论文目录 | |
致谢 | 第12-13
页 |
中文摘要 | 第13-16
页 |
Abstract | 第16-19
页 |
缩略语 | 第19-20
页 |
第一部分 文献综述及本研究的目的和意义 | 第20-58
页 |
第一章 稻田天敌对稻飞虱捕食作用研究概述 | 第21-25
页 |
1 稻飞虱发生概况 | 第21
页 |
2 水稻害虫天敌资源 | 第21-22
页 |
3 捕食性天敌对稻飞虱的控制作用 | 第22-25
页 |
第二章 节肢动物田间捕食作用的研究方法 | 第25-40
页 |
1 室内功能反应法 | 第25
页 |
2 田间直接观测法 | 第25-26
页 |
3 物理排除法 | 第26
页 |
4 消化道解剖法 | 第26
页 |
5 放射标记法 | 第26-27
页 |
6 色谱法 | 第27
页 |
7 蛋白质电泳分析法 | 第27
页 |
8 免疫学方法 | 第27-30
页 |
· 多克隆抗体免疫法 | 第28
页 |
· 单克隆抗体免疫法 | 第28-30
页 |
9 分子生物学方法 | 第30-36
页 |
10 节肢动物田间捕食作用研究常用的分子标记 | 第36-38
页 |
· 线粒体DNA的特点及应用 | 第36-37
页 |
· 核糖体DNAITS序列的特点及应用 | 第37-38
页 |
· 卫星DNA和微卫星DNA的特点及应用 | 第38
页 |
11 未来发展 | 第38-40
页 |
第三章 实时荧光定量PCR技术及其检测方法在节肢动物捕食研究中的应用 | 第40-56
页 |
1 实时荧光PCR技术的基本原理和方法 | 第40-50
页 |
· 基本原理 | 第40
页 |
· 实时荧光PCR的理论基础 | 第40-42
页 |
· 常用的实时荧光定量PCR方法及其原理 | 第42-48
页 |
· 荧光染料(Fluorescent Dyes) | 第42
页 |
· 荧光标记探针(Fluorescently-labeled Probes) | 第42-46
页 |
· 荧光标记引物(Fluorescently-labeled Primers) | 第46-48
页 |
· 引物和探针的特点 | 第48-50
页 |
· 引物特点 | 第48
页 |
· 探针特点 | 第48-50
页 |
2 定量技术 | 第50-52
页 |
· 绝对定量 | 第50
页 |
· 相对定量 | 第50-51
页 |
· 对照 | 第51-52
页 |
· 参比染料 | 第52
页 |
3 荧光染料与淬灭基团的选择 | 第52-53
页 |
4 实时荧光定量PCR存在的问题及应用前景 | 第53-54
页 |
5 实时荧光定量PCR在昆虫捕食性天敌研究中的应用 | 第54
页 |
6 实时荧光定量PCR技术在昆虫学研究中的应用前景 | 第54-56
页 |
第四章 本研究的目的、意义和技术路线 | 第56-58
页 |
1 研究的目的和意义 | 第56
页 |
2 研究内容 | 第56
页 |
3 技术路线 | 第56-58
页 |
第二部分 实验研究 | 第58-143
页 |
第一章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱COI、ITS1和ITS2基因的克隆、序列比对及分析 | 第59-73
页 |
引言 | 第59
页 |
1 材料与方法 | 第59-63
页 |
· 材料 | 第59-60
页 |
· 方法 | 第60-63
页 |
· 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱基因组DNA提取 | 第60-61
页 |
· 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第61
页 |
· DNA浓度及纯度测定 | 第61
页 |
· PCR引物设计 | 第61
页 |
· 普通PCR反应 | 第61-62
页 |
· PCR产物纯化 | 第62
页 |
· DNA克隆技术 | 第62-63
页 |
· 重组克隆的筛选与鉴定 | 第63
页 |
· 序列测定及分析 | 第63
页 |
2 结果与分析 | 第63-70
页 |
· 三种飞虱基因组DNA样品的浓度和纯度 | 第63-64
页 |
· 三种飞虱COI基因的克隆、序列比对及其分析 | 第64-66
页 |
· PCR扩增三种飞虱的COI基因 | 第64-65
页 |
· 三种飞虱COI基因的克隆和鉴定 | 第65
页 |
· 三种飞虱COI基因的序列比对 | 第65
页 |
· 三种飞虱COI碱基组成及序列相似性分析 | 第65-66
页 |
· 三种飞虱ITS1和ITS2基因的克隆、序列比对及其分析 | 第66-70
页 |
· PCR扩增三种飞虱的ITS1、ITS2基因 | 第66-67
页 |
· 克隆和鉴定 | 第67-68
页 |
· 三种飞虱ITS1和ITS2基因的序列比对 | 第68
页 |
· 三种飞虱ITS1和1TS2基因序列比较分析 | 第68-70
页 |
3 讨论 | 第70-73
页 |
· 捕食性天敌猎物检测分子标记的选择 | 第70-72
页 |
· 线粒体基因的选择 | 第70-71
页 |
· 细胞核基因的选择 | 第71-72
页 |
· 引物设计前测序个体数目的确定 | 第72-73
页 |
第二章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱通用特异性引物设计、多重PCR方法的建立及在捕食研究中的应用 | 第73-81
页 |
引言 | 第73-74
页 |
1 材料与方法 | 第74-77
页 |
· 材料与试剂 | 第74
页 |
· 方法 | 第74-77
页 |
· CTAB法提取基因组DNA | 第74-75
页 |
· 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色 | 第75
页 |
· 三种飞虱通用性特异引物设计 | 第75-76
页 |
· 单重PCR反应体系建立 | 第76
页 |
· 三重PCR反应体系建立 | 第76
页 |
· 天敌采集及总DNA的提取 | 第76-77
页 |
2 结果与分析 | 第77-79
页 |
· 三重PCR通用特异性引物的建立 | 第77
页 |
· 三种飞虱通用引物与稻田其它害虫与天敌之间的交叉反应 | 第77-78
页 |
· 三种飞虱多重PCR体系 | 第78-79
页 |
· 稻田捕食性天敌消化道内猎物种类的多重PCR定性检测 | 第79
页 |
3 讨论 | 第79-81
页 |
第三章 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱多重实时荧光定量PCR方法的建立及优化 | 第81-106
页 |
引言 | 第81-82
页 |
1 材料与方法 | 第82-85
页 |
· 材料 | 第82
页 |
· 方法 | 第82-85
页 |
· TaqMan-MGB探针及引物设计 | 第82
页 |
· ALLGlo探针及引物设计 | 第82
页 |
· 线性化质粒标准品制备 | 第82-83
页 |
· 单重Real-time PCR反应体系的建立 | 第83-84
页 |
· 多重Real-time PCR检测的特异性 | 第84
页 |
· 多重Real-time PCR反应体系的建立及优化 | 第84-85
页 |
· 仪器设备 | 第85
页 |
· 数据分析 | 第85
页 |
2 结果与分析 | 第85-102
页 |
· 多重实时荧光定量PCR引物及探针的设计 | 第85-86
页 |
· 质粒标准品的制备 | 第86-90
页 |
· TaqMan-MGB探针三重实时荧光定量PCR体系的建立 | 第90-94
页 |
· TaqMan-MGB探针三重实时荧光定量PCR的特异性试验 | 第90
页 |
· TaqMan-MGB探针三重实时荧光PCR的灵敏性、动态范围及标准曲线 | 第90-92
页 |
· TaqMan-MGB探针三重实时荧光PCR的干扰性试验 | 第92-93
页 |
· TaqMan-MGB探针和ALLglo探针组合三重实时荧光定量干扰实验 | 第93-94
页 |
· ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR反应体系的建立及优化 | 第94-102
页 |
· ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR的特异性 | 第94-95
页 |
· 引物和探针浓度的优化 | 第95-96
页 |
· dNTP浓度的优化 | 第96-97
页 |
· 酶浓度的优化 | 第97
页 |
· ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR反应体系的灵敏性、动态范围及标准曲线 | 第97-99
页 |
· ALLGlo探针三重实时荧光PCR的干扰性试验 | 第99-100
页 |
· 捕食者基因组DNA对多重实时定量PCR的影响 | 第100-101
页 |
· ALLGlo探针三重实时荧光定量PCR体系的建立 | 第101-102
页 |
3 讨论 | 第102-106
页 |
· 单重与多重实时荧光定量检测的比较 | 第102-103
页 |
· 三重实时荧光定量PCR检测体系的建立及其优化 | 第103-106
页 |
· 三重TaqMan-MGB探针 | 第103-104
页 |
· 三重ALLGlo探针实时荧光定量PCR检测体系的建立及其优化 | 第104-106
页 |
第四章 影响捕食者消化道中三种稻飞虱基因组DNA残留量检测的因子分析 | 第106-113
页 |
引言 | 第106
页 |
1 材料与方法 | 第106-107
页 |
· 实验设计 | 第106-107
页 |
· 单头白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱雌雄虫拷贝数的计算 | 第106
页 |
· CTAB法提取基因组DNA损失率的测定 | 第106-107
页 |
· 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱在拟环纹豹蛛体内的降解 | 第107
页 |
· 多重实时荧光定量PCR检测 | 第107
页 |
· 数据处理 | 第107
页 |
2 结果与分析 | 第107-110
页 |
· 单头白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱雌雄虫的拷贝数 | 第107-108
页 |
· CTAB提取基因组DNA方法回收率及损失率的测定 | 第108
页 |
· 猎物残留量与消化时间的关系 | 第108-110
页 |
3 讨论 | 第110-113
页 |
· 单头飞虱雌雄虫拷贝数的计算 | 第110
页 |
· CTAB裂解法提取基因组DNA的损失率 | 第110-111
页 |
· 猎物残留量与消化时间的关系 | 第111-113
页 |
第五章 应用多重实时荧光定量PCR方法评价稻田主要天敌对三种飞虱的捕食作用 | 第113-140
页 |
引言 | 第113-114
页 |
1 材料与方法 | 第114-115
页 |
· 材料与试剂 | 第114
页 |
· 田间调查及取样 | 第114
页 |
· 捕食性天敌样品处理 | 第114
页 |
· 多重实时荧光定量PCR检测 | 第114-115
页 |
· 数据处理 | 第115
页 |
· 残留量计算 | 第115
页 |
2 结果与分析 | 第115-137
页 |
· 白背飞虱、褐飞虱、灰飞虱和稻田常见捕食性天敌的种群动态 | 第115-117
页 |
· 白背飞虱、褐飞虱和灰飞虱的田间数量动态分析 | 第115-116
页 |
· 稻田常见捕食性天敌的数量动态分析 | 第116-117
页 |
· 捕食性天敌对三种飞虱的捕食作用 | 第117-124
页 |
· 捕食性天敌对三种飞虱多重实时荧光定量PCR检测的阳性反应率 | 第117-118
页 |
· 捕食性天敌消化道中猎物种类的分布 | 第118-123
页 |
· 捕食性天敌的猎物残留量比较 | 第123-124
页 |
· 捕食性天敌对三种飞虱捕食作用的动态研究 | 第124-134
页 |
· 拟环纹豹蛛对三种飞虱的捕食作用 | 第124-127
页 |
· 锥腹肖蛸对三种飞虱的捕食作用 | 第127-129
页 |
· 八斑球腹蛛对三种飞虱的捕食作用 | 第129-131
页 |
· 食虫瘤胸蛛对三种飞虱的捕食作用 | 第131-133
页 |
· 黑肩绿盲蝽对三种飞虱的捕食作用 | 第133-134
页 |
· 不同捕食者对同一猎物捕食作用平均残留的比较 | 第134-137
页 |
· 不同捕食者对白背飞虱捕食作用平均残留的比较 | 第134-135
页 |
· 不同捕食者对褐飞虱捕食作用平均残留的比较 | 第135-136
页 |
· 不同捕食者对灰飞虱捕食作用平均残留的比较 | 第136-137
页 |
3 讨论 | 第137-140
页 |
· 捕食性天敌在水稻整个生长期对三种飞虱的阳性率和平均残留 | 第137-138
页 |
· 捕食性天敌消化道内飞虱残留种类、构成及动态动态 | 第138
页 |
· 捕食性天敌对飞虱捕食作用的比较 | 第138-140
页 |
第六章 总讨论 | 第140-143
页 |
1.研究的意义 | 第140-141
页 |
2.研究的创新点 | 第141-142
页 |
3.进一步研究内容 | 第142-143
页 |
参考文献 | 第143-166
页 |