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重组大肠杆菌高效生产具生物活性的人β-防御素和牛肠激酶的研究
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分类：教育论文网→生物科学论文→分子生物学论文→基因工程（遗传工程）论文
重组大肠杆菌高效生产具生物活性的人β-防御素和牛肠激酶的研究
论文目录
 
目录第1-10 页
摘要第10-11 页
ABSTRACT第11-13 页
第一章 文献综述第13-49 页
　　· 人防御素第13-26 页
　　　　· 引言第13 页
　　　　· 人防御素的组织分布第13-14 页
　　　　· 人防御素的分子生物学特征第14-19 页
　　　　· 人防御素的抗菌机理第19-23 页
　　　　· 人防御素的医学价值和前景展望第23-25 页
　　　　· 基因工程生产人防御素的研究进展第25-26 页
　　· 肠激酶第26-30 页
　　　　· 引言第26-27 页
　　　　· 肠激酶的结构特点第27-28 页
　　　　· 肠激酶的识别序列第28 页
　　　　· 肠激酶的理化和生理特点第28-29 页
　　　　· 基因工程菌生产肠激酶第29-30 页
　　· 真核生物基因在大肠杆菌中的表达第30-34 页
　　　　· 密码子优化第31 页
　　　　· 融合表达体系第31-34 页
　　· 包涵体蛋白质的体外折叠复性第34-39 页
　　　　· 包涵体的制备第34 页
　　　　· 包涵体的变性溶解第34-35 页
　　　　· 蛋白质的体外复性方法第35-39 页
　　· 本课题研究思路及拟研究的内容第39-40 页
　　参考文献第40-49 页
第二章 材料与方法第49-53 页
　　· 实验材料第49-50 页
　　　　· 质粒第49 页
　　　　· 菌种第49 页
　　　　· 抗体第49 页
　　　　· 工具酶及试剂盒第49 页
　　　　· 培养基第49-50 页
　　　　· 主要仪器第50 页
　　· 实验及分析方法第50-52 页
　　　　· 分子克隆相关实验第50 页
　　　　· 大肠杆菌菌体浓度测定第50 页
　　　　· 大肠杆菌细胞破碎及胞内蛋白提取第50-51 页
　　　　· 蛋白浓度测定第51 页
　　　　· SDS-PAGE电泳第51 页
　　　　· Western Blotting 分析第51-52 页
　　参考文献第52-53 页
第三章 人β-防御素-3及4基因的合成和表达载体的构建第53-65 页
　　· 引言第53 页
　　· 实验材料第53-55 页
　　　　· 质粒和菌株第53-54 页
　　　　· 培养基第54 页
　　　　· 酶和试剂盒第54-55 页
　　　　· 引物第55 页
　　· 实验方法第55-58 页
　　　　· 密码子优化第55 页
　　　　· 全基因合成(PCR-based gene SOEing synthesis第55-56 页
　　　　· 琼脂糖凝胶回收纯化 DNA第56-57 页
　　　　· 克隆载体的构建第57-58 页
　　　　· 质粒的提取和转化第58 页
　　　　· 表达载体和表达菌株的构建第58 页
　　· 结果与讨论第58-62 页
　　　　· 密码子优化第58-60 页
　　　　· 全基因合成第60-61 页
　　　　· 克隆载体构建第61 页
　　　　· 表达载体构建第61-62 页
　　· 小结第62 页
　　参考文献第62-65 页
第四章 重组人β-防御素-3及4的表达优化第65-79 页
　　· 引言第65 页
　　· 实验材料第65 页
　　　　· 菌种第65 页
　　　　· 培养基第65 页
　　· 实验方法第65-66 页
　　　　· 人β-防御素-3及4的表达和western blotting分析第65-66 页
　　　　· 表达条件的优化第66 页
　　　　· 表达产物定量分析第66 页
　　· 结果与讨论第66-76 页
　　　　· HBD3融合蛋白的表达第66-67 页
　　　　· HBD3重组菌培养条件优化第67-72 页
　　　　· HBD4融合蛋白的表达第72 页
　　　　· HBD4重组菌培养条件优化第72-76 页
　　· 小结第76-77 页
　　参考文献第77-79 页
第五章 牛肠激酶轻链基因的合成及在大肠杆菌中的表达第79-99 页
　　· 引言第79-80 页
　　· 实验材料第80-82 页
　　　　· 质粒和菌株第80-81 页
　　　　· 培养基第81-82 页
　　　　· 酶和试剂盒第82 页
　　　　· 引物第82 页
　　　　· 分离设备第82 页
　　· 实验方法第82-86 页
　　　　· 密码子优化第82 页
　　　　· 全基因合成(PCR-based gene SOEing synthesis)第82-83 页
　　　　· 琼脂糖凝胶回收纯化 DNA第83-84 页
　　　　· 克隆载体的构建第84 页
　　　　· 质粒的提取和转化第84 页
　　　　· 表达载体和表达菌株的构建第84 页
　　　　· 菌体培养及蛋白表达第84 页
　　　　· 亲和层析第84-86 页
　　· 结果与讨论第86-97 页
　　　　· 密码子优化第87-88 页
　　　　· 全基因合成第88-89 页
　　　　· 克隆载体构建第89 页
　　　　· 表达载体构建第89-95 页
　　　　· 目标蛋白的表达第95-96 页
　　　　· 亲和层析分离融合蛋白第96-97 页
　　· 小结第97-98 页
　　参考文献第98-99 页
第六章 牛肠激酶轻链的纯化和活性测定第99-109 页
　　· 引言第99 页
　　· 实验材料第99-100 页
　　　　· 菌种第99 页
　　　　· 培养基第99-100 页
　　　　· 分离设备第100 页
　　　　· 透析袋第100 页
　　· 实验方法第100-101 页
　　　　· 渗透冲击法提取蛋白第100 页
　　　　· 表达条件的优化第100 页
　　　　· 亲和层析第100-101 页
　　　　· 透析第101 页
　　　　· 目标蛋白活性分析第101 页
　　· 结果与讨论第101-108 页
　　　　· 渗透冲击提取目标蛋白第101-102 页
　　　　· 渗透冲击所得蛋白的活性鉴定第102-103 页
　　　　· 表达条件的优化第103-106 页
　　　　· 从渗透冲击液中提纯肠激酶第106-107 页
　　　　· sBEKLC1SX的活性检测第107-108 页
　　· 小结第108-109 页
第七章牛肠激酶轻链的金属亲和层析复性第109-117 页
　　· 引言第109 页
　　· 实验材料第109-110 页
　　　　· 菌种第109 页
　　　　· 培养基第109-110 页
　　　　· 分离设备第110 页
　　· 实验方法第110-111 页
　　　　· 菌体培养及蛋白表达第110 页
　　　　· 融合蛋白包涵体的制备第110 页
　　　　· 融合蛋白包涵体的变性溶解第110 页
　　　　· 融合蛋白包涵体的亲和复性第110-111 页
　　　　· 亲和复性条件的优化第111 页
　　　　· Sephadex G-10脱盐第111 页
　　　　· 复性产物活性分析第111 页
　　· 结果与讨论第111-116 页
　　　　· 融合蛋白包涵体的制备第111-112 页
　　　　· 目标蛋白的亲和复性与纯化第112-113 页
　　　　· 目标蛋白亲和复性的条件优化第113-115 页
　　　　· 复性产物的活性检测第115-116 页
　　· 小结第116 页
　　参考文献第116-117 页
第八章 重组人β-防御素-3及4的分离纯化第117-127 页
　　· 引言第117 页
　　· 实验材料第117-118 页
　　　　· 蛋白酶第117 页
　　　　· 分离设备第117-118 页
　　· 实验方法第118-119 页
　　　　· 亲和层析纯化 HBD3、HBD4融合蛋白第118 页
　　　　· 阳离子交换层析纯化 HBD3融合蛋白第118 页
　　　　· Sephadex G-10更换酶切缓冲液第118 页
　　　　· 肠激酶酶切融合蛋白第118 页
　　　　· 阳离子交换层析纯化 HBD3及 HBD4第118 页
　　　　· Sephadex G-10脱盐第118-119 页
　　　　· 冷冻干燥第119 页
　　· 结果与讨论第119-124 页
　　　　· 亲和层析纯化融合蛋白第119-120 页
　　　　· 阳离子交换层析纯化 HBD3融合蛋白第120-121 页
　　　　· 肠激酶酶切融合蛋白第121 页
　　　　· 阳离子交换层析分离重组 HBD3及 HBD4第121-123 页
　　　　· HBD3及 HBD4的精制第123 页
　　　　· 分离工艺总结第123-124 页
　　· 小结第124-127 页
第九章 重组人β防御素-3及4的活性测定第127-133 页
　　· 引言第127 页
　　· 实验材料第127-128 页
　　　　· 菌种第127 页
　　　　· 牛津杯第127 页
　　　　· 培养基第127-128 页
　　· 实验方法第128-129 页
　　　　· 测试菌的培养第128 页
　　　　· 液体培养法测定抑菌活性第128 页
　　　　· 固体平板扩散法测定抑菌活性第128-129 页
　　· 结果与讨论第129-131 页
　　　　· 液体培养法测定抑菌活性第129-130 页
　　　　· 固体平板扩散法第130-131 页
　　· 小结第131-133 页
第十章 结论与建议第133-137 页
　　· 结论第133-135 页
　　· 建议第135-137 页
致谢第137-139 页
论文发表情况第139 页

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