论文目录 | |
| 致谢 | 第1-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 油料作物种子中的油脂及脂肪酸 | 第12-13页 |
| 2 油脂的生物合成及调控 | 第13-16页 |
| 2.1 植物脂肪酸的生物合成 | 第13-14页 |
| 2.2 植物油脂的生物合成 | 第14-15页 |
| 2.3 油脂脱氢酶FAD2 基因的研究进展 | 第15-16页 |
| 2.3.1 植物FAD2 基因的研究进展 | 第15页 |
| 2.3.2 花生FAD2 基因研究进展 | 第15-16页 |
| 3 种子油脂的降解及调控 | 第16-18页 |
| 4 蛋白质组学及其应用 | 第18-22页 |
| 4.1 蛋白质学研究概述 | 第18页 |
| 4.2 蛋白质组与基因组及转录组 | 第18-19页 |
| 4.3 蛋白质组学研究技术进展 | 第19-20页 |
| 4.4 植物蛋白基因组学 | 第20页 |
| 4.5 国内外植物发育蛋白质组学研究进展 | 第20-22页 |
| 4.5.1 植物种子不同生长阶段的蛋白质组学研究 | 第20-21页 |
| 4.5.2 花生蛋白质组学研究概况 | 第21-22页 |
| 5 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 花生籽仁不同发育时期脂肪酸积累与降解模式研究 | 第23-31页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-24页 |
| 2.1 供试材料 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 取材方法 | 第23-24页 |
| 2.2.2 不同时期籽仁含油量与脂肪酸含量的测定 | 第24页 |
| 3 结果分析 | 第24-29页 |
| 3.1 粗脂肪在不同生长阶段的积累和代谢 | 第24-25页 |
| 3.2 脂肪酸的相对含量在不同生长阶段的变化 | 第25-27页 |
| 3.3 花生籽仁在发育过程中脂肪酸相对含量与含油量的相关分析 | 第27-28页 |
| 3.4 籽仁萌发后过程中脂肪酸相对含量的相关分析 | 第28-29页 |
| 4 结论与讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 花生种子在不同发育时期油体的显微结构分析 | 第31-38页 |
| 1 引言 | 第31-32页 |
| 2 材料方法 | 第32-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第32页 |
| 2.1.1 试验所需试剂及配置 | 第32页 |
| 2.2 取材方法 | 第32页 |
| 2.3 花生不同发育时期籽仁和萌发后子叶的观测 | 第32页 |
| 2.4 激光共聚焦扫描切片制作与观察 | 第32页 |
| 2.5 图片处理与数据统计 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.1 花生籽仁不同发育及萌发后时期的形态特征 | 第33页 |
| 3.2 不同发育时期花生子叶细胞中油体的分布及比较 | 第33-34页 |
| 3.3 不同萌发后时期花生子叶细胞中油体的分布 | 第34-35页 |
| 3.4 不同发育时期花生籽仁子叶细胞内油体含量的统计分析 | 第35-36页 |
| 4 结论与讨论 | 第36-38页 |
| 4.1 花生子叶细胞在不同时期油体动态的细胞学特征变化 | 第36页 |
| 4.2 花生油体与油脂动态变化过程的相关性分析 | 第36页 |
| 4.3 花生油体动态相关蛋白表达变化与油脂积累过程过程的关联性分析 | 第36-38页 |
| 第四章 花生种子发育及萌发后不同时期蛋白质组学分析 | 第38-60页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-44页 |
| 2.1 花生材料 | 第38-39页 |
| 2.2 试验方法 | 第39-44页 |
| 2.2.1 取材方法 | 第39页 |
| 2.2.2 花生子叶总蛋白制备 | 第39页 |
| 2.2.3 SDS‐PAGE电泳检测 | 第39页 |
| 2.2.4 蛋白质的酶解 | 第39-40页 |
| 2.2.5 多肽的i TRAQ标记 | 第40页 |
| 2.2.6 iTRAQ标记多肽的反相色谱分离 | 第40页 |
| 2.2.7 基于QE的液质联用分析 | 第40页 |
| 2.2.8 蛋白质组数据分析 | 第40-41页 |
| 2.2.9 花生种子总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.10 反转录合成cDNA | 第42页 |
| 2.2.11 引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| 2.2.12 RT‐PCR反应体系及程序 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-57页 |
| 3.1 花生籽仁不同发育时期及萌发后蛋白质的SDS‐PAGE及图谱分析 | 第44-45页 |
| 3.2 蛋白测序质谱鉴定质量评估‐肽段匹配误差 | 第45页 |
| 3.3 蛋白质质谱基本信息 | 第45-46页 |
| 3.4 GO功能聚类分析及COG注释分析 | 第46-48页 |
| 3.5 差异蛋白筛选结果 | 第48-49页 |
| 3.6 不同时期差异蛋白GO的显著性富集分析 | 第49-51页 |
| 3.7 不同时期差异蛋白pathway的显著性富集分析 | 第51-52页 |
| 3.8 与脂类代谢相关旳差异蛋白 | 第52-55页 |
| 3.9 RT‐PCR验证 | 第55-57页 |
| 3.9.1 总RNA的提取以及检测 | 第55-56页 |
| 3.9.2 有关脂质代谢蛋白的RT‐PCR分析 | 第56-57页 |
| 4 结论与讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 发育过程中与油脂合成代谢相关蛋白质的表达变化及功能分析 | 第57-59页 |
| 4.2 萌发过程中与油脂降解相关蛋白的表达变化及功能分析 | 第59-60页 |
| 第五章 花生油脂合成关键基因FAD2 基因家族及CRISPR‐Cas9 载体的构建和表达 | 第60-79页 |
| 1.引言 | 第60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-67页 |
| 2.1 试验材料 | 第60-62页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第60-61页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第61页 |
| 2.1.3 试剂耗材 | 第61页 |
| 2.1.4 主要试剂的配置 | 第61-62页 |
| 2.1.5 DNA测序 | 第62页 |
| 2.2 总RNA提取及cDNA的合成 | 第62页 |
| 2.3 基因组DNA的提取 | 第62页 |
| 2.4 发育的花生种子中构建及筛选c DNA文库 | 第62-63页 |
| 2.5 FAD2 基因多重序列比对和系统发育分析 | 第63页 |
| 2.6 实时定量PCR分析 | 第63页 |
| 2.7 CRISPR/Cas9 载体的构建 | 第63-67页 |
| 2.7.1 CRISPR/Cas9 靶点选择 | 第63-64页 |
| 2.7.2 FAD2 基因sg RNA靶位点序列引物的设计 | 第64-65页 |
| 2.7.4 sg RNA与Cas9表达载体的整合 | 第65-66页 |
| 2.7.5 构建好的sgRNA-Cas9 载体转化到农杆菌载体 LBA4404 中及验证 | 第66-67页 |
| 2.7.6 农杆菌介导的转化 | 第67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-76页 |
| 3.1 花生FAD2 基因家族成员的克隆与序列分析 | 第67-68页 |
| 3.2 花生AhFAD2 氨基酸序列同源性分析 | 第68-69页 |
| 3.3 花生AhFAD2 基因蛋白的结构域分析 | 第69-72页 |
| 3.4 FAD2 基因的系统进化分析 | 第72-73页 |
| 3.5 AhFAD2 基因不同组织的表达模式 | 第73页 |
| 3.6 CRISPR/Cas9 载体的构建 | 第73-75页 |
| 3.6.1 AhFAD2‐1 基因靶位点的查找及确定 | 第73-74页 |
| 3.6.2 携带FAD2 基因靶位点的sg RNA载体的鉴定 | 第74-75页 |
| 3.6.3 sg RNA‐Cas9载体的构建 | 第75页 |
| 3.7 转基因种子的PCR检测 | 第75-76页 |
| 3.8 靶位点有效性及突变效率的检测 | 第76页 |
| 4 结论与讨论 | 第76-79页 |
| 4.1 花生FAD2 基因家族成员的特性及功能分化 | 第76-77页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9体系应用于根癌农杆菌诱导花生的转化 | 第77-78页 |
| 4.3 利用CRISPR/Cas9体系构建花生基因的突变体库 | 第78-79页 |
| 第六章 全文结论 | 第79-82页 |
| 6.1 花生种子不同发育及萌发后时期脂肪酸的积累与降解模式 | 第79页 |
| 6.2 花生种子在不同发育及萌发后时期的油体的显微结构分析 | 第79-80页 |
| 6.3 花生种子发育及萌发后时期蛋白质组学分析 | 第80页 |
| 6.4 花生油脂合成关键基因FAD2 基因家族及CRISPPR‐CAS9 载体的构建及表达 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-101页 |
| 英文摘要 | 第101-103页 |
