论文目录 | |
| 致谢 | 第1-6
页 |
| 摘要 | 第6-9
页 |
| Abstract | 第9-16
页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-59
页 |
| 第一节 传染性法氏囊病病毒的分子生物学研究进展 | 第16-41
页 |
| 1.IBDV的基因组和蛋白组成 | 第16-22
页 |
| 2.IBDV病毒粒子形态结构和病毒粒子的组装 | 第22-24
页 |
| 3.IBDV疫苗的研究进展 | 第24-25
页 |
| 4.转基因植物生产疫苗的研究进展 | 第25-35
页 |
| 参考文献: | 第35-41
页 |
| 第二节 单克隆抗体技术及其在植物病毒学中的应用 | 第41-59
页 |
| 1.抗体的基本结构和特性 | 第41-43
页 |
| 2.单克隆抗体技术 | 第43-47
页 |
| · 杂交瘤技术基本原理 | 第43-44
页 |
| · 杂交瘤技术的基本流程 | 第44-47
页 |
| · 动物免疫 | 第46
页 |
| · 细胞融合 | 第46
页 |
| · 杂交瘤细胞的筛选 | 第46-47
页 |
| · 杂交瘤细胞的克隆 | 第47
页 |
| · 单克隆抗体的制备 | 第47
页 |
| · 杂交瘤细胞的冻存 | 第47
页 |
| 3.单克隆抗体和多克隆抗体的比较 | 第47-48
页 |
| 4.单克隆抗体技术的发展 | 第48-51
页 |
| · 杂交瘤技术的拓展 | 第48-49
页 |
| · 基因工程抗体的发展 | 第49-51
页 |
| 5.单克隆抗体在植物病毒学中的应用 | 第51-56
页 |
| 参考文献: | 第56-59
页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在水稻稻米中的表达及其免疫原性和免疫保护性 | 第59-86
页 |
| 第一节 传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在转基因水稻中的表达 | 第60-74
页 |
| 1.材料与方法 | 第60-67
页 |
| · 菌种、质粒及生化试剂 | 第60
页 |
| · 植物培养基及植物材料 | 第60
页 |
| · 植物表达载体构建 | 第60-61
页 |
| · 根癌农杆菌介导VP2基因的水稻转化 | 第61-62
页 |
| · 转基因植株的分子鉴定 | 第62-65
页 |
| · T_0代转基因植株种子中表达的IBDV VP2产物的检测 | 第65-67
页 |
| 2.结果与分析 | 第67-72
页 |
| · IBDV VP2基因的植物表达载体的构建 | 第67-69
页 |
| · 水稻的转化 | 第69
页 |
| · 转基因植株的分子鉴定 | 第69-71
页 |
| · T_0、T_1代转基因植株种子中表达的IBDV VP2产物的检测结果 | 第71-72
页 |
| 3.讨论 | 第72-74
页 |
| 第二节 稻米中表达的传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的免疫原性及免疫保护性 | 第74-82
页 |
| 1.材料与方法 | 第74-77
页 |
| · 材料 | 第74
页 |
| · 小鸡的免疫、攻毒及免疫保护分析 | 第74-76
页 |
| · 转基因稻米的安全评价 | 第76
页 |
| · 法氏囊病理学观察及统计学分析 | 第76-77
页 |
| 2.结果 | 第77-81
页 |
| · 免疫鸡的攻毒保护效果 | 第77-78
页 |
| · 攻毒后免疫鸡法氏囊中IBDV抗原的检测 | 第78-79
页 |
| · 免疫鸡血清中IBDV抗体效价的检测 | 第79
页 |
| · 免疫鸡血清中IBDV中和抗体效价的测定 | 第79-81
页 |
| · 转基因稻米安全性的评价 | 第81
页 |
| 3.讨论 | 第81-82
页 |
| 参考文献: | 第82-86
页 |
| 第三章 四种病毒的单克隆抗体研制及其应用 | 第86-124
页 |
| 第一节 番茄斑萎病毒N基因的原核表达及其单克隆抗体制备 | 第86-107
页 |
| 1.材料与方法 | 第87-98
页 |
| · 病毒 | 第87
页 |
| · 菌株和质粒 | 第87
页 |
| · 试剂 | 第87-88
页 |
| · 常用缓冲液的配制 | 第88
页 |
| · RT-PCR克隆TSWV N基因及其表达载体的构建 | 第88-92
页 |
| · TSWV N基因在大肠杆菌中的表达及蛋白纯化 | 第92-93
页 |
| · 多克隆与单克隆抗体的制备 | 第93-95
页 |
| · 用制备的抗体建立测定TSWV的酶联免疫吸附测定法(ELISA) | 第95-97
页 |
| · 免疫捕获反转录PCR(Immunocapture RT-PCR,IC-RT-PCR)方法的建立 | 第97-98
页 |
| 2.结果 | 第98-105
页 |
| · TSWV N基因的克隆及其原核表达载体的构建 | 第98
页 |
| · N基因在大肠杆菌中的表达 | 第98-99
页 |
| · 重组蛋白的纯化 | 第99
页 |
| · TSWV N蛋白的单克隆抗体制备 | 第99-102
页 |
| · TAS-ELISA抗体工作浓度的确定 | 第102
页 |
| · ACP-ELISA和TAS-ELISA检测方法的比较 | 第102-103
页 |
| · TAS-ELISA检测灵敏度确定 | 第103-104
页 |
| · TAS-ELISA检测TSWV田间样品 | 第104
页 |
| · IC-RT-PCR检测TSWV方法的建立 | 第104-105
页 |
| 3.讨论 | 第105-107
页 |
| 第二节 香石竹斑驳病毒单克隆抗体的制备及检测应用 | 第107-112
页 |
| 1.材料与方法 | 第107-108
页 |
| · 病毒、培养基和抗体 | 第107
页 |
| · 病毒提纯 | 第107-108
页 |
| · 其他试验方法 | 第108
页 |
| 2.结果 | 第108-111
页 |
| · 病毒的繁殖、提纯及小鼠免疫 | 第108
页 |
| · 杂交瘤细胞的融合、筛选、克隆 | 第108
页 |
| · 腹水抗体制备、抗体类型及亚类鉴定、效价测定 | 第108-109
页 |
| · Western-blot分析单抗与CarMV粒子的免疫反应 | 第109
页 |
| · 以单抗为核心建立的检测CarMV的ACP-ELISA方法的特异性 | 第109-110
页 |
| · ACP-ELISA检测灵敏度的确定 | 第110
页 |
| · ACP-ELISA的田间检测 | 第110-111
页 |
| 3.讨论 | 第111-112
页 |
| 第三节 马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用 | 第112-117
页 |
| 1.材料与方法 | 第112-113
页 |
| · 病毒、培养基和抗体 | 第112-113
页 |
| · 马铃薯X病毒云南分离物的繁殖及提纯 | 第113
页 |
| · 其他试验方法 | 第113
页 |
| 2.结果与分析 | 第113-115
页 |
| · 马铃薯X病毒云南分离株的分离及提纯 | 第113-114
页 |
| · 杂交瘤细胞的融合、筛选与克隆 | 第114
页 |
| · 腹水抗体制备、抗体类型及亚类鉴定和效价测定 | 第114
页 |
| · 以单抗为核心建立的检测PVX的ACP-ELISA方法检测灵敏度确定 | 第114
页 |
| · 以单抗为核心建立的检测PVX的ACP-ELISA方法的特异性检测 | 第114-115
页 |
| · ACP-ELISA方法的田间检测应用 | 第115
页 |
| 3.讨论 | 第115-117
页 |
| 第四节 百合无症病毒单克隆抗体的制备及检测应用 | 第117-121
页 |
| 1.材料与方法 | 第117-118
页 |
| · 病毒、培养基和抗体 | 第117
页 |
| · 百合无症病毒的提纯 | 第117-118
页 |
| · 其他试验方法 | 第118
页 |
| 2.结果与分析 | 第118-120
页 |
| · 百合无症病毒的提纯 | 第118
页 |
| · 杂交瘤细胞的融合、筛选、克隆 | 第118
页 |
| · 腹水抗体制备、抗体类型及亚类鉴定、效价测定 | 第118-119
页 |
| · 单抗的Western-blot分析 | 第119
页 |
| · 以单抗为核心建立的ACP-ELISA方法的特异性检测 | 第119-120
页 |
| · 检测灵敏度的确定 | 第120
页 |
| · ACP-ELISA的田间检测应用 | 第120
页 |
| 3.讨论 | 第120-121
页 |
| 参考文献: | 第121-124
页 |
| 附录A 常用生化及分子生物学试剂与仪器 | 第124-126
页 |
| 附录B 常用缓冲液及培养基配方 | 第126-132
页 |
| 附录C 缩略词表 | 第132-133
页 |
| 附录D 博士期间申请的专利及发表的论文和成果 | 第133
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