论文目录 | |
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略语 | 第8-13页 |
| 第一部分 :eIF3a在成釉细胞瘤中的表达情况和意义 | 第13-25页 |
| 1 前言 | 第13-14页 |
| 2 材料与方法 | 第14-19页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第14-15页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第15页 |
| 2.2 研究对象 | 第15页 |
| 2.2.1 组织样本 | 第15页 |
| 2.3 实验方法 | 第15-19页 |
| 2.3.1 IHC检测AB和NOM组织中eIF3a的表达情况 | 第15-16页 |
| 2.3.2 RT-qPCR检测AB和NOM组织中eIF3a的表达情况 | 第16-18页 |
| 2.3.3 WB检测AB和NOM组织中eIF3a的表达情况 | 第18页 |
| 2.3.4 统计学分析 | 第18-19页 |
| 3 实验结果 | 第19-22页 |
| 3.1 eIF3a在AB和NOM组织中的表达情况 | 第19-21页 |
| 3.1.1 eIF3a在AB组织较NOM组织的表达明显上调 | 第19-20页 |
| 3.1.2 AB组织中eIF3a的表达量在mRNA水平明显高于NOM组织 | 第20-21页 |
| 3.1.3 AB组织中eIF3a的表达量在蛋白水平明显高于NOM组织 | 第21页 |
| 3.2 eIF3a的表达情况与AB临床/病理之间的相关性分析 | 第21-22页 |
| 4 讨论 | 第22-23页 |
| 5 结论 | 第23-25页 |
| 第二部分 :miR-424-5p在成釉细胞瘤中的表达情况与靶基因验证 | 第25-36页 |
| 1 前言 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-31页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26页 |
| 2.2 研究对象 | 第26-27页 |
| 2.2.1 组织样本 | 第26-27页 |
| 2.2.2 细胞样本 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 miRNA表达谱的检测与分析 | 第27页 |
| 2.3.2 eIF3a预测上游与其相互作用的miRNA | 第27页 |
| 2.3.3 RT-qPCR检测AB和 NOM组织中miR-424-5p的表达情况 | 第27-28页 |
| 2.3.4 miR-424-5p载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.5 miR-424-5p mimics/NC转染293T细胞 | 第29页 |
| 2.3.6 RT-qPCR(加尾法)检测转染后miR-424-5p的表达情况 | 第29-30页 |
| 2.3.7 mimics、质粒共转染293T细胞 | 第30页 |
| 2.3.8 双荧光素酶报告基因 | 第30页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-34页 |
| 3.1 miRNA基因芯片分析结果 | 第31页 |
| 3.2 miRNA与靶基因预测 | 第31-33页 |
| 3.3 miR-424-5p在AB和NOM组织中的表达情况 | 第33页 |
| 3.4 miR-424-5p mimics/NC转染293T细胞后miR-424-5p的表达情况 | 第33页 |
| 3.5 双荧光素酶报告基因 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 第三部分 :miR-424-5p靶向结合eIF3a调控成釉细胞瘤生物学性能的机制研究 | 第36-59页 |
| 1 前言 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-46页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第37-39页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第38-39页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第39页 |
| 2.2.1 细胞样本 | 第39页 |
| 2.2.2 动物样本 | 第39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.3.1 细胞复苏、培养与传代 | 第39页 |
| 2.3.2 慢病毒载体的构建及包装 | 第39-40页 |
| 2.3.3 RT-qPCR检测AM-1细胞中e IF3a的表达丰度 | 第40-41页 |
| 2.3.4 慢病毒ShRNA转染AM-1细胞 | 第41-42页 |
| 2.3.5 RT-qPCR检测AM-1细胞eIF3a敲减后mRNA水平的表达情况 | 第42页 |
| 2.3.6 WB检测AM-1细胞eIF3a敲减后蛋白水平的表达情况 | 第42页 |
| 2.3.7 细胞克隆形成实验 | 第42-43页 |
| 2.3.8 MTT实验 | 第43页 |
| 2.3.9 流式细胞仪检测细胞凋亡(Annexin V-APC单染法) | 第43页 |
| 2.3.10 miR-424 mimics/NC转染AM-1 细胞 | 第43-44页 |
| 2.3.11 RT-qPCR(加尾法)检测转染后miR-424 mimics的表达情况 | 第44页 |
| 2.3.12 EdU实验 | 第44页 |
| 2.3.13 CCK-8 实验 | 第44-45页 |
| 2.3.14 划痕实验 | 第45页 |
| 2.3.15 RT-qPCR检测miR-424 mimics/NC转染AM-1 细胞后eIF3a的表达水平 | 第45页 |
| 2.3.16 WB检测miR-424 mimics/NC转染AM-1细胞后eIF3a的表达水平 | 第45页 |
| 2.3.17 WB检测细胞周期蛋白P21和Cyclin D1的表达情况 | 第45-46页 |
| 2.3.18 裸鼠成瘤实验 | 第46页 |
| 2.3.19 统计学分析 | 第46页 |
| 3 实验结果 | 第46-56页 |
| 3.1 AM-1细胞中eIF3a的表达丰度 | 第46-47页 |
| 3.2 慢病毒转染AM-1细胞感染条件 | 第47页 |
| 3.3 慢病毒转染AM-1细胞 | 第47-48页 |
| 3.4 AM-1细胞中eIF3a敲减后m RNA水平的表达情况 | 第48页 |
| 3.5 AM-1细胞中eIF3a敲减后蛋白水平的表达情况 | 第48-49页 |
| 3.6 细胞克隆形成实验 | 第49页 |
| 3.7 MTT实验 | 第49-50页 |
| 3.8 流式细胞仪检测AM-1细胞凋亡情况 | 第50页 |
| 3.9 miR-424-5p mimics/NC转染AM-1细胞后miR-424-5p的表达情况 | 第50-51页 |
| 3.10 EdU实验 | 第51页 |
| 3.11 CCK-8 实验 | 第51-52页 |
| 3.12划痕实验 | 第52-53页 |
| 3.13 miR-424-5p mimics转染AM-1细胞后eIF3a在 mRNA水平的表达 | 第53页 |
| 3.14 miR-424-5p mimics转染AM-1细胞后eIF3a在蛋白水平的表达 | 第53页 |
| 3.15 WB检测下游细胞周期调控蛋白P21和Cyclin D1的表达情况 | 第53-55页 |
| 3.16裸鼠成瘤实验 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 综述 | 第64-80页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 个人简历 | 第82页 |
