论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-16页 |
| 第一部分:桥本甲状腺炎患者甲状腺细胞和组织H3K4me3的改变 | 第16-47页 |
| 1 前言 | 第16-19页 |
| 2 实验材料与方法 | 第19-36页 |
| 2.1 实验材料主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2 实验用仪器设备 | 第20-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-35页 |
| 2.3.1 研究对象 | 第22页 |
| 2.3.2 患者临床特征检测 | 第22-24页 |
| 2.3.3 甲状腺细胞原代培养 | 第24-25页 |
| 2.3.4 甲状腺细胞原代培养免疫荧光鉴定 | 第25页 |
| 2.3.5 甲状腺原代培养细胞免疫共沉淀测序 | 第25-28页 |
| 2.3.6 TRIZOL提取RNA并c DNA合成 | 第28-29页 |
| 2.3.7 Real-time PCR反应 | 第29-30页 |
| 2.3.8 整体蛋白提取并蛋白定量 | 第30-31页 |
| 2.3.9 Western Blot测定H3K4me3整体蛋白水平和MLL1蛋白水平 | 第31-33页 |
| 2.3.10 石蜡切片免疫组化检测MLL1蛋白水平 | 第33-35页 |
| 2.4 统计分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-43页 |
| 3.1 HT患者和对照组甲状腺组蛋白H3K4me3全基因组分析结果 | 第36-39页 |
| 3.2 HT相关分子转录起始位点H3K4me3富集情况和转录表达 | 第39-40页 |
| 3.3 甲状腺细胞和组织H3K4me3整体蛋白表达 | 第40-41页 |
| 3.4 HT患者甲状腺组织甲基化转移酶的表达 | 第41-42页 |
| 3.5 HT患者甲状腺组织MLL1的表达 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 第二部分:碘对甲状腺细胞组蛋白甲基化的影响 | 第47-78页 |
| 6 前言 | 第47-49页 |
| 7 实验材料与方法 | 第49-61页 |
| 7.1 实验试剂 | 第49-50页 |
| 7.2 实验仪器 | 第50-51页 |
| 7.3 实验方法 | 第51-60页 |
| 7.3.1 研究对象和分组 | 第52页 |
| 7.3.2 培养人正常甲状腺细胞系(N-thy-ori3-1) | 第52页 |
| 7.3.3 碘化钠浓度梯度和时间梯度刺激甲状腺细胞 | 第52-53页 |
| 7.3.4 免疫共沉淀测序 | 第53-55页 |
| 7.3.5 TRIZOL提取RNA并c DNA合成 | 第55页 |
| 7.3.6 Real-time PCR反应 | 第55-56页 |
| 7.3.7 Western Blot检测细胞整体H3K4me3、H3K27me3和JMJD3蛋白水平 | 第56-58页 |
| 7.3.8 酶联免疫吸附实验Elisa检测细胞H3K4甲基化含量 | 第58-59页 |
| 7.3.9 免疫荧光检测MLL1细胞定位及平均荧光强度 | 第59-60页 |
| 7.3.10 石蜡切片免疫组化检测甲状腺组织JMJD3表达 | 第60页 |
| 7.4 统计学处理 | 第60-61页 |
| 8 结果 | 第61-74页 |
| 8.1 高碘对甲状腺细胞甲基化转移酶的转录表达的影响 | 第61-62页 |
| 8.2 高碘对甲状腺细胞MLL1细胞定位和蛋白表达的影响 | 第62-63页 |
| 8.3 高碘对甲状腺细胞H3K4me3整体蛋白和H3K4甲基化含量的影响 | 第63-64页 |
| 8.4 高碘对甲状腺细胞H3K4me3全基因组分布的影响 | 第64-68页 |
| 8.5 高碘刺激对JMJD3的的影响m RNA和蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 8.6 JMJD3在甲状腺组织中的表达 | 第69页 |
| 8.7 高碘对甲状腺细胞H3K27me3全基因组分布及整体蛋白表达的影响 | 第69-74页 |
| 9 讨论 | 第71-77页 |
| 10 结论 | 第77-78页 |
| 第三部分:JMJD3抑制剂GSK-J4的体外研究 | 第78-97页 |
| 11 前言 | 第78-81页 |
| 12 实验材料与方法 | 第81-87页 |
| 12.1 实验试剂 | 第81-82页 |
| 12.2 实验仪器 | 第82-84页 |
| 12.3 实验方法 | 第84-86页 |
| 12.3.1 研究对象和分组 | 第84页 |
| 12.3.2 培养人正常甲状腺细胞系(N-thy-ori3-1) | 第84页 |
| 12.3.3 TNF-α、GSK-J4、MM102和碘处理甲状腺细胞 | 第84-85页 |
| 12.3.4 TRIZOL提取RNA并c DNA合成 | 第85页 |
| 12.3.5 RT-PCR检测CCL2和CXCL10转录水平 | 第85页 |
| 12.3.6 整体蛋白提取并蛋白定量 | 第85页 |
| 12.3.7 Western Blot测定CCL2,CXCL10, H3K27me3整体蛋白水平 | 第85页 |
| 12.3.8 Annexin V/PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡 | 第85-86页 |
| 12.3.9 DCFH-DA检测细胞内ROS水平 | 第86页 |
| 12.3.10 免疫组化检测甲状腺组织CCL2和CXCL10的表达 | 第86页 |
| 12.4 统计分析 | 第86-87页 |
| 13 结果 | 第87-93页 |
| 13.1 甲状腺组织中CCL2和CXCL10的蛋白表达 | 第87页 |
| 13.2 高碘处理甲状腺原代培养细胞后CCL2和CXCL10的蛋白表达 | 第87-88页 |
| 13.3 TNF-α、高碘、GSK-J4和MM102处理细胞后CCL2和CXCL10的表达 | 第88-89页 |
| 13.4 GSK-J4对甲状腺细胞CCL2、CXCL10和H3K27me3的蛋白水平的影响 | 第89-90页 |
| 13.5 GSK-J4对TNF-α作用下甲状腺细胞氧化应激的影响 | 第90-91页 |
| 13.6 GSK-J4对TNF-α作用下甲状腺细胞凋亡的影响 | 第91-93页 |
| 14 讨论 | 第93-96页 |
| 15 结论 | 第96-97页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-105页 |
| 综述 | 第105-118页 |
| 参考文献 | 第112-118页 |
| 在学期间科研成绩 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 个人简介 | 第121页 |
