论文目录 | |
| 致谢 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 1 绪论 | 第19-39页 |
| 1.1 苦苣菜黄网病毒的研究概述 | 第19-25页 |
| 1.1.1 苦苣菜黄网病毒的分类与理化性质 | 第19页 |
| 1.1.2 苦苣菜黄网病毒的分子生物学特性 | 第19-25页 |
| 1.1.2.1 病毒结构与编码蛋白 | 第19-23页 |
| 1.1.2.2 转录与复制过程 | 第23-24页 |
| 1.1.2.3 病毒组装与运动 | 第24-25页 |
| 1.2 植物病毒运动蛋白的研究进展 | 第25-33页 |
| 1.2.1 植物病毒运动蛋白的定义与分类 | 第25-26页 |
| 1.2.2 植物病毒运动蛋白的鉴定方法 | 第26页 |
| 1.2.3 植物病毒在细胞内的运动 | 第26-30页 |
| 1.2.3.1 分泌途径 | 第26-28页 |
| 1.2.3.2 细胞骨架 | 第28-30页 |
| 1.2.4 植物病毒的胞间运动 | 第30-32页 |
| 1.2.5 植物病毒的长距离运输 | 第32-33页 |
| 1.3 植物负链RNA病毒运动的研究进展 | 第33-35页 |
| 1.3.1 不分节段的植物负链RNA病毒的运动 | 第33-34页 |
| 1.3.2 分节段的植物负链RNA病毒的运动 | 第34-35页 |
| 1.4 超侵染排阻现象的研究进展 | 第35-37页 |
| 1.4.1 超侵染排阻现象的发现和定义 | 第35页 |
| 1.4.2 超侵染排阻现象的机制研究 | 第35-37页 |
| 1.4.2.1 动物病毒中的超侵染排阻现象 | 第35-36页 |
| 1.4.2.2 植物病毒中的超侵染排阻现象 | 第36-37页 |
| 1.4.3 超侵染排阻现象的意义及其应用 | 第37页 |
| 1.5 本论文的研究目的和意义 | 第37-39页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第39-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 植物及病毒材料 | 第39页 |
| 2.1.2 载体 | 第39页 |
| 2.1.3 常用生化试剂和酶 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-55页 |
| 2.2.1 RNA水平实验方法 | 第40-41页 |
| 2.2.1.1 GFP/ SYNV trailer区RNA体外转录 | 第40页 |
| 2.2.1.2 体外RNA结合实验 | 第40-41页 |
| 2.2.2 蛋白水平实验方法 | 第41-42页 |
| 2.2.2.1 植物总蛋白提取 | 第41页 |
| 2.2.2.2 亚细胞分离实验 | 第41页 |
| 2.2.2.3 原核表达蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 2.2.2.4 Western blot | 第42页 |
| 2.2.3 接种实验 | 第42-43页 |
| 2.2.3.1 SYNV摩擦接种 | 第42-43页 |
| 2.2.3.2 农杆菌浸润接种 | 第43页 |
| 2.2.4 蛋白互作分析 | 第43-44页 |
| 2.2.4.1 BIFC | 第43页 |
| 2.2.4.2 分裂泛素化酵母双杂交 | 第43-44页 |
| 2.2.5 载体构建 | 第44-46页 |
| 2.2.5.1 PCR扩增 | 第44页 |
| 2.2.5.2 胶回收 | 第44-45页 |
| 2.2.5.3 In-Fusion克隆 | 第45页 |
| 2.2.5.4 酶切连接 | 第45页 |
| 2.2.5.5 热激转化大肠杆菌 | 第45-46页 |
| 2.2.5.6 质粒提取 | 第46页 |
| 2.2.5.7 电击转化农杆菌 | 第46页 |
| 2.2.6 荧光观察 | 第46-47页 |
| 2.2.6.1 亚细胞定位 | 第46-47页 |
| 2.2.6.2 病毒运动观察分析 | 第47页 |
| 2.2.7 病毒形态相关实验 | 第47页 |
| 2.2.7.1 电镜制片 | 第47页 |
| 2.2.8 载体构建 | 第47-55页 |
| 2.2.8.1 瞬表载体构建 | 第47-49页 |
| 2.2.8.2 BIFC载体构建 | 第49-50页 |
| 2.2.8.3 重组病毒的构建 | 第50-53页 |
| 2.2.8.4 分裂泛素化酵母双杂载体构建 | 第53页 |
| 2.2.8.5 原核表达载体构建 | 第53-55页 |
| 3 SYNV运动蛋白SC4特性研究 | 第55-67页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 结果 | 第55-65页 |
| 3.2.1 SYNV运动的最小单元是其病毒核心 | 第55-57页 |
| 3.2.2 sc4在本氏烟上的亚细胞定位 | 第57-58页 |
| 3.2.3 sc4具有体外非特异性结合ssRNA的能力 | 第58-59页 |
| 3.2.4 sc4标签融合蛋白丧失对SYNV运动功能的回补能力 | 第59-60页 |
| 3.2.5 sc4与病毒编码的其他蛋白之间的互作 | 第60-63页 |
| 3.2.6 BFA破坏ER网腔结构抑制SYNV胞间运动 | 第63-65页 |
| 3.3 讨论 | 第65-67页 |
| 4 植物弹状病毒胞间运动模式研究 | 第67-84页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 结果 | 第68-81页 |
| 4.2.1 瞬时表达弹状病毒运动蛋白对ToMV的运动回补 | 第68-69页 |
| 4.2.2 瞬时表达弹状病毒运动蛋白对PVX的运动回补 | 第69-71页 |
| 4.2.3 不同运动蛋白对SYNV的运动回补研究 | 第71-74页 |
| 4.2.4 弹状病毒运动蛋白对TYMaV的运动回补研究 | 第74-75页 |
| 4.2.5 SYNV sc4、RSMV-P3和TYMaV-P3均为外周膜蛋白 | 第75-77页 |
| 4.2.6 弹状病毒运动蛋白能够特异性与其自身N蛋白互作 | 第77-78页 |
| 4.2.7 SYNV N-P复合体在sc4存在下可以定位到细胞周边 | 第78-81页 |
| 4.3 讨论 | 第81-84页 |
| 5 SYNV长距离运动的研究 | 第84-97页 |
| 5.1 引言 | 第84页 |
| 5.2 结果 | 第84-95页 |
| 5.2.0 本氏烟维管束组织染色 | 第84-85页 |
| 5.2.1 rSYNV-RFP与rSYNV-RFP Gct徒手切片荧光比较 | 第85-90页 |
| 5.2.2 透射电镜观察SYNV侵染的维管组织 | 第90页 |
| 5.2.3 rSYNV-P sf GFP的构建与侵染性分析 | 第90-92页 |
| 5.2.4 rSYNV-P sf GFP胞内运动荧光观察 | 第92-94页 |
| 5.2.5 rSYNV-P sf GFP-RFP Gct和rSYNV-GFP-RFP Gct荧光定位比较 | 第94-95页 |
| 5.3 讨论 | 第95-97页 |
| 6 SYNV超侵染排阻及其机理研究 | 第97-118页 |
| 6.1 引言 | 第97-98页 |
| 6.2 结果 | 第98-115页 |
| 6.2.1 不同荧光标记的SYNV之间存在超侵染排阻现象 | 第98-101页 |
| 6.2.2 过量表达的SYNVM蛋白抑制SYNV的胞间运动 | 第101-103页 |
| 6.2.3 rSYNV-RFP-AM突变体的超侵染排阻能力减弱 | 第103-105页 |
| 6.2.4 M蛋白抑制SYNV MR的转录和复制 | 第105-108页 |
| 6.2.5 M蛋白对MR表达的抑制是通过与N蛋白的互作实现的 | 第108-111页 |
| 6.2.6 M蛋白核定位信号突变体不再抑制MR的转录和复制 | 第111-114页 |
| 6.2.7 携带M蛋白核定位信号突变体的rSYNV的SIE能力减弱 | 第114-115页 |
| 6.3 讨论 | 第115-118页 |
| 全文总结 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-136页 |
| 附录Ⅰ 英文缩略表 | 第136-140页 |
| 附录Ⅱ 常用缓冲液及培养基配方 | 第140-143页 |
| 附录Ⅲ 本论文引物列表 | 第143-147页 |
