论文目录 | |
摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-15页 |
英文缩略语 | 第16-20页 |
第一部分 :MicroRNA-29b-2-5p通过靶向泛素连接酶Cbl-b抑制胰腺导管腺癌的增殖 | 第20-57页 |
1 前言 | 第20-21页 |
2 材料与方法 | 第21-33页 |
2.1 试剂 | 第21-22页 |
2.2 动物 | 第22-23页 |
2.3 仪器 | 第23页 |
2.4 实验方法 | 第23-33页 |
2.4.1 临床病例入选与排除 | 第23-24页 |
2.4.2 FFPE组织标本中RNA提取 | 第24-26页 |
2.4.3 miRNA表达芯片检测 | 第26页 |
2.4.4 实时定量PCR(Real-Time PCR) | 第26页 |
2.4.5 细胞培养 | 第26-27页 |
2.4.6 瞬时转染 | 第27-28页 |
2.4.7 细胞RNA的提取 | 第28页 |
2.4.8 台盼蓝据染计数法测定细胞增殖能力 | 第28-29页 |
2.4.9 Western blot检测蛋白水平 | 第29页 |
2.4.10 RT-PCR | 第29-30页 |
2.4.11 双荧光素酶报告基因实验进行靶基因鉴定 | 第30-31页 |
2.4.12 动物实验 | 第31页 |
2.4.13 免疫组化 | 第31页 |
2.4.14 免疫荧光实验 | 第31-32页 |
2.4.15 免疫共沉降实验 | 第32页 |
2.4.16 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第32页 |
2.4.17 统计学分析 | 第32-33页 |
3 实验结果 | 第33-54页 |
3.1 筛选病例组及验证病例组患者特征 | 第33-35页 |
3.2 miRNAs表达芯片检测筛选病例组miRNA表达谱 | 第35-36页 |
3.3 验证miR-29b-2-5p的预后意义 | 第36-39页 |
3.4 miR-29b-2-5p与患者临床病理特征的关系 | 第39-40页 |
3.5 多因素生存分析验证mi R-29b-2-5p的预后意义 | 第40-41页 |
3.6 miR-29b-2-5p在胰腺癌中的表达情况 | 第41页 |
3.7 细胞实验验证mi R-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖 | 第41-43页 |
3.7.1 miR-29b-2-5p mimic转染PDAC细胞后mi R-29b-2-5p的表达变化 | 第42页 |
3.7.2 miR-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖 | 第42-43页 |
3.8 裸鼠实验验证mi R-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖 | 第43-44页 |
3.9 miR-29b-2-5p可以诱导PDAC细胞凋亡和G1 期细胞周期停滞 | 第44-46页 |
3.10 miR-29b-2-5p靶基因的预测和验证 | 第46-49页 |
3.10.1 miR-29b-2-5p靶基因的初步预测 | 第46-47页 |
3.10.2 miR-29b-2-5p在转录后水平抑制Cbl-b的表达 | 第47-48页 |
3.10.3 miR-29b-2-5p直接和Cbl-b结合 | 第48-49页 |
3.11 过表达Cbl-b促进PDAC细胞的增殖,而且这种增殖依赖于miR-29b-2-5p | 第49-50页 |
3.11.1 过表达Cbl-b促进PDAC细胞的增殖 | 第49页 |
3.11.2 Cbl-b通过miR-29b-2-5p促进PDAC细胞的增殖 | 第49-50页 |
3.12 miR-29b-2-5p通过抑制Cbl-b促进p53 的表达 | 第50页 |
3.13 Cbl-b结合p53 在细胞存在共定位,同时Cbl-b可以泛素化降解p53 | 第50-52页 |
3.14 在验证集中Cbl-b与预后和mi R-29b-2-5p的表达呈负相关 | 第52-54页 |
4 讨论 | 第54-56页 |
结论 | 第56-57页 |
第二部分 :Yes相关蛋白(YAP)调控上皮细胞转化2(ECT2)介导胰腺癌的生长和转移 | 第57-82页 |
1 前言 | 第57-58页 |
2 材料与方法 | 第58-65页 |
2.1 试剂 | 第58-59页 |
2.2 动物 | 第59页 |
2.3 仪器 | 第59页 |
2.4 实验方法 | 第59-65页 |
2.4.1 Transwell法进行细胞迁移能力检测 | 第59-60页 |
2.4.2 细胞培养 | 第60页 |
2.4.3 Western blot检测蛋白水平 | 第60页 |
2.4.4 免疫组化 | 第60-61页 |
2.4.5 免疫荧光 | 第61页 |
2.4.6 台盼蓝据染计数法测定细胞增殖能力 | 第61页 |
2.4.7 实时定量PCR(Real-time PCR) | 第61-62页 |
2.4.8 慢病毒稳定细胞株的构建 | 第62-63页 |
2.4.9 瞬时转染 | 第63页 |
2.4.10 流式细胞术 | 第63页 |
2.4.11 小动物活体成像 | 第63-64页 |
2.4.12 染色质免疫沉淀(CHIP) | 第64-65页 |
2.4.13 荧光报告基因实验 | 第65页 |
2.4.14 统计学分析 | 第65页 |
3 实验结果 | 第65-80页 |
3.1 miR-29b-2-5p可以直接与YAP3’UTR结合并抑制YAP蛋白的表达 | 第65-66页 |
3.2 YAP促进ECT2 的表达 | 第66-67页 |
3.3 YAP促进ECT2 的转录水平调控 | 第67-68页 |
3.4 ECT2 上调促进胰腺癌进展 | 第68-71页 |
3.5 ECT2 促进胰腺癌增殖 | 第71-73页 |
3.6 ECT2 敲除后信号通路改变 | 第73页 |
3.7 YAP与ECT2参与细胞因子的调节 | 第73-74页 |
3.8 ECT2 可以反向调节YAP | 第74-76页 |
3.9 ECT2 在胰腺癌细胞迁移中起着关键作用 | 第76-77页 |
3.10 动物实验验证ECT2参与了胰腺癌细胞的增殖和转移 | 第77-80页 |
4 讨论 | 第80-81页 |
结论 | 第81-82页 |
本研究创新性的自我评价 | 第82-83页 |
参考文献 | 第83-93页 |
综述 | 第93-106页 |
参考文献 | 第99-106页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第106-107页 |
致谢 | 第107-108页 |
个人简介 | 第108页 |