论文目录 | |
摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-7页 |
缩略词和符号 | 第8-14页 |
第一章 前言 | 第14-42页 |
1. 引言 | 第14-15页 |
2. 真菌杂萜的生物合成 | 第15-35页 |
2.1 聚酮杂萜的生物合成 | 第16-30页 |
2.2 吲哚杂萜的生物合成 | 第30-32页 |
2.3 其他真菌杂萜的生物合成 | 第32-35页 |
3. 本论文研究目的和意义 | 第35页 |
4. 本论文研究内容 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-42页 |
第二章 Arthrinium sp. NF2194和Nectria sp. Z14-w的生物信息学分析 | 第42-55页 |
2.1 引言 | 第42页 |
2.2 实验材料 | 第42-43页 |
2.2.1 仪器与耗材 | 第42页 |
2.2.2 试剂和工具酶 | 第42-43页 |
2.2.3 菌株 | 第43页 |
2.2.4 培养基 | 第43页 |
2.3 实验方法 | 第43-46页 |
2.3.1 生物信息学分析软件 | 第43-44页 |
2.3.2 Arthrinium sp. NF2194及Nectria sp. Z14-w总RNA提取 | 第44页 |
2.3.3 DNA消化处理、反转录及PCR | 第44-45页 |
2.3.4 生物活性测试 | 第45-46页 |
2.4 结果与讨论 | 第46-53页 |
2.4.1 AntiSMASH及Augustus预测及分析 | 第46页 |
2.4.2 Arthrinium sp. NF2194及Nectria sp. Z14-w中杂萜基因簇的功能注释 | 第46-50页 |
2.4.3 Atn和ntn基因簇表达条件优化 | 第50-51页 |
2.4.4 Arthrinium sp. NF2194及Nectria sp. Z14-w发酵产物分离 | 第51-52页 |
2.4.5 生物活性测试结果 | 第52-53页 |
2.5 本章小结 | 第53-54页 |
参考文献 | 第54-55页 |
第三章 Arthripenoid的生物合成研究 | 第55-95页 |
3.1 引言 | 第55页 |
3.2 实验材料 | 第55-58页 |
3.2.1 仪器与耗材 | 第55页 |
3.2.2 试剂和工具酶 | 第55-56页 |
3.2.3 质粒和菌株 | 第56页 |
3.2.4 培养基及各种缓冲盐试剂 | 第56-58页 |
3.3 实验方法 | 第58-63页 |
3.3.1 载体构建 | 第58-61页 |
3.3.2 PEG介导的PCR target | 第61-62页 |
3.3.3 蛋白表达纯化及功能验证 | 第62-63页 |
3.3.4 异源表达株及突变株发酵 | 第63页 |
3.4 结果与讨论 | 第63-93页 |
3.4.1 基因敲除 | 第63-65页 |
3.4.2 利用米曲霉A.oryzae NSAR1共表达PKS基因atnG和atnH | 第65-68页 |
3.4.3 AtnJ敲除及体外功能鉴定 | 第68-71页 |
3.4.4 萜环合成相关基因功能鉴定 | 第71-73页 |
3.4.5 AtnM催化C-1’和C-10’羟基化 | 第73页 |
3.4.6 AtnB的体内和体外功能验证 | 第73-76页 |
3.4.7 中间产物的化学回补 | 第76页 |
3.4.8 Arthripenoid生物合成途径概述 | 第76-77页 |
3.4.9 Nectripenoid生物合成途径推测 | 第77-78页 |
3.4.10 结构解析 | 第78-93页 |
3.5 本章小结 | 第93-94页 |
参考文献 | 第94-95页 |
第四章 总结与展望 | 第95-97页 |
4.1 总结 | 第95页 |
4.2 展望 | 第95-97页 |
博士期间发表的论文 | 第97-98页 |
致谢 | 第98-99页 |
附录1 新化合物相关图谱 | 第99-131页 |