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miR-29b-2-5p/Cbl-b或YAP轴在胰腺导管腺癌增殖和转移中的机制研究

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miR-29b-2-5p/Cbl-b或YAP轴在胰腺导管腺癌增殖和转移中的机制研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-15页
英文缩略语第16-20页
第一部分 :MicroRNA-29b-2-5p通过靶向泛素连接酶Cbl-b抑制胰腺导管腺癌的增殖第20-57页
    1 前言第20-21页
    2 材料与方法第21-33页
        2.1 试剂第21-22页
        2.2 动物第22-23页
        2.3 仪器第23页
        2.4 实验方法第23-33页
            2.4.1 临床病例入选与排除第23-24页
            2.4.2 FFPE组织标本中RNA提取第24-26页
            2.4.3 miRNA表达芯片检测第26页
            2.4.4 实时定量PCR(Real-Time PCR)第26页
            2.4.5 细胞培养第26-27页
            2.4.6 瞬时转染第27-28页
            2.4.7 细胞RNA的提取第28页
            2.4.8 台盼蓝据染计数法测定细胞增殖能力第28-29页
            2.4.9 Western blot检测蛋白水平第29页
            2.4.10 RT-PCR第29-30页
            2.4.11 双荧光素酶报告基因实验进行靶基因鉴定第30-31页
            2.4.12 动物实验第31页
            2.4.13 免疫组化第31页
            2.4.14 免疫荧光实验第31-32页
            2.4.15 免疫共沉降实验第32页
            2.4.16 流式细胞术检测细胞凋亡第32页
            2.4.17 统计学分析第32-33页
    3 实验结果第33-54页
        3.1 筛选病例组及验证病例组患者特征第33-35页
        3.2 miRNAs表达芯片检测筛选病例组miRNA表达谱第35-36页
        3.3 验证miR-29b-2-5p的预后意义第36-39页
        3.4 miR-29b-2-5p与患者临床病理特征的关系第39-40页
        3.5 多因素生存分析验证mi R-29b-2-5p的预后意义第40-41页
        3.6 miR-29b-2-5p在胰腺癌中的表达情况第41页
        3.7 细胞实验验证mi R-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖第41-43页
            3.7.1 miR-29b-2-5p mimic转染PDAC细胞后mi R-29b-2-5p的表达变化第42页
            3.7.2 miR-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖第42-43页
        3.8 裸鼠实验验证mi R-29b-2-5p抑制胰腺癌细胞的增殖第43-44页
        3.9 miR-29b-2-5p可以诱导PDAC细胞凋亡和G1 期细胞周期停滞第44-46页
        3.10 miR-29b-2-5p靶基因的预测和验证第46-49页
            3.10.1 miR-29b-2-5p靶基因的初步预测第46-47页
            3.10.2 miR-29b-2-5p在转录后水平抑制Cbl-b的表达第47-48页
            3.10.3 miR-29b-2-5p直接和Cbl-b结合第48-49页
        3.11 过表达Cbl-b促进PDAC细胞的增殖,而且这种增殖依赖于miR-29b-2-5p第49-50页
            3.11.1 过表达Cbl-b促进PDAC细胞的增殖第49页
            3.11.2 Cbl-b通过miR-29b-2-5p促进PDAC细胞的增殖第49-50页
        3.12 miR-29b-2-5p通过抑制Cbl-b促进p53 的表达第50页
        3.13 Cbl-b结合p53 在细胞存在共定位,同时Cbl-b可以泛素化降解p53第50-52页
        3.14 在验证集中Cbl-b与预后和mi R-29b-2-5p的表达呈负相关第52-54页
    4 讨论第54-56页
    结论第56-57页
第二部分 :Yes相关蛋白(YAP)调控上皮细胞转化2(ECT2)介导胰腺癌的生长和转移第57-82页
    1 前言第57-58页
    2 材料与方法第58-65页
        2.1 试剂第58-59页
        2.2 动物第59页
        2.3 仪器第59页
        2.4 实验方法第59-65页
            2.4.1 Transwell法进行细胞迁移能力检测第59-60页
            2.4.2 细胞培养第60页
            2.4.3 Western blot检测蛋白水平第60页
            2.4.4 免疫组化第60-61页
            2.4.5 免疫荧光第61页
            2.4.6 台盼蓝据染计数法测定细胞增殖能力第61页
            2.4.7 实时定量PCR(Real-time PCR)第61-62页
            2.4.8 慢病毒稳定细胞株的构建第62-63页
            2.4.9 瞬时转染第63页
            2.4.10 流式细胞术第63页
            2.4.11 小动物活体成像第63-64页
            2.4.12 染色质免疫沉淀(CHIP)第64-65页
            2.4.13 荧光报告基因实验第65页
            2.4.14 统计学分析第65页
    3 实验结果第65-80页
        3.1 miR-29b-2-5p可以直接与YAP3’UTR结合并抑制YAP蛋白的表达第65-66页
        3.2 YAP促进ECT2 的表达第66-67页
        3.3 YAP促进ECT2 的转录水平调控第67-68页
        3.4 ECT2 上调促进胰腺癌进展第68-71页
        3.5 ECT2 促进胰腺癌增殖第71-73页
        3.6 ECT2 敲除后信号通路改变第73页
        3.7 YAP与ECT2参与细胞因子的调节第73-74页
        3.8 ECT2 可以反向调节YAP第74-76页
        3.9 ECT2 在胰腺癌细胞迁移中起着关键作用第76-77页
        3.10 动物实验验证ECT2参与了胰腺癌细胞的增殖和转移第77-80页
    4 讨论第80-81页
    结论第81-82页
本研究创新性的自我评价第82-83页
参考文献第83-93页
综述第93-106页
    参考文献第99-106页
攻读学位期间取得的研究成果第106-107页
致谢第107-108页
个人简介第108页

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