论文目录 | |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 缩略语说明 | 第18-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-41页 |
| 第一节 程序性细胞死亡 | 第20-32页 |
| 一、细胞凋亡 | 第20-25页 |
| · 细胞凋亡的概念 | 第20页 |
| · 细胞凋亡的形态学及生化学改变 | 第20-21页 |
| · 细胞凋亡调控途径及其相关信号转导通路 | 第21-25页 |
| · caspase蛋白酶相关凋亡信号通路 | 第21-22页 |
| · 线粒体途径相关凋亡信号通路 | 第22-23页 |
| · ERK1/2介导的凋亡信号通路 | 第23页 |
| · p53介导的凋亡信号通路 | 第23-24页 |
| · NO与细胞凋亡 | 第24-25页 |
| 二、细胞自噬 | 第25-29页 |
| · 自噬分类 | 第25-26页 |
| · 自噬的主要调控因素 | 第26-29页 |
| · 自噬的过程 | 第26-27页 |
| · 自噬过程的信号调控 | 第27-29页 |
| · mTOR信号途径 | 第27页 |
| · MAP1-LC3 | 第27页 |
| · 磷脂酰肌醇三磷酸激酶PI3K | 第27-28页 |
| · 其他 | 第28-29页 |
| 三、程序性细胞坏死 | 第29-31页 |
| · 程序性坏死的概念 | 第29页 |
| · 程序性坏死的意义 | 第29-30页 |
| · 程序性坏死的主要调控因素 | 第30-31页 |
| · 程序性坏死的起始 | 第30页 |
| · 程序性坏死过程的信号调控 | 第30-31页 |
| · RIP1 | 第30-31页 |
| · RIP3 | 第31页 |
| 四、程序性坏死与凋亡、自噬的关系 | 第31-32页 |
| 第二节 抗肿瘤药物研究进展 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-41页 |
| 第二章 TNFα诱导小鼠成纤维肉瘤L929细胞死亡的机制研究 | 第41-106页 |
| 第一节 TNFα的研究进展 | 第41-45页 |
| 一、TNFα的来源及其抗肿瘤作用概述 | 第41-42页 |
| 二、TNFα受体的信号转导途径 | 第42-44页 |
| 三、TNFα的生物学检测方法 | 第44-45页 |
| 第二节 TNFα诱导L929细胞程序性坏死 | 第45-68页 |
| 一、实验材料 | 第45-46页 |
| · 细胞 | 第45页 |
| · 药品及试剂 | 第45-46页 |
| · 仪器 | 第46页 |
| 二、实验方法 | 第46-53页 |
| · TNFα的精制及定量 | 第46-47页 |
| · 细胞生长抑制测定 | 第47页 |
| · 细胞形态学观察 | 第47页 |
| · AO/EB染色观察细胞核损伤 | 第47页 |
| · 电镜观察细胞形态 | 第47页 |
| · 流式细胞仪检测细胞死亡率 | 第47-48页 |
| · siRNA转染 | 第48页 |
| · 免疫印迹法(Western blot analysis) | 第48-53页 |
| · 统计学分析 | 第53页 |
| 三、实验结果 | 第53-66页 |
| · 人重组TNFα的精制及定量 | 第53-54页 |
| · TNFα精制过程中各蛋白质的确认 | 第53-54页 |
| · TNFα浓度的确定 | 第54页 |
| · TNFα在体外对L929细胞的生长抑制作用 | 第54页 |
| · polymyxin B(PB)对TNFα诱导L929细胞死亡的影响 | 第54-55页 |
| · TNFα诱导L929细胞程序性坏死 | 第55-57页 |
| · caspase-8凋亡信号通路未参与TNFα诱导的L929细胞程序性坏死 | 第57页 |
| · ERK,JNK和p38在TNFα诱导的L929细胞程序性坏死中的作用 | 第57-59页 |
| · 抑制p38活性促进TNFα诱导的L929细胞程序性坏死 | 第59-60页 |
| · NF-κB在TNFα诱导的L929细胞程序性坏死中的作用 | 第60-62页 |
| · p38介导NF-κB的活化 | 第62页 |
| · zVAD进一步下调p38,NF-κB的蛋白表达,从而增强THFα诱导的程序性坏死 | 第62-66页 |
| 四、讨论 | 第66-67页 |
| 五、小结 | 第67-68页 |
| 第三节 TNFα诱导L929细胞自噬对抗程序性坏死需要caspase-6的激活 | 第68-86页 |
| 一、实验材料 | 第68-69页 |
| · 细胞 | 第68页 |
| · 药品及试剂 | 第68页 |
| · 仪器 | 第68-69页 |
| 二、实验方法 | 第69-70页 |
| · 荧光显微镜和流式细胞仪分析MDC荧光染色 | 第69页 |
| · GFP-LC3转染 | 第69页 |
| · caspase-6(p20)活力检测 | 第69页 |
| · 免疫印迹法(Western blot analysis) | 第69-70页 |
| · 其他方法 | 第70页 |
| · 统计学分析 | 第70页 |
| 三、实验结果 | 第70-84页 |
| · TNFα诱导L929细胞自噬 | 第70-73页 |
| · 抑制p38和NF-κB促进TNFα诱导的自噬 | 第73-74页 |
| · 在TNFα诱导的L929细胞死亡中,抑制程序性坏死抑制自噬,抑制自噬增强程序性坏死 | 第74-77页 |
| · 在TNFα+zVAD诱导的L929细胞死亡中,抑制程序性坏死抑制自噬,抑制自噬却并不影响程序性坏死 | 第77-79页 |
| · 自噬负调控程序性坏死需要caspase-6的激活 | 第79-83页 |
| · 自噬不影响高剂量zVAD诱导的程序性坏死 | 第83-84页 |
| 四、讨论 | 第84-85页 |
| 五、小结 | 第85-86页 |
| 第四节 TNFα诱导的线粒体损伤参与调控RIP1依赖的程序性坏死和自噬 | 第86-99页 |
| 一、实验材料 | 第86页 |
| · 细胞 | 第86页 |
| · 药品及试剂 | 第86页 |
| · 仪器 | 第86页 |
| 二、实验方法 | 第86-88页 |
| · 细胞内ROS含量测定 | 第86-87页 |
| · 线粒体呼吸损伤及线粒体超氧阴离子的检测 | 第87页 |
| · 线粒体膜电位观察 | 第87页 |
| · 免疫印迹法(Western blot analysis) | 第87-88页 |
| · 其他方法 | 第88页 |
| · 统计学分析 | 第88页 |
| 三、实验结果 | 第88-97页 |
| · TNFα诱导活性氧的产生以及线粒体损伤 | 第88-90页 |
| · 线粒体损伤诱导ROS产生促进TNFα诱导的L929细胞程序性坏死和自噬 | 第90-92页 |
| · RIP1的激活导致TNFα诱导的线粒体损伤以及ROS产生 | 第92-95页 |
| · TNFα诱导cytochrome c的释放,却并不引起线粒体膜电位的丧失 | 第95-97页 |
| 四、讨论 | 第97-98页 |
| 五、小结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-106页 |
| 第三章 冬凌草甲素诱导小鼠成纤维肉瘤L929细胞死亡的机制研究 | 第106-127页 |
| 第一节 冬凌草甲素的研究进展 | 第106-108页 |
| 一、概述 | 第106页 |
| 二、冬凌草甲素的抗肿瘤作用 | 第106-108页 |
| 第二节 NO-ERK-p53信号通路参与冬凌草甲素诱导的L929细胞凋亡和自噬 | 第108-124页 |
| 一、实验材料 | 第108-109页 |
| · 细胞 | 第108页 |
| · 药品及试剂 | 第108页 |
| · 仪器 | 第108-109页 |
| 二、实验方法 | 第109-110页 |
| · 细胞培养 | 第109页 |
| · 细胞生长抑制测定 | 第109页 |
| · 用流式细胞仪检测SubG_1凋亡峰 | 第109页 |
| · 细胞内NO含量测定 | 第109-110页 |
| · 其他方法 | 第110页 |
| · 统计学分析 | 第110页 |
| 三、实验结果 | 第110-122页 |
| · 冬凌草甲素诱导L929细胞凋亡 | 第110-112页 |
| · 冬凌草甲素诱导L929细胞自噬 | 第112-114页 |
| · 冬凌草甲素诱导NO的产生 | 第114-115页 |
| · 冬凌草甲素诱导的NO介导凋亡以及保护性自噬的发生 | 第115-118页 |
| · ERK-p53参与调控冬凌草甲素诱导的凋亡和自噬 | 第118-121页 |
| · NO激活ERK-p53,ERK-p53的活化正调控NO的产生 | 第121-122页 |
| 四、讨论 | 第122-123页 |
| 五、小结 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附录 | 第128-131页 |
| 附件 | 第131-140
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