论文目录 | |
| 论文创新点 | 第10-11
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| 摘要 | 第11-13
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| Abstract | 第13-16
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| 研究意义 | 第16-17
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| 研究路线 | 第17-18
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| 第一部分 文献综述 | 第18-41
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| 第一章 传染性法氏囊病(IBD) | 第18-25
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| 定义 | 第18-19
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| 简史 | 第19
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| 流行病学 | 第19
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| 抗原性及毒力变异 | 第19-21
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| 发病机理和临床症状 | 第21-23
页 |
| 传染性法氏囊病的诊断 | 第23
页 |
| 预防和控制 | 第23-25
页 |
| 第二章 传染性法氏囊病病毒(IBDV) | 第25-34
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| 分类 | 第25-26
页 |
| 病毒结构和基因组结构 | 第26-27
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| 理化性质 | 第27
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| 病毒蛋白 | 第27-30
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| IBDV的复制 | 第30-34
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| 第三章 传染性法氏囊病病毒宿主转录组学研究进展 | 第34-41
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| Long-SAGE技术在IBDV宿主转录组学研究上的应用 | 第35-37
页 |
| 基因芯片技术在IBDV宿主转录组学研究上的应用 | 第37-40
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| 其他病原宿主转录组研究进展 | 第40-41
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| 第二部分 研究内容 | 第41-137
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| 第一章 IBDV对宿主基因表达的影响 | 第41-88
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| 摘要 | 第41-43
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| 1 材料与方法 | 第43-50
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| · Long-SAGE文库 | 第43
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| · 单克隆Vero细胞系的培养和总RNA的分离 | 第43-44
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| · 鸡胚成纤维细胞培养、接毒和总RNA提取 | 第44
页 |
| · 动物感染试验和法氏囊总RNA提取 | 第44-45
页 |
| · Real-time PCR引物设计 | 第45-50
页 |
| · 荧光定量PCR程序 | 第50
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| 2 结果 | 第50-71
页 |
| · Long-SAGE文库数据登录 | 第50-51
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| · Long-SAGE文库中表达变化基因汇总 | 第51-61
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| · 差异表达基因聚类 | 第61-63
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| · 荧光定量PCR验证 | 第63-68
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| · IBDV感染对鸡胚成纤维细胞中基因表达的影响 | 第68
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| · IBDV感染对法氏囊组织中基因表达的影响 | 第68-69
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| · IBDV感染Vero、CEF和BF的基因表达变化比较 | 第69
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| · 炎性因子在IBDV感染的CEF细胞中的表达变化 | 第69-70
页 |
| · 炎性因子在IBDV感染法氏囊组织中的表达变化 | 第70-71
页 |
| 3 讨论 | 第71-88
页 |
| · IBDV对细胞骨架的影响 | 第71-72
页 |
| · 免疫相关基因的表达变化 | 第72-73
页 |
| · mRNA转录及加工相关基因的表达变化 | 第73-74
页 |
| · 能量代谢相关基因的表达变化 | 第74-75
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| · 蛋白质合成相关基因的表达变化 | 第75-76
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| · 细胞增殖相关基因的表达变化 | 第76
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| · 表达IBDV VP243蛋白Vero细胞的基因表达变化 | 第76-77
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| · 表达IBDV VP5蛋白Vero细胞的基因表达变化 | 第77
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| · IBDV感染Vero、CEF和BF的基因表达变化比较 | 第77-78
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| · 促炎性细胞因子对IBDV致病性的作用 | 第78-88
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| 第二章 IBDV感染条件下Cofilin基因的表达变化 | 第88-99
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| 摘要 | 第88-89
页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92
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| · 细胞、病毒和试剂 | 第89
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| · CEF细胞的制备与接毒 | 第89
页 |
| · 间接免疫荧光试验(IFA) | 第89-90
页 |
| · Western-blotting鉴定 | 第90
页 |
| · 合成ADF和Cofilin C端13个氨基酸多肽 | 第90-91
页 |
| · 多肽偶联 | 第91
页 |
| · 小鼠免疫 | 第91
页 |
| · 细胞融合 | 第91-92
页 |
| · 杂交瘤细胞筛选 | 第92
页 |
| · 有限稀释法对阳性孔细胞进行克隆化 | 第92
页 |
| · 以腹水的形式大量制备单克隆抗体 | 第92
页 |
| 2 结果 | 第92-97
页 |
| · 兔抗Cofilin多抗与Vero细胞和CEF细胞的反应性 | 第92-93
页 |
| · Cofilin三维结构预测 | 第93
页 |
| · Cofilin多抗与Cofilin和ADF的反应性分析 | 第93-94
页 |
| · ADF和Cofilin单克隆抗体的制备 | 第94-95
页 |
| · IBDV感染CEF的VP3和cofilin蛋白检测 | 第95
页 |
| · IFA检测IBDV攻毒后肌肉组织和法氏囊组织中的VP3和Cofilin蛋白 | 第95-97
页 |
| 3 讨论 | 第97-99
页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒VP4、VP3蛋白单克隆及多克隆抗体的制备 | 第99-119
页 |
| 摘要 | 第99-100
页 |
| 1 材料与方法 | 第100-110
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| · 毒株、载体及主要试剂 | 第100
页 |
| · 传染性法氏囊病病毒VP4、VP3基因的克隆 | 第100-101
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| · 原核表达载体和真核表达载体的构建 | 第101
页 |
| · 连接反应 | 第101-102
页 |
| · 感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第102
页 |
| · 转化 | 第102
页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第102-103
页 |
| · 原核表达IBDV VP4、VP3蛋白与鉴定 | 第103-105
页 |
| · 重组IBDV VP4、VP3蛋白的纯化 | 第105
页 |
| · 转染级高纯度真核表达质粒的制备 | 第105-106
页 |
| · 细胞转染与VP4、VP3的真核表达 | 第106
页 |
| · 间接免疫荧光试验(IFA) | 第106-107
页 |
| · 抗IBDV VP3、VP4蛋白单克隆抗体制备 | 第107-109
页 |
| · CEF细胞制备与接毒 | 第109
页 |
| · 兔、鸡抗IBDV VP3、VP4多克隆抗体制备 | 第109-110
页 |
| 2 结果 | 第110-117
页 |
| · RT-PCR扩增 | 第110
页 |
| · IBDV VP3、VP4基因原核表达载体的构建 | 第110
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| · VP3、VP4蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达 | 第110-111
页 |
| · 传染性法氏囊病病毒VP3、VP4蛋白的表达优化与纯化 | 第111-112
页 |
| · IBDV VP3、VP4基因真核表达载体的构建 | 第112-113
页 |
| · IBDV VP3、VP4基因在Vero细胞中的表达 | 第113-114
页 |
| · 抗IBDV VP4、VP3蛋白单克隆抗体的制备 | 第114
页 |
| · 间接免疫荧光检测单克隆抗体的反应性 | 第114-116
页 |
| · Western blot检测单克隆抗体的反应性 | 第116
页 |
| · 兔、鸡抗IBDV VP3、VP4多克隆抗体的制备 | 第116-117
页 |
| 3 讨论 | 第117-119
页 |
| 第四章 不同毒力IBDV感染条件下鸡对VP4、VP3蛋白的免疫应答能力 | 第119-137
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| 摘要 | 第119-120
页 |
| 1 材料与方法 | 第120-123
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| · 仪器与试剂 | 第120
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| · 动物感染试验 | 第120-121
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| · VP3、VP4蛋白ELISA包被浓度的优化 | 第121-122
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| · 间接ELISA检测鸡血清中抗VP3、VP4抗体 | 第122
页 |
| · CEF细胞的制备与接毒 | 第122
页 |
| · 中和试验 | 第122-123
页 |
| 2 结果 | 第123-133
页 |
| · 攻毒后临床症状 | 第123
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| · 强弱毒感染血清中抗VP3、VP4抗体的IFA检测结果 | 第123-124
页 |
| · Western blot检测IBDV感染血清中的VP4蛋白特异性抗体 | 第124-125
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| · ELISA检测方法中VP3、VP4蛋白包被量的优化 | 第125-126
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| · IBDV NB株强毒感染血清抗体ELISA监测结果 | 第126-127
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| · IBDV NB株强毒感染血清VP4抗体ELISA监测结果 | 第127
页 |
| · IBDV NB株强毒感染血清VP3抗体监测结果 | 第127-128
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| · IBDV NB株强毒攻毒鸡血清中和抗体与其他抗体的比较 | 第128-129
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| · VP3、VP4 ELISA抗体与病毒中和抗体的统计学关系 | 第129
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| · 不同毒力IBDV毒株感染条件下鸡对VP蛋白的免疫应答 | 第129-130
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| · 不同毒力IBDV感染后的VP4抗体效价 | 第130-132
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| · IBDV VP4、VP3蛋白在法氏囊组织中的表达分析 | 第132-133
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| 3 讨论 | 第133-137
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| 全文总结 | 第137-138
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| 参考文献 | 第138-147
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| 第三部分 附录 | 第147-161
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| 缩写词索引 | 第147-149
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| 本研究所涉及基因的主要功能 | 第149-153
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| 常用试剂及仪器 | 第153-155
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| 常用缓冲液及培养基配方 | 第155-161
页 |
| 致谢 | 第161
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