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天敌对稻飞虱捕食作用的评价方法研究--多重实时荧光定量PCR方法的研究和初步应用

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天敌对稻飞虱捕食作用的评价方法研究--多重实时荧光定量PCR方法的研究和初步应用
论文目录
 
致谢第12-13 页
中文摘要第13-16 页
Abstract第16-19 页
缩略语第19-20 页
第一部分 文献综述及本研究的目的和意义第20-58 页
  第一章 稻田天敌对稻飞虱捕食作用研究概述第21-25 页
    1 稻飞虱发生概况第21 页
    2 水稻害虫天敌资源第21-22 页
    3 捕食性天敌对稻飞虱的控制作用第22-25 页
  第二章 节肢动物田间捕食作用的研究方法第25-40 页
    1 室内功能反应法第25 页
    2 田间直接观测法第25-26 页
    3 物理排除法第26 页
    4 消化道解剖法第26 页
    5 放射标记法第26-27 页
    6 色谱法第27 页
    7 蛋白质电泳分析法第27 页
    8 免疫学方法第27-30 页
      · 多克隆抗体免疫法第28 页
      · 单克隆抗体免疫法第28-30 页
    9 分子生物学方法第30-36 页
    10 节肢动物田间捕食作用研究常用的分子标记第36-38 页
      · 线粒体DNA的特点及应用第36-37 页
      · 核糖体DNAITS序列的特点及应用第37-38 页
      · 卫星DNA和微卫星DNA的特点及应用第38 页
    11 未来发展第38-40 页
  第三章 实时荧光定量PCR技术及其检测方法在节肢动物捕食研究中的应用第40-56 页
    1 实时荧光PCR技术的基本原理和方法第40-50 页
      · 基本原理第40 页
      · 实时荧光PCR的理论基础第40-42 页
      · 常用的实时荧光定量PCR方法及其原理第42-48 页
        · 荧光染料(Fluorescent Dyes)第42 页
        · 荧光标记探针(Fluorescently-labeled Probes)第42-46 页
        · 荧光标记引物(Fluorescently-labeled Primers)第46-48 页
      · 引物和探针的特点第48-50 页
        · 引物特点第48 页
        · 探针特点第48-50 页
    2 定量技术第50-52 页
      · 绝对定量第50 页
      · 相对定量第50-51 页
      · 对照第51-52 页
      · 参比染料第52 页
    3 荧光染料与淬灭基团的选择第52-53 页
    4 实时荧光定量PCR存在的问题及应用前景第53-54 页
    5 实时荧光定量PCR在昆虫捕食性天敌研究中的应用第54 页
    6 实时荧光定量PCR技术在昆虫学研究中的应用前景第54-56 页
  第四章 本研究的目的、意义和技术路线第56-58 页
    1 研究的目的和意义第56 页
    2 研究内容第56 页
    3 技术路线第56-58 页
第二部分 实验研究第58-143 页
  第一章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱COI、ITS1和ITS2基因的克隆、序列比对及分析第59-73 页
    引言第59 页
    1 材料与方法第59-63 页
      · 材料第59-60 页
      · 方法第60-63 页
        · 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱基因组DNA提取第60-61 页
        · 琼脂糖凝胶电泳检测第61 页
        · DNA浓度及纯度测定第61 页
        · PCR引物设计第61 页
        · 普通PCR反应第61-62 页
        · PCR产物纯化第62 页
        · DNA克隆技术第62-63 页
        · 重组克隆的筛选与鉴定第63 页
        · 序列测定及分析第63 页
    2 结果与分析第63-70 页
      · 三种飞虱基因组DNA样品的浓度和纯度第63-64 页
      · 三种飞虱COI基因的克隆、序列比对及其分析第64-66 页
        · PCR扩增三种飞虱的COI基因第64-65 页
        · 三种飞虱COI基因的克隆和鉴定第65 页
        · 三种飞虱COI基因的序列比对第65 页
        · 三种飞虱COI碱基组成及序列相似性分析第65-66 页
      · 三种飞虱ITS1和ITS2基因的克隆、序列比对及其分析第66-70 页
        · PCR扩增三种飞虱的ITS1、ITS2基因第66-67 页
        · 克隆和鉴定第67-68 页
        · 三种飞虱ITS1和ITS2基因的序列比对第68 页
        · 三种飞虱ITS1和1TS2基因序列比较分析第68-70 页
    3 讨论第70-73 页
      · 捕食性天敌猎物检测分子标记的选择第70-72 页
        · 线粒体基因的选择第70-71 页
        · 细胞核基因的选择第71-72 页
      · 引物设计前测序个体数目的确定第72-73 页
  第二章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱通用特异性引物设计、多重PCR方法的建立及在捕食研究中的应用第73-81 页
    引言第73-74 页
    1 材料与方法第74-77 页
      · 材料与试剂第74 页
      · 方法第74-77 页
        · CTAB法提取基因组DNA第74-75 页
        · 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色第75 页
        · 三种飞虱通用性特异引物设计第75-76 页
        · 单重PCR反应体系建立第76 页
        · 三重PCR反应体系建立第76 页
        · 天敌采集及总DNA的提取第76-77 页
    2 结果与分析第77-79 页
      · 三重PCR通用特异性引物的建立第77 页
      · 三种飞虱通用引物与稻田其它害虫与天敌之间的交叉反应第77-78 页
      · 三种飞虱多重PCR体系第78-79 页
      · 稻田捕食性天敌消化道内猎物种类的多重PCR定性检测第79 页
    3 讨论第79-81 页
  第三章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱多重实时荧光定量PCR方法的建立及优化第81-106 页
    引言第81-82 页
    1 材料与方法第82-85 页
      · 材料第82 页
      · 方法第82-85 页
        · TaqMan-MGB探针及引物设计第82 页
        · ALLGlo探针及引物设计第82 页
        · 线性化质粒标准品制备第82-83 页
        · 单重Real-time PCR反应体系的建立第83-84 页
        · 多重Real-time PCR检测的特异性第84 页
        · 多重Real-time PCR反应体系的建立及优化第84-85 页
        · 仪器设备第85 页
        · 数据分析第85 页
    2 结果与分析第85-102 页
      · 多重实时荧光定量PCR引物及探针的设计第85-86 页
      · 质粒标准品的制备第86-90 页
      · TaqMan-MGB探针三重实时荧光定量PCR体系的建立第90-94 页
        · TaqMan-MGB探针三重实时荧光定量PCR的特异性试验第90 页
        · TaqMan-MGB探针三重实时荧光PCR的灵敏性、动态范围及标准曲线第90-92 页
        · TaqMan-MGB探针三重实时荧光PCR的干扰性试验第92-93 页
        · TaqMan-MGB探针和ALLglo探针组合三重实时荧光定量干扰实验第93-94 页
      · ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR反应体系的建立及优化第94-102 页
        · ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR的特异性第94-95 页
        · 引物和探针浓度的优化第95-96 页
        · dNTP浓度的优化第96-97 页
        · 酶浓度的优化第97 页
        · ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR反应体系的灵敏性、动态范围及标准曲线第97-99 页
        · ALLGlo探针三重实时荧光PCR的干扰性试验第99-100 页
        · 捕食者基因组DNA对多重实时定量PCR的影响第100-101 页
        · ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR体系的建立第101-102 页
    3 讨论第102-106 页
      · 单重与多重实时荧光定量检测的比较第102-103 页
      · 三重实时荧光定量PCR检测体系的建立及其优化第103-106 页
        · 三重TaqMan-MGB探针第103-104 页
        · 三重ALLGlo探针实时荧光定量PCR检测体系的建立及其优化第104-106 页
  第四章 影响捕食者消化道中三种稻飞虱基因组DNA残留量检测的因子分析第106-113 页
    引言第106 页
    1 材料与方法第106-107 页
      · 实验设计第106-107 页
        · 单头白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱雌雄虫拷贝数的计算第106 页
        · CTAB法提取基因组DNA损失率的测定第106-107 页
        · 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱在拟环纹豹蛛体内的降解第107 页
      · 多重实时荧光定量PCR检测第107 页
      · 数据处理第107 页
    2 结果与分析第107-110 页
      · 单头白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱雌雄虫的拷贝数第107-108 页
      · CTAB提取基因组DNA方法回收率及损失率的测定第108 页
      · 猎物残留量与消化时间的关系第108-110 页
    3 讨论第110-113 页
      · 单头飞虱雌雄虫拷贝数的计算第110 页
      · CTAB裂解法提取基因组DNA的损失率第110-111 页
      · 猎物残留量与消化时间的关系第111-113 页
  第五章 应用多重实时荧光定量PCR方法评价稻田主要天敌对三种飞虱的捕食作用第113-140 页
    引言第113-114 页
    1 材料与方法第114-115 页
      · 材料与试剂第114 页
      · 田间调查及取样第114 页
      · 捕食性天敌样品处理第114 页
      · 多重实时荧光定量PCR检测第114-115 页
      · 数据处理第115 页
      · 残留量计算第115 页
    2 结果与分析第115-137 页
      · 白背飞虱、褐飞虱、灰飞虱和稻田常见捕食性天敌的种群动态第115-117 页
        · 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱的田间数量动态分析第115-116 页
        · 稻田常见捕食性天敌的数量动态分析第116-117 页
      · 捕食性天敌对三种飞虱的捕食作用第117-124 页
        · 捕食性天敌对三种飞虱多重实时荧光定量PCR检测的阳性反应率第117-118 页
        · 捕食性天敌消化道中猎物种类的分布第118-123 页
        · 捕食性天敌的猎物残留量比较第123-124 页
      · 捕食性天敌对三种飞虱捕食作用的动态研究第124-134 页
        · 拟环纹豹蛛对三种飞虱的捕食作用第124-127 页
        · 锥腹肖蛸对三种飞虱的捕食作用第127-129 页
        · 八斑球腹蛛对三种飞虱的捕食作用第129-131 页
        · 食虫瘤胸蛛对三种飞虱的捕食作用第131-133 页
        · 黑肩绿盲蝽对三种飞虱的捕食作用第133-134 页
      · 不同捕食者对同一猎物捕食作用平均残留的比较第134-137 页
        · 不同捕食者对白背飞虱捕食作用平均残留的比较第134-135 页
        · 不同捕食者对褐飞虱捕食作用平均残留的比较第135-136 页
        · 不同捕食者对灰飞虱捕食作用平均残留的比较第136-137 页
    3 讨论第137-140 页
      · 捕食性天敌在水稻整个生长期对三种飞虱的阳性率和平均残留第137-138 页
      · 捕食性天敌消化道内飞虱残留种类、构成及动态动态第138 页
      · 捕食性天敌对飞虱捕食作用的比较第138-140 页
  第六章 总讨论第140-143 页
    1.研究的意义第140-141 页
    2.研究的创新点第141-142 页
    3.进一步研究内容第142-143 页
参考文献第143-166 页

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