 关于载体的构建第116-117 页
第四章 结论第117-118 页
主要参考文献第118-128 页
个人简历第128-129 页
致谢第129页

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