论文目录 | |
| 目录 | 第1-9
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| 摘要 | 第9-11
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| ABSTRACT | 第11-13
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| 前言 | 第13-15
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| 第一章 文献综述 | 第15-45
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| · 无细胞蛋白质合成系统的研究进展 | 第15-24
页 |
| · 引言 | 第15
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| · 无细胞蛋白质合成系统的简介 | 第15-16
页 |
| · 无细胞系统中蛋白质合成的机理和优越性 | 第16-17
页 |
| · 常用无细胞抽提物的制备过程 | 第17-18
页 |
| · 无细胞系统中影响蛋白质合成的两个关健问题 | 第18-22
页 |
| · 无细胞蛋白质合成系统反应器的设计和操作方式 | 第22-23
页 |
| · 无细胞系统蛋白质合成技术的应用和前景 | 第23-24
页 |
| · 防御素 | 第24-36
页 |
| · 引言 | 第24-25
页 |
| · 人防御素的组织分布 | 第25-26
页 |
| · 人防御素的分子生物学特征 | 第26-30
页 |
| · 人防御素的抗菌活性及作用机理 | 第30-33
页 |
| · 人防御素的医学和药用价值及前景展望 | 第33-34
页 |
| · 基因工程生产人防御素 | 第34-36
页 |
| · 艾滋病治疗药及其研究进展 | 第36-42
页 |
| · 艾滋病 | 第36-37
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| · HIV的复制及整合机制 | 第37-38
页 |
| · 目前艾滋病治疗药及治疗机理 | 第38-42
页 |
| · 小结 | 第42
页 |
| · 本课题拟研究的内容 | 第42-45
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| 第二章 材料与方法 | 第45-49
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| · 实验材料 | 第45-46
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| · 质粒 | 第45
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| · 大肠杆菌菌种 | 第45
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| · 抗体 | 第45
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| · 工具酶及试剂盒 | 第45
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| · 培养基 | 第45-46
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| · 主要仪器 | 第46
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| · 实验及分析方法 | 第46-49
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| · 分子克隆相关实验 | 第46-47
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| · 菌体浓度测定 | 第47
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| · 蛋白浓度测定 | 第47
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| · SDS-PAGE电泳 | 第47
页 |
| · Western blotting 分析 | 第47
页 |
| · GFP荧光强度测定 | 第47-49
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| 第三章 HBD-2表达载体的构建 | 第49-61
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| · 引言 | 第49-50
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| · 材料与方法 | 第50-51
页 |
| · 实验材料 | 第50-51
页 |
| · 实验方法 | 第51
页 |
| · 结果与讨论 | 第51-59
页 |
| · hBD2，shBD2，trxA和 GFP基因的获得 | 第51-52
页 |
| · 重组质粒的构建 | 第52-56
页 |
| · 对构建好的载体进行鉴定 | 第56
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| · 构建好的表达载体的图谱 | 第56-57
页 |
| · 人β-防御素-2在大肠杆菌中的表达 | 第57-59
页 |
| · 小结 | 第59-61
页 |
| 第四章 大肠杆菌无细胞系统间歇反应合成 HBD-2 | 第61-73
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| · 引言 | 第61
页 |
| · 材料与方法 | 第61-63
页 |
| · 实验材料 | 第61-62
页 |
| · 实验方法 | 第62-63
页 |
| · 结果与讨论 | 第63-71
页 |
| · 在无细胞间歇模式反应体系中表达防御素蛋白 | 第63-69
页 |
| · 大肠杆菌无细胞系统合成可溶性目标蛋白的研究 | 第69-70
页 |
| · 无细胞系统中两种不同基因表达水平的比较 | 第70
页 |
| · 不同系列表达载体的目标蛋白表达水平的对比 | 第70-71
页 |
| · 小结 | 第71-73
页 |
| 第五章 大肠杆菌无细胞系统连续交换式反应合成 HBD-2及产物的分离纯化 | 第73-85
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| · 引言 | 第73-74
页 |
| · 材料与方法 | 第74-76
页 |
| · 仪器与试剂 | 第74
页 |
| · 实验方法 | 第74-76
页 |
| · 结果与讨论 | 第76-83
页 |
| · CECF模式下的无细胞反应 | 第76-79
页 |
| · 不同无细胞操作方式下蛋白质表达水平的比较 | 第79-80
页 |
| · 亲和层析分离融合蛋白 | 第80-82
页 |
| · 融合蛋白的脱盐 | 第82
页 |
| · CNBr消化融合蛋白及 HBD-2的活性测定 | 第82-83
页 |
| · 小结 | 第83-85
页 |
| 第六章 大肠杆菌无细胞系统表达 HBD-3,4 | 第85-95
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| · 引言 | 第85-86
页 |
| · 材料与方法 | 第86-87
页 |
| · 实验材料 | 第86
页 |
| · 实验方法 | 第86-87
页 |
| · 结果与讨论 | 第87-94
页 |
| · 采用PCR方法克隆trxA和 GFP基因 | 第87-88
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| · 表达载体的构建 | 第88-91
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| · HBD-3，4目标蛋白的理论分子量 | 第91
页 |
| · 人β-防御素-3,4在无细胞系统间歇式反应模式下的表达 | 第91-94
页 |
| · 小结 | 第94-95
页 |
| 第七章 大肠杆菌无细胞系统表达 HIV病毒蛋白的初探 | 第95-113
页 |
| · 引言 | 第95-96
页 |
| · 材料与方法 | 第96-103
页 |
| · 实验材料 | 第96-97
页 |
| · 实验方法 | 第97-103
页 |
| · 结果与讨论 | 第103-111
页 |
| · HIV基因质粒表达模板的构建 | 第103-105
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| · HIV基因PCR模板的构建 | 第105-106
页 |
| · HIV基因在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中的表达 | 第106-108
页 |
| · HIV两种基因(人源、合成)在无细胞系统中表达的比较 | 第108-111
页 |
| · 小结 | 第111-113
页 |
| 第八章 大肠杆菌无细胞系统的构建 | 第113-137
页 |
| · 引言 | 第113
页 |
| · 材料与方法 | 第113-118
页 |
| · 实验材料 | 第113-114
页 |
| · 实验方法 | 第114-118
页 |
| · 结果与讨论 | 第118-136
页 |
| · 报导基因表达质粒的构建 | 第118
页 |
| · A19生长曲线的测定 | 第118-119
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| · 破碎压力对抽提物中蛋白质含量的影响 | 第119-120
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| · 制备抽提物时离心力大小的摸索 | 第120
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| · 对抑制表达的原因进行查找和确定 | 第120-123
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| · 制备大肠杆菌抽提物过程中的透析步骤和保存方法的优化 | 第123-124
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| · 底物和能量再生体系的优化 | 第124-136
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| · 小结 | 第136-137
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| 第九章 结论和建议 | 第137-141
页 |
| · 结论 | 第137-139
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| · 建议 | 第139-141
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| 致谢 | 第141-143
页 |
| 发表论文及参加会议 | 第143-145
页 |
| 参考文献 | 第145-152
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